仔猪产气荚膜梭菌肠毒血症病原诊断

198 8年北京、河北发生一种急性死亡的新生仔猪传染病 ,此后 ,疾病逐渐蔓延到国内其他地区 ,发生率与死亡率也日益增高 ,经对来自 8个省市 48个猪场 1 79窝猪中死于此病的 3 0 1头仔猪检查分离病原 ,获得 2 0 7个分离菌株 ,经过鉴定 ,将其中 1 41株鉴定为产气荚膜梭菌 A型 ,另6 6株为 C型。结合着流行病学情况 ,临床症状和病理学观察结果 ,肯定了此种疾病即是由产气荚膜梭菌 A型和 C型引起的一种仔猪肠毒血症。

仔猪产气荚膜梭菌肠毒血症病原分离及疫苗研究Ⅵ.疫苗的本动物免疫效力试验及保存期试验

用实验室制备的仔猪产气荚膜梭菌肠毒血症A型疫苗、C型疫苗和AC型二价疫苗各3批,分别免疫接种初产或无特异性中和抗体的经产怀孕后期妊娠母猪36头。免疫母猪所产仔猪在其采食初乳后,分别攻击致死量的产气荚膜梭菌毒素。试验结果表明,3种疫苗对免疫母猪所产仔猪的保护率分别为100%、100%和96.63%。疫苗保存期试验表明,疫苗在2～8℃条件下保存3年,其效力保持不变。

仔猪产气荚膜梭菌肠毒血症病原诊断及疫苗研究 Ⅲ.7株A型产气荚膜梭菌菌株的产毒素试验

本试验对7株A型产气荚膜梭菌菌株在不同培养基、不同培养温度和不同培养时间的产毒力进行了试验。结果表明,培养基的种类和培养时间对菌株的产毒素能力影响较大,而培养温度则影响较小。所试菌株中C571菌株的产毒素能力最强,是制备疫苗的最佳菌株。

羊快疫、猝狙（或羔羊痢疾）、肠毒血症灭活疫苗复合培养基的研究Ⅳ．中试生产及其检验结果

羊快疫、猝狙（或羔羊痢疾）、肠毒血症灭活疫苗复合培养基的研究Ⅳ．中试生产及其检验结果屠伟英，蒋玉文，赵代民（中国兽药监察所）谷兰秀，包云瑞，吴钟灵（内蒙古生物药品厂）用于生产羊快疫、猝狙（或羔痢）、肠毒血症灭活疫苗的复合培养基，在试验室工作获得满意结...

仔猪产气荚膜梭菌肠毒血症疫苗生产用菌种的筛选

在试管中对 4 5株产气荚膜梭菌A型菌 (Cl .PerfringensA型 )进行了初步筛选 ,用于制作仔猪肠毒血症疫苗的菌株。这 4 5株全部能产生致死性、坏死性、溶血性的α 毒素 ,其中 35 %可产生肠毒素 ,4 2 .5 %能形成芽孢。C5 7- 1株虽然不产生肠毒素 ,也不形成芽孢 ,但其毒性最强 ,在 1ml培养液中含有 10 0MLD。由于猪肠毒血症是由α 毒素引起的 ,与肠毒素无关 。

仔猪产气荚膜梭菌肠毒血症病原诊断及疫苗研究V.疫苗的制备、检验和田间试验

将试验确定的产毒力强的产气荚膜梭菌A型、C型菌种,选用复合培养基,经培养、灭活脱毒、浓缩和冷冻干燥,制备多批肠毒血症A型、C型和AC型二价干粉灭活疫苗。采用免疫攻毒或中和试验方法对研制的疫苗进行效力检验,疫苗100%合格,达到《规程》规定的标准。在13个省进行大规模田间试验的结果表明,所研制的疫苗性能良好,安全有效。母猪接种疫苗后无一例不良反应发生,并且仔猪生后健康,能够有效地预防和控制该病的发生和流行。

