基于MALDI-TOF MS鉴别产超广谱β-内酰胺酶大肠埃希菌的应用研究

目的探讨基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF MS)快速区分不同基因型产超广谱β-内酰胺酶(ESBLs)菌株的可行性。方法收集2019年1至12月浙江大学医学院附属杭州市第一人民医院各类无污染体液标本中分离的肠杆菌目菌株共368株。采用MALDI-TOF MS进行菌种鉴定,通过VITEK IICompact进行常规药敏试验及ESBLs筛查试验,筛选产ESBLs以及产碳青霉烯酶的肠杆菌目细菌(CRE)。采用PCR检测CTX-M-1、CTX-M-9、TEM、SHV基因,同时利用ClinProTools 3.0软件对各基因型菌株的质谱峰图进行分析。结果368株肠杆菌目细菌中共有169株产ESBLs,其中CTX-M型130株,以CTX-M-1型的CTX-M-55亚型(39株,占30.0%)、CTX-M-15亚型(34株,占26.2%)和CTX-M-9型的CTX-M-14亚型(38株,占29.2%)为主。共检出大肠埃希菌255株,其中产ESBLs大肠埃希菌152株,以CTX-M-1型(75株,占49.3%)和CTX-M-9型(58株,占38.2%)为主。通过ClinProTools 3.0软件分析发现产CTX-M-9型大肠埃希菌在质荷比为6415 m/z和13664 m/z处具有特征性蛋白峰。结论产ESBLs菌株主要为大肠埃希菌,基因型主要为CTX-M-1型与CTX-M-9型。MALDI-TOF MS可以快速鉴别CTX-M-9型大肠埃希菌,对尽早指导临床用药具有一定意义。

孕晚期B族链球菌筛查对预防新生儿早发型感染的效果

目的探讨孕晚期孕妇B族链球菌(GBS)筛查及分娩期预防性应用抗生素(IAP)对预防新生儿早发型GBS(EOGBS)感染的效果。方法选取2013年3月至2019年10月在浙江大学医学院附属杭州市第一人民医院住院并分娩的33327例孕妇。根据医院开展GBS筛查的时机,分为未筛查期(2013年3月至2016年6月)孕妇17142例,筛查期(2016年7月至2019年10月)孕妇16185例。其中14641例筛查期孕妇在孕35~37周行GBS显色培养法筛查,并分析菌株耐药情况;另1544例孕28周后因早产或由外院转入而尚未行GBS筛查的孕妇,应用real-time PCR法筛查GBS定植情况。对GBS筛查阳性的孕妇在其临产后或胎膜破裂时给予IAP,比较开展筛查前后新生儿EOGBS感染的发生情况。结果14641例孕妇在孕35~37周行GBS显色培养法筛查,GBS定植率为10.6%;另1544例孕妇应用real-time PCR法筛查,GBS定植率为12.4%;两种方法筛查GBS的定植率比较差异有统计学意义(P=0.027)。1552株GBS药敏结果显示,青霉素、氨苄青霉素、万古霉素、利奈唑胺、替加环素敏感率均为100.0%;其余抗生素的敏感率由高到低依次是喹奴普汀/达福普汀99.4%、呋喃妥因84.3%、莫西沙星66.2%、左旋氧氟沙星65.5%、环丙沙星63.1%、克林霉素55.2%、四环素24.6%和阿奇霉素0.3%。开展GBS筛查前后新生儿EOGBS感染发生率分别为0.23‰(4/17311)和0.06‰(1/16329),两者比较差异无统计学意义(P=0.407)。结论新生儿EOGBS感染发生率较低,各地区可根据当地医疗条件和卫生经济学因素制定相应预防策略。

基于K-B法筛选异质性耐药菌株及其对抗菌药物敏感试验结果的影响

目的探讨K-B法抑菌圈内出现细菌单菌落的可能原因及其对药敏结果的影响。方法采用头孢他啶和美罗培南药敏纸片对革兰阴性菌株进行筛选,对抑菌圈内出现的细菌单菌落进行鉴定及药敏试验,并与原鉴定结果和药敏结果进行比较。结果从痰液,尿液,血液等临床标本分离的2 500株革兰阴性杆菌。55株在头孢他啶或美罗培南纸片抑菌圈内会出现肉眼可见的细菌单菌落,其中26株经过了菌落纯培养,出现异质性耐药23株,污染3株,29株未经过菌落纯培养,出现异质性耐药14株,污染15株。头孢他啶纸片筛选试验中,共有28株抑菌圈中菌株与原鉴定结果一致,但耐药表型及具体药敏结果均发生改变,其中7株阴沟肠杆菌氨曲南和头孢曲松药敏结果均从敏感变成耐药。美罗培南纸片筛选试验中,共有9株抑菌圈中菌株与与原鉴定结果一致,其中7株铜绿假单胞菌氨曲南从敏感变为中介,亚胺培南从中介变为耐药。结论本研究中,1.48%革兰阴性杆菌分离菌株会出现异质性耐药,菌落传代纯培养可以有效降低药敏操作过程中的污染。异质性耐药菌株的存在以及实验操作过程中的可能污染对病原菌体外药敏结果的影响,需要引起临床,特别是临床微生物工作者的关注和重视。