新城疫病毒基因Ⅲ型强毒JS/7/05/Ch的拯救

新城疫病毒Ⅰ系苗Mukteswar株为中等毒力,野外分离株JS/7/05/Ch的基因组核苷酸与其具有高于99%的相似性,但其毒力却明显强于前者。为了给基因Ⅲ型NDV的遗传进化机制研究提供基础,本研究成功构建了JS/7/05/Ch株的反向遗传平台。首先根据GenBank上公布的基因Ⅲ型新城疫病毒JS/7/05/Ch株基因组全序列设计并合成8对引物,RT-PCR扩增目的片段后,分别依次亚克隆至pCR2.1载体中构建含有JS/7/05/Ch全长基因组cDNA的克隆质粒pJS/7/05/Ch,然后再通过特异性酶切位点将JS/7/05株全长基因组cDNA转移到TVT7R(0.0)转录载体中,成功构建出含JS/7/05/Ch株基因组全长cDNA的转录质粒pTVT/JS705。然后将该质粒与3个辅助质粒pCI-NP、pCI-P和pCI-L共转染BSR-T7/5细胞,转染60h后将该细胞及其上清接种鸡胚;血凝(HA)试验和RT-PCR结果表明JS/7/05/Ch株新城疫病毒被成功拯救。

鸡马立克氏病meq基因缺失疫苗(SC9-1株)的临床应用效果比较研究

鸡马立克氏病基因缺失活疫苗(SC9-1株)的临床试验分别在3个鸡场进行,试验鸡分别为1日龄雪山黄鸡20 600只、1日龄京红1号蛋鸡17 000只、1日龄北京油鸡9 732只。临床安全性试验观察期内,免疫鸡群的精神状态、采食、饮水情况、生长性能与对照组无异。临床免疫效力试验期间,将免疫SC9-1鸡群与免疫CVI988/Rispens(市售)鸡群进行对比,SC9-1鸡群的死淘率分别为2.7%与0.4%,均低于CVI988/Rispens免疫鸡群的3.7%与1.2%(P>0.05)。另外分别将免疫SC9-1的鸡群与免疫CVI988/Rispens的鸡群在6日龄时攻击马立克超强毒Md5(1 000 pfu/只),结果显示SC9-1株疫苗攻毒保护率分别为35/35与34/35,显著高于CVI988/Rispens株疫苗的25/35与27/35(P<0.05)。以上表明SC9-1株疫苗安全性良好,免疫效力较好,可能是一株理想的马立克氏病疫苗。

鸽新城疫灭活疫苗效力评价中实验鸽的筛选

为解决鸽新城疫灭活疫苗免疫效力评价中的标准鸽缺失问题,筛选满足要求的试验鸽。2019年3月对鸽场饲养管理和鸽群发病史情况进行调研,筛选合格鸽场;采血进行鸽新城疫抗体检测,排除高母源抗体鸽群;进一步检测鸽圆环、鸽腺病毒和鸽痘,排除感染上述易感病原鸽群;最后对选定的鸽隔离饲养一定时间,排除潜在的病原感染;采用筛选鸽进行鸽新城疫灭活苗免疫攻毒试验,验证是否满足试验的需求。通过调研,确定3家鸽场,从1月龄左右鸽群中随机选择50羽健康鸽进行检测,ND母源抗体为0~1∶32不等,均无鸽腺病毒感染,但有个别鸽存在圆环抗体或携带鸽痘病毒。从其中2家鸽场购回HI抗体≤1∶4,且无其他病原感染风险的鸽各25羽进行鸽新城疫灭活疫苗免疫攻毒试验,血清学检测结果显示,免疫组鸽免后28 d ND HI抗体在1∶16~1∶64之间,均值在1∶32以上;攻毒保护结果为,免疫组17/20~19/20保护,对照组均5/5发病,3~4羽死亡。通过鸽场调研初筛、新城疫HI抗体检测、鸽常见病原检测、隔离观察等步骤筛选的实验鸽可满足鸽新城疫灭活疫苗效力评价试验的要求,且结果稳定可靠。通过该研究筛选的实验鸽,满足试验需求、提高研究结果的可靠性和重复性,并在保证鸽用疫苗质量方面具有重要意义。