真核细胞基因转录抑制的分子机理

基因转录水平的调控是个复杂的过程，该方面的研究多集中于转录激活的机制上，但转录抑制也在基因表达中起重要作用．研究发现，核小体可抑制ＲＮＡ聚合酶、转录因子与基因的结合，阻断转录起始．另外，基因转录抑制因子也可特异性地作用于转录过程．依作用机理，这些因子又可分为被动抑制因子和主动抑制因子两种．前者主要通过与激活因子竞争性结合基因的ＤＮＡ结合位点或消弱激活因子与ＤＮＡ结合的能力而减慢转录速率；后者通过与基因阻遏元件结合，直接抑制转录的起始．

疟原虫抗原表位与沙门氏菌鞭毛蛋白嵌合体的构建

疟原虫抗原B表位NKND是由本所寄生虫免疫室与分子生物学研究室合作发现的一个疟疾抗原表位。它存在于多种不同的疟原虫分离株。在其C末端加上一个D可以增强它与抗体的结合能力[1]。我们人工合成NKNDD和CST3的寡核昔酸片段并将之串联后插入沙门氏菌鞭毛蛋白表达载体。斑点杂交得到阳性克隆。序列分析鉴定为2拷贝NKNDD与2拷贝CST3的串联体。

人免疫缺陷病毒1型TAT蛋白点突变对其反式激活作用的影响

不同免疫缺陷病毒（ＨＩＶ－１，ＨＩＶ－２和ＳＩＶ）的Ｔａｔ均有３个高度保守的结构域：Ｃｙｓ富集域、核心域和碱性氨基酸富集域，用ＰＣＲ定点突变法在ＨＩＶ－１Ｔａｔ蛋白的这些区域引入单氨基酸或多氨基酸突变；构建了以ＨＩＶ－１ＬＴＲ－１５８到＋８Ｏ区域为启动子，含有不同突变点的突变Ｔａｔ基因表达质粒；以荧光酶基因为报告基因，瞬时共转染Ｊｕｒｋａｔ细胞：分析不同氨基酸突变对Ｔａｔ的反式激活作用的影响。结果发现，突变后的Ｔａｔ蛋白的活性均极大地降低或丧失，表明这些序列内的氨基酸的确定性对Ｔａｔ的活性至关重要。

疟原虫抗原B表位NKNDD和NANP串联重复片段与脊灰病毒全长cDNA嵌合体的构建

人工合成含有恶性疟原虫抗原B表位NKND的单拷贝抗原基因片段NKNDD和恶性疟原虫环子抱子蛋白CSP的重复性抗原B表位NANP的2拷贝基因片段，将NKNDD和（NANP）。分别进行自串联后克隆到中介载体PSKMM，得到一系列不同拷贝数的串联多拷贝克隆。从（NKNDD）n／PSKMM和（NANP）n／pSKMM的各拷贝克隆中挑选3、4、5、8拷贝的（NKNDD）n／PSKMM和4、6拷贝的（NANP）n／pSKMM，将（NKNDD）n和（NANP）n从中介载体转移到表达型载体pSV202H＋，得到3、4、5、8拷贝的（NKNDD）n和4、6拷贝的（NANP）n插入脊髓灰质炎病毒Ⅰ型Mahoney株全长cDNA的N－AgⅠ区域所构成的嵌合体。实验中由于引入了半定量杂交技术，使得单位DNA片段的系列串联和克隆过程明显简化。

疟原虫抗原B表位NKND在鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白中的表达

疟原虫抗原B表位NKND是由本课题组首先报道的一个新的疟疾抗原表位．它是存在于多种不同疟原虫分离株中的保守序列．以减毒沙门氏菌为载体制备口服活疫苗，方法简单，使用方便，其鞭毛蛋白有较强的免疫原性，有利于激发人体的细胞和体液免疫．人工合成8肽的实验中[2]发现NKNDD可增强NKND对相应抗体的亲和力．将人工合成的NKNDD寡核苷酸片段插入鼠伤寒沙门氏菌鞭毛蛋白表达体系中，经Western杂交鉴定，表达出具有多拷贝NKNDD表位的重组鞭毛蛋白．