灰色链霉菌RX-17溶菌酶R1的纯化及性质研究

通过硫酸铵分级沉淀 ,CM SephadexC 5 0、CM SepharoseFastFlow离子交换层析及Seph adexG 75凝胶过滤层析 ,从灰色链霉菌 (Streptomycesgriseus)RX 1 7的发酵上清液中得到了电泳纯的溶菌酶R1 ,回收率 6 89%。测得该酶分子量和等电点分别为 1 6 8kD和 9 1 0 ,作用于变链球菌 (Streptococcusmutans)Ingbritt的最适温度和pH分别为 70℃和 6 6。R1酶在 5 0℃以下及pH6～ 9的范围内保持稳定 ,60℃保温 1h ,残存酶活 2 0 3%。Mg2 +对酶有激活作用 ,而Zn2 +、Cu2 +、Fe2 +、Cd2 +、Pb2 +则使酶完全丧失活性 ,螯合剂、盐酸羟胺、碘乙酸抑制酶活 ,β 巯基乙醇及表面活性剂则对溶菌有部分促进作用。R1酶溶菌谱广泛 ,对多种卵清溶菌酶不能作用的G+、G 细菌均有溶解能力 ,对变链球菌、金黄色葡萄球菌 (Staphylococcusaureus)、乳杆菌(Lactobacillus)等则呈现高活性。

溶菌酶高产链霉菌RX-17的筛选及其特性研究

在添加变链球菌 (Streptococcusmutans)菌体的双层平板上 ,筛选到一株产溶菌酶能力较高的放线菌RX 17,将其初步归为链霉菌黄色类群 .对产酶进程监测表明 ,该菌产酶与生长密切相关 ,72h酶活力可达 185U/mL .RX 17所产溶菌酶溶菌谱广泛 ,能够溶解多种卵清溶菌酶不能作用的革兰氏阳性与阴性细菌 ,对金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)及变链球菌族细菌溶解能力较强 .通过CM SephadexC 5 0离子交换层析 ,对RX 17溶菌酶粗制品进行了初步分离 ,得到了 3个有溶菌活力的组分 .

灰色链霉菌RX-17溶菌酶R2的纯化及其酶学鉴定

从灰色链霉菌 (Streptomycesgriseus)RX 1 7的发酵液中 ,通过硫酸铵分级沉淀 ,CM SephadexC 5 0和CM SepharoseFastFlow离子交换层析 ,纯化得到了溶菌酶R2 .该酶分子量约为 2 4 8kD ,等电点约为 9 7,N端 1 5个氨基酸的顺序为DTSGVQGIDVSHWQG .R2酶溶解变链球菌Ingbritt(StreptococcusmutansIngbritt)的最适作用温度为 5 5℃ ,最适pH为 7 0 .5 0℃处理 1h ,R2酶残存酶活74 % ,碱性条件 (pH >9)下该酶保持稳定 .Zn2 + 、Cu2 + 、Fe2 + 、Cd2 + 、Pb2 + 可使酶完全失活 ,螯合剂、盐酸羟胺、溴替丁二酰亚胺及离子型去垢剂SDS抑制R2酶的溶菌作用 ,而非离子型去垢剂TritonX 1 0 0等则能促进溶菌 .R2酶溶菌谱广泛 ,能够溶解多种鸡卵清溶菌酶不能作用的革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌 .从对金黄色葡萄球菌 (Staphylococcusaureus)的高活性来看 ,该酶应分类为 β 1 ,4 N ,6 O 二乙酰胞壁质酶 (β 1 ,4 N ,6 O diacetylmuramidase) .

链霉菌RX-17产溶细菌酶的研究

通过正交试验,确定了链霉菌(Streptomycessp.)RX-17产溶细菌酶的最佳碳氮源比例即蔗糖3%,大豆蛋白胨1 25%,牛肉膏0 25%。最适培养条件的研究表明,通气量对该菌产酶十分关键。对酶的基本性质进行了研究,酶作用的最适温度和最适pH分别是60℃和6 0。在碱性范围内酶的稳定性较好,60℃1h残存酶活36 3%。溶菌活性对离子强度的变化高度敏感。溶菌谱测定显示,该酶对卵清溶菌酶不能作用的变链球菌(Streptococcusmutans)、金黄色葡萄球菌(Staphylococcusaureus)有很强的溶解活性。

链霉菌RX-17溶菌酶的产生条件及溶菌特异性研究

通过液体及平板溶菌活性测定 ,证明了灰色链霉菌 (Streptomycesgriseus)RX 17发酵液中存在对变链球菌 (Streptococcusmutans)Ingbritt有强力溶解作用的物质—RX 17溶菌酶。产酶培养基碳、氮源最适配比为蔗糖3 %、大豆蛋白胨 1.2 5%、牛肉膏 0 .2 % ;最适产酶温度为 3 3℃ ;高溶氧水平对酶的产生有利。溶菌特异性试验证实了RX 17溶菌酶对金黄色葡萄球菌 (Staphylococcusaureus)、乳脂链球菌 (S .cremoris)、保加利亚乳杆菌 (Lactoba cillusbulgaricus)、短乳杆菌 (L .brevis)、产氨短杆菌 (Brevibacteriumammoniagenes)及铜绿假单胞菌 (Pseudomonasaeruginosa)等多种G+ 、G-