肾综合征出血热(HFRS)病毒在大鼠中的持续感染

汉坦病毒(Hantaviruses)作为引起人类肾综合征出血热(HFRS)的病原,广泛分布于全世界。自1976年从黑线姬鼠首次分离出汉坦病毒以来,又从一些啮齿动物和病人分离到与汉坦病毒抗原性相关的几株病毒。应用血清学和病毒学方法进一步证实了在全世界范围内汉坦样病毒在啮肯动物中的存在。但人们并不清楚这些病毒在慢性感染的啮齿动物中的生物学机制。为了研究啮齿类动物持续感染的机理,几年来人们一直致力于动物模型的建立,然而几乎在所有情况下,啮齿动物实验感染汉坦病毒后,动物虽有抗体反应,但无任何临床征象。

人类疱疹病毒7 U41的表达时相及细胞内定位研究

目的 :探讨人类疱疹病毒 7(humanherpesvirus 7,HHV - 7)U4 1的表达时相及细胞内定位。方法 :免疫荧光检测U4 1蛋白的细胞内定位 ,RT -PCR检测U4 1RNA的表达时相。结果 :免疫荧光检测显示 ,无论在HHV - 7感染细胞或HHV - 7U4 1转染细胞 ,U4 1蛋白都是仅在其胞核中弥漫性的分布。在分别加入CHX(cycloheximide)和PFA(phosphomoformicacid)作为蛋白合成和核酸合成抑制剂感染细胞中 ,U4 1的表达时相检测结果显示U4 1蛋白在HHV - 7感染细胞中是一早期表达蛋白。结论 :HHV - 7U4 1在病毒复制的早期表达 ,并积聚于细胞核中 ,可能与调控病毒DNA模板延伸以及病毒DNA的合成相关。

人类疱疹病毒7U41细胞内表达的探讨

目的 探讨人类疱疹病毒 7(humanherpesvirus 7,HHV 7)U4 1的表达时相及细胞内定位。方法 免疫荧光检测U4 1蛋白的细胞内定位 ,RT PCR检测U4 1RNA的表达时相。结果 免疫荧光检测显示 ,无论在HHV 7感染细胞或HHV 7U4 1转染细胞 ,U4 1蛋白都是仅在其胞核中弥漫性的分布。在分别加入CHX(cycloheximide)和PFA(phosphomo formicacid)作为蛋白合成和核酸合成抑制剂感染细胞中 ,U4 1的表达时相检测结果显示U4 1蛋白在HHV 7感染细胞中是一早期表达蛋白。结论 HHV 7U4 1在病毒复制的早期表达 ,并积累于细胞核中 。

人类疱疹病毒6型引起的细胞融合机制

目的 :观察人类疱疹病毒 6型 (HHV- 6 A)引起的细胞融合不依赖于病毒的复制 (FFWO)。方法 :细胞用 10 3- 4TCID50 HHV- 6感染 1h,在感染后 2～ 3d用 HE染色 ,观察细胞融合现象。 Vero细胞用 10 3- 4TCID50HHV- 6感染 1h后培养液中加入磷甲酸 (PFA ) (终浓度 30 0 m g· L- 1 )和环已酰亚胺 (CHX ) (终浓度10 0 mg· L- 1 ) ,分别在感染后 2 h和 2 4 h经 HE染色鉴定以确定是否产生 FFWO。结果 :HHV- 6 A感染细胞 2 h后可观察到细胞融合现象 ,加入 CHX时这种现象亦可观察到 ,提示 HHV- 6 A感染可引起 FFWO;这种细胞融合现象的出现依赖于 HHV- 6的受体 CD4 6表达于靶细胞表面。结论 :HHV- 6 A通过其受体 CD4 6在多种人类细胞引起 FFWO。

人类疱疹病毒7开放读码框U41功能的初步探讨

应用免疫荧光检测U41蛋白的细胞内定位,RT-PCR检测U41RNA的表达时相,DNA结合试验检测U41蛋白对单、双链DNA的不同结合能力,对人类疱疹病毒7(humanherpesvirus7,HHV-7)U41的部分功能进行分析鉴定。免疫荧光检测显示,无论在HHV-7感染细胞或HHV-7U41转染细胞,U41蛋白都是仅在其胞核中呈弥漫性分布。在分别加入环己酰亚胺(cycloheximide)和磷甲酸(phosphonoformicacid)作为蛋白合成和核酸合成抑制剂的感染细胞中,U41的表达时相检测结果显示,U41蛋白在HHV-7感染细胞中是一早期表达蛋白。通过DNA结合试验发现,U41蛋白能结合单链DNA而不能结合双链DNA。提示U41的主要功能是保持DNA模板的合适构型,以便DNA的延伸和病毒DNA的合成。