对肉毒梭菌(C)型菌苗安全性试验豚鼠出现局部反应的检查

前言根据历次产品抽检结果及生产单位反映,对肉毒梭菌(C)型菌苗进行安全性检验的豚鼠,于注射部位经常出现不同程度的肿胀、化脓和破溃。为检查这一问题出现的原因及对菌苗的安全性的关系,决定在甲醛的含量、不同批的铝胶。

仔猪产气荚膜梭菌肠毒血症病原诊断及疫苗研究IV.肠毒血症C型疫苗生产用菌种的确定

试验证明用单一菌株C59-2生产C型产气荚膜梭菌肠毒血症干粉灭活疫苗,其效力可以达到《规程》要求,并且简化了生产工艺,降低了生产成本,提高了生产效率。疫苗免疫的兔血清可分别中和原来3个制苗用菌株所产生的外毒素。

羊快疫、猝狙（或羔羊痢疾）肠毒血症灭活疫苗复合培养基的研究Ⅰ、培养基配方的选择、产毒素试验及疫苗的制备和检验

研制出一种适用于羊快疫、猝狙（或羔羊痢疾）和肠毒血症灭活疫苗生产的复合培养基。该培养基配方简单，配制方便，省时省力，不需要肝和肉，原材料来源广泛，若用该培养基替代现用的培养基，可大大地降低这类疫苗的生产成本。经过产毒素试验和最适培养条件的试验，证明该培养基替代现用培养基生产疫苗是可行的。用该培养基在实验室制备的疫苗，经效力和安全性检验，均达到了《规程》的标准。

水貂犬瘟热、病毒性肠炎和肉毒梭菌中毒三联疫苗的研究

用FPV弱毒、CDV弱毒和肉毒梭菌C型疫苗研制成功了水貂三联疫苗。该苗安全可靠、免疫原性强、免疫期达6个月以上,同各单苗相比抗体产生期及效价相近,室温可保存3天;4℃可保存2周;-20℃可保存6个月。该苗的免疫剂量为2ml,其中CDV和FPV弱毒滴度分别为10^(3.0),肉菌梭菌C型疫苗为2mg/ml。现场应用26000余只水貂,抗体阳转率达90％以上。

羊快疫、猝狙（或羔羊痢疾）肠毒血症灭活疫苗复合培养基的研究Ⅲ、复合培养基制的疫苗保存期试验

羊快疫、猝狙（或羔羊痢疾）肠毒血症灭活疫苗复合培养基的研究Ⅲ、复合培养基制的疫苗保存期试验蒋玉文，屠伟英，赵代民（中国兽药监察所）疫苗的保存期是质量的重要指标之一，我国目前生产使用的羊块疫、猝狙（或羔羊痢疾）、肠毒血症灭活疫苗（简称三联或四防苗）的保...

抗产气荚膜梭菌ε毒素单克隆抗体的研制和部分特性鉴定

小鼠SP2/0骨髓瘤细胞和用产气荚膜梭菌ε类毒素免疫BALB/C鼠的脾细胞,以PEG为融合剂进行融合,伙得分泌抗产气荚膜梭菌ε毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株13株。经鉴定,杂交瘤所分泌的单克隆抗体在ELISA中均特异地与产气荚膜梭菌ε毒素反应,而不与α和β毒素反应。13株单克隆抗体均为IgG_1亚类,经毒素抗毒素中和试验 测定,13株单克隆抗体中,12株具有中和ε毒素的活性。

肉毒梭菌C型干粉疫苗免疫水貂试验的研究

本试验应用肉毒棱菌C型干粉疫苗,对水貂进行免疫试验。试验结果表明,该疫苗对水貂安全有效,接种后14天开始产生免疫力,21天形成坚强免疫力,能耐受100个M、L、D毒素的攻击。确定了最小免疫剂量为2mg,疫苗剂量4mg,免疫期达6个月,血清中和抗体滴度保持不变。疫苗在室温条件保存30天,-20℃保存6个月,效价不变。现场应用表明,该疫苗安全可靠,免疫原性好。

羊快疫、猝狙（或羔羊痢疾）肠毒血症灭活疫苗复合培养基的研究Ⅱ、复合培养基制的疫苗免疫期试验

羊快疫、猝狙（或羔羊痢疾）肠毒血症灭活疫苗复合培养基的研究Ⅱ、复合培养基制的疫苗免疫期试验蒋玉文，屠伟英，赵代民（中国兽药监察所）陈宝柱，许燕辉（内蒙古自治区兽医站）用复合培养基制备的三联或四防苗，免疫动物后其免疫持续期能否达到原菌苗的水平，这是确定...

