库蠓核糖体DNA内转录间隔区1序列的测定与分析

目的测定核糖体DNA内转录间隔区1(nuclear ribosomal DNA internal transcribed spacer 1,rDNA-ITS1)序列进行库蠓种类鉴别与系统发育分析,以探究rDNA-ITS1序列在库蠓分子鉴定和系统发育研究方面的适用性。方法采用DNA扩增、纯化、克隆及测序的方法获得荒川库蠓Culicoides arakawai、凹缘库蠓C.holcus、连斑库蠓C.jacobsoni、印度库蠓C.indianus、霍飞库蠓C.huffi和肩宏库蠓C.humeralis等6种库蠓的rDNA-ITS1序列,基于Kimura 2-parameter公式计算种内和种间遗传距离,应用MEGA 6.06软件分析DNA序列碱基组成并以环纹埃蠓Allohelea annulata为外群构建系统发育树(邻接法和最大似然法)。结果上述6种库蠓的rDNA-ITS1序列经过Clustal W比对及人工校对和编辑后的长度为352bp,其中T、C、A、G 4种碱基的含量分别为36.8%、13.0%、30.0%和20.1%,A+T的含量(66.8%)高于C+G的含量(33.1%);K-2p遗传距离在种内和种间具显著差异(t=32.430,P<0.05);系统发育树中不同种类库蠓各自构成单系(群),同种类不同地理种群聚为一支,其与形态学鉴定结果一致。结论本研究证实了rDNA-ITS1序列可用于进行库蠓及其近似种的分子鉴定和系统发育分析。

基于线粒体COI基因序列进行库蠓二囊亚属近似种的分子鉴定

目的通过采用线粒体COI基因进行库蠓近似种分子鉴定的方法,来弥补传统形态学在种类鉴定中存在的操作繁琐、难度大等不足,从而实现库蠓近似种的快速、准确鉴别。方法采用DNA测序的方法获得库蠓属二囊亚属的林岛库蠓(C.gaponus)、标翅库蠓(C.insignipennis)、无害库蠓(C.innoxius)、连斑库蠓(C.jacobsoni)、南山库蠓(C.lansangensis)、新竹库蠓(C.liui)、长喙库蠓(C.longirostris)、异域库蠓(C.peregrinus)等8种库蠓近似种的部分线粒体COI序列,并对其进行分子鉴定;基于Kimura 2-parameter模型分析遗传距离,同时应用MEGA 6.0软件以荒川库蠓C.arakawai为外群构建系统发育树。结果 8种库蠓COI序列长度约650bp;遗传距离在种内和种间具有统计学差异(t=119.452,P<0.05);系统发育树中不同库蠓种类各自构成单系(群),同种类不同地理种群聚为一支。结论本研究证实了线粒体COI序列可用于进行库蠓近似种的分子鉴定。

基于线粒体COⅠ基因序列进行库蠓亚属(双翅目:蠓科)近似种的分子鉴定

为了更快速、准确地鉴别库蠓近似种以及弥补传统形态学在种类鉴定中存在的操作繁琐、难度大等不足,本文采用DNA测序的方法获得库蠓亚属的刺螫库蠓Culicoides punctatus、灰黑库蠓C.pulicaris和新替库蠓C.newsteadi等3种库蠓近似种的部分线粒体COⅠ基因序列,并对其进行分子鉴定;基于Kimura 2-parameter模型分析遗传距离,同时应用MEGA 6.0软件构建系统发育树。结果显示,序列经过Clustal W比对及人工校对后,上述3种库蠓的COⅠ序列长度为394 bp;遗传距离在种内和种间具显著差异(P﹤0.05);系统发育树中不同库蠓种类各自构成单系(群),同种类不同地理种群聚为一支。本研究初步证实了线粒体COⅠ序列可应用于库蠓近似种的分子鉴定。

基于线粒体COⅠ基因序列的吸血蠓近似种鉴定

为了快速、准确地鉴别吸血蠓近似种,弥补传统形态学鉴定方法在种类鉴定中存在的操作繁琐、难度大等不足,提出了基于线粒体COⅠ基因序列的吸血蠓近似种鉴定方法。以二囊亚属中的黑色库蠓(Culicoides pelius)、无害库蠓(Culicoides innoxius)、白带库蠓(Culicoides albifascia)、不显库蠓(Culicoides obsoletus)、东方库蠓(Culicoides orientalis)、苏格兰库蠓(Culicoides scoticus)和琉球库蠓(Culicoides actoni)等7种库蠓近似种的部分线粒体COⅠ基因序列作为分析对象,基于Kimura 2-parameter模型分析遗传距离,同时应用MEGA6. 0软件以荒川库蠓(Culicoides arakawai)为外群构建系统发育树(邻接法和最大似然法)。经过Clustal X序列比对及人工校对、编辑后,7种吸血蠓COⅠ基因长度为494 bp,遗传距离在种内和种间具显著差异(P <0. 05),系统发育树中不同库蠓种类各自构成单系(群),同种类不同地理种群聚为一支。本研究初步证实了线粒体COⅠ基因序列可用于吸血蠓近似种的分子鉴定。

基于线粒体细胞色素b基因序列进行库蠓二囊亚属近缘种的分子鉴定

为了更快速、准确地鉴别库蠓近缘种以及弥补传统形态学在种类鉴定中存在的操作繁琐、难度大等不足,采用DNA测序的方法获得白带库蠓Culicoides albifascia、凹缘库蠓Culicoides holcus、无害库蠓Culicoides innoxius、连斑库蠓Culicoides jacobsoni、长喙库蠓Culicoides longirostris和南山库蠓Culicoides lansangensis等6种库蠓部分线粒体细胞色素b (Mitochondrial Cytochrome b,mt-Cytb)序列,并对其进行分子鉴定;基于Kimura-2-parameter(K2P)模型分析遗传距离,同时采用邻接法、最大简约法和贝叶斯法以荒川库蠓Culicoides arakawai为外群分别构建系统发育树。上述7种库蠓Cytb序列经比对和人工校对后长度为490 bp;遗传距离在种内和种间具显著差异(P﹤0. 05);在3种系统发育树中不同库蠓种类均各自构成单系(群),同种类不同地理种群聚为一支。本研究初步证实了线粒体Cytb序列可用于进行库蠓近缘种的分子鉴定。

小鼠性别决定过程中性腺体细胞分化的调控

哺乳动物的性腺由生殖细胞和体细胞共同形成,性别决定前的性腺具有双向分化的潜能,性腺中体细胞的分化决定其发育为睾丸或卵巢。这一分化过程受到多种因子的精细调控。其中SRY、SOX9、SOX3、SOX8、SOX10、FGF9/FGFR2、PGD2、AMH和DMRT1等参与睾丸的发育和分化,而FOXL2、CTNNB1、RSPO1、WNT4、Follistatin、ERα/β和BMP2则在卵巢发育过程中发挥关键作用。如果这些分子调控网络受到内源性或外源性因子的破坏,则会引起两性发育紊乱,甚至导致雄性向雌性或雌性向雄性的性别逆转。本文以小鼠模型为例,阐述了在性别决定过程中体细胞命运决定以及谱系分化的分子调控网络。