人类疱疹病毒7 U41的部分功能鉴定与分析

目的 :对人类疱疹病毒 7(humanherpesvirus 7,HHV 7)U4 1的部分功能进行分析鉴定 ,为药物治疗学探索提供依据。方法 :免疫荧光检测U4 1蛋白的细胞内定位 ,RT PCR检测U4 1RNA的表达时相 ,DNA结合试验检测U4 1蛋白对单、双链DNA的不同结合能力。结果 :免疫荧光检测显示 ,无论在HHV 7感染细胞或HHV 7U4 1转染细胞 ,U4 1蛋白都是仅在其胞核中弥漫性的分布。在分别加入环己酰亚胺和磷甲酸作为蛋白合成和核酸合成抑制剂感染细胞中 ,U4 1的表达时相检测结果显示U4 1蛋白在HHV 7感染细胞中是一早期表达蛋白。通过DNA结合试验 ,发现U4 1蛋白能结合单链DNA而不能结合双链DNA。结论 :U4 1的主要功能是保持DNA模板的合适构型 。

人类疱疹病毒7U41蛋白DNA链结合能力分析

目的 :对人类疱疹病毒 7(humanherpesvirus 7,HHV - 7)U4 1的核酸结合能力进行分析鉴定。方法 :DNA结合蛋白分离收集、免疫沉淀及Western印迹检测U4 1蛋白对单、双链DNA的不同结合能力。结果 :U4 1蛋白能结合单链DNA而不能结合双链DNA。结论 :U4 1的功能之一是保持DNA模板的合适构型 ,以便DNA的延伸和病毒DNA的合成。

编码人疱疹病毒－6型核糖核苷酸还原酶和P41蛋白基因的克隆和序列测定

本文报道人疱疹病豢－６型（ＨＨＶ－６）ｐＳＴＹ２８ＤＮＡ片段的序列测定。应用分子克隆、缺损突变体（Ｄｃｌｅｔｉｏｎｍｕｔａｎｔ）制备和序列测定等技术，完成了３．９ｋｂＨＨＶ－６ｐＳＴＹ２８ＤＮＡ片段的全序列测定。经ＤＮＡＳＩＳ核酸蛋白软件分析，该片段含有两个开读框架（ＯＲＦ）核糖核苷酸还原酶（ＲＩＲ）ＯＲＦ有２４１４个核苷酸，可编码８０５个氨基酸；Ｐ４１蛋白由１１００个核苷酸组成。与其他疱疹病毒作氨基酸同源性比较，ＨＨＶ－６ＲｉＲ与人巨细胞病毒（ＨＣＭＶ）有高度同源性，最适记分（Ｏｐｔｉｍｉｚｅｄｓｃｏｒｅ）达４５９。实验结果支持Ｅｓｆｔａｔｈｉｏｕ提出的论点，ＨＨＶ－６属于β－疱疹病毒。

HHV－6核糖核苷酸还原酶基因克隆表达和功能研究

本文报道应用分子生物学技术，对人疱疹病毒－６型（ＨＨＶ－６）核糖核苷酸还原酶（ＲｉＲ）基因克隆表达和功能的研究。选用已作全序列测定的ｐＳＴＹ２８ＤＮＡ片段，用核酸蛋白分析软件作分析，发现含有ＲｉＲＯＲＦ（开读框架），全长为２４１４个核苷酸，与ＨＣＭＶ（人巨细胞病毒）相关，最适记分达４５９。应用ＰＣＲ（多聚酶链反应）和分子克隆技术，获得重组质粒ｐＳＴｒｃ２８，引入ＲｉＲ缺损突变菌株ＪＥ７５１１，成功地表达ＲｉＲ蛋白。在标准测定系统，该蛋白催化ＮＡＤＰＨ氧化能力类似大肠杆菌ＪＭ１０９株ＲｉＲ。证实ＨＨＶ－６ＲｉＲＯＲＦ编码的蛋白质，具有ＲｉＲ功能，由此可从ＲｉＲ的核酸和蛋白质水平，为研究ＨＨＶ－６的致病和防治提供新途径。