应用杂交瘤技术研制产气荚膜梭菌ε抗毒素国际标准参考品的初步试验

测定了分泌抗产气荚膜梭菌ε毒素单克隆抗体的杂交瘤细胞株ε２－７在体内产生抗体的稳定性，并用ＢＡＬＢ／ｃ小鼠小批量地制备了三批抗ε毒素单克隆抗体的腹水制剂。用经国际标准ε抗毒素标定的ε毒素分别以Ｌ＋、Ｌ＋／５和Ｌ＋／１０法测定了这三批腹水抗体制剂所含的抗毒素国际单位。由于腹水抗体效价太低，Ｌ＋法未能测出结果。Ｌ＋／５法测定的每毫升腹水抗体所含国际单位分别为Ｎｏｌ２．９－３．３ＩＵ，Ｎｏ２３．３－６．７ＩＵ，Ｎｏ３３．３－４．０ＩＵ，Ｌ＋／ｌ０法测定的每毫升腹水抗体所含的国际单位分别为Ｎｏｌ７．１４－１０ＩＵ，Ｎｏ２５－８．３ＩＵ，Ｎｏ３８．３－１．２５ＩＵ。其中Ｎｏｌ和Ｎｏ３批腹水以Ｌ＋／５测定的结果较为稳定，但也是一个范围值，能否作为国际标准品的试用品有待进一步的试验。

兔病毒性出血症、兔出败、兔魏氏梭菌三联灭活疫苗研究

本文叙述了兔病毒性出血症、兔出败,A 型魏氏梭菌三联灭活疫苗研制的菌(毒)种选择、单苗和联苗的配制方法。对12批三联苗效检结果,有11批合格通过。总保护率病毒性出血症为98%(51/52)、兔出败为63.16%(36/57)、A 型魏氏梭菌为75.47%(40/53)。显示三种抗原成份配制成三联苗后,各成份间的免疫效力没有受到不良影响,仍具有良好的保护力。疫苗在4—10℃的保存期达1年。使用剂量为皮下2ml,最大安全量试验注射4ml、10ml 也安全。疫苗在山西、河北、北京等地试用2万余头份,反映安全有效。

产气荚膜梭菌ε毒素基因的克隆、表达及其抗血清的制备

PCR扩增B型产气荚膜梭菌C58-2株ε毒素完整基因,并将其插入到pGEM-TEasy载体中,构建克隆载体pGEM-T-ε。对克隆载体pGEM-T-ε进行双酶切,将得到的918bp片段以正确的阅读框架定向克隆于pET-28a(+)中,然后将重组质粒转化进宿主菌BL21(DE3)中,在37℃1mmol/LIPTG诱导下该基因获得良好表达。经SDS-PAGE分析,其表达的蛋白约为36600,与预期值一致。Western-blotting试验显示,该重组蛋白可被D型产气荚膜梭菌血清识别,表明该重组蛋白具备天然毒素相似的反应原性。重组ε毒素蛋白在菌液上清、超声波裂解上清和包涵体中均有分布,表明重组蛋白可同时以胞外、周质和胞浆的形式表达,且以周质方式为主。重组蛋白在胰酶活化前后均可致死小鼠,活化后毒力可为原来的150倍。以重组ε毒素蛋白作为抗原免疫家兔制备血清,效价测定结果表明,重组ε毒素蛋白抗血清每毫升可中和30000个小鼠MLD。毒素-抗毒素中和试验和琼脂扩散试验均表明,该抗血清具有ε毒素特异性。