冷却牦牛肉贮藏过程中优势菌的PCR-变性梯度凝胶电泳分析

应用聚合酶链式反应-变性梯度凝胶电泳(PCR-DGGE)技术,研究托盘保鲜膜包装的冷却牦牛肉在4℃贮藏过程中的微生物多样性及其动态变化。直接从样品中提取细菌总的DNA,采用降落PCR扩增16S rDNA的V3可变区序列,再通过DGGE得到动态变化的指纹图谱,并对主要条带进行测序分析。结果表明:检测到的优势腐败菌为Pseudomonas sp.(假单胞菌)、Lactococcus sp.(乳球菌)、Acinetobacter sp.(不动杆菌)、Brochothrix thermosphacta(热死环丝菌)、Enterobacteriaceae bacterium(肠杆菌科细菌),此外还检测到Uncultured Citrobacter sp.(非培养的柠檬酸杆菌)和Staphylococcus sp.(葡萄球菌)。

DGGE技术及其在食品微生物研究中应用

变性梯度凝胶电泳(DGGE)技术是一种分析微生物区系分子指纹技术,具有可靠性强、重复性好、方便快捷等优点,已被广泛应用于微生物分子生态学领域研究。该文对DGGE技术基本原理及其在食品微生物中多样性分析、食品微生物动态监测、快速检测等应用进行综述,并对该技术局限性和应用前景进行评述。

多重PCR技术在食品微生物检测中的应用进展

聚合酶链式反应(polymerase chain reaction,PCR)技术在微生物检测中具有快速、灵敏、操作简单等优点,而多重PCR检测还可以同时扩增多个目的基因,对高效快速检测具有重要意义,已经成为近几年来的研究热点。作者对近来多重PCR技术在食品病原微生物、食品非致病微生物及相关环境食品微生物中应用的研究现状,以及未来在食品检测中的应用展望进行了综述。

PCR法检测肉鸭屠宰加工生产链中沙门氏菌的污染

为建立肉鸭加工中快速、准确的沙门氏菌PCR检测方法,并应用于肉鸭屠宰生产加工链沙门氏菌的实时监测。采用Primer Premier 5.0软件针对沙门氏菌特有的fimY基因设计合成一对引物5′-GCATTCCGCTCATTAGAT-3′和5′-TGGAGGCTGATAACAAGG-3′,并对沙门氏菌DNA扩增PCR体系的退火温度、引物浓度、Mg2+浓度和聚合酶浓度进行优化。结果表明:成功扩增出沙门氏菌标准株和分离株的275bp目的片段,灵敏度达到了1.2pg;应用建立的PCR方法对国内某典型肉鸭屠宰厂的肉鸭屠宰链环节进行沙门氏菌污染的检测,发现在屠宰环境、拔毛浸烫水、浸蜡冷却水、清洗池水、宰前毛、食道、粪便和沥水体腔内共有25个样品中扩增出了275bp大小的特异性片段,而空白对照无扩增条带。

加环引物LAMP法快速检测沙门氏菌方法的研究

探讨了加环引物对LAMP的影响,并与普通PCR法进行了比较,建立一套快速检测沙门氏菌的新方法.以沙门氏菌的inva基因为靶基因,选择PCR的特异性引物,并基于该基因设计出LAMP反应的引物;该研究对LAMP体系的反应温度、dNTP浓度和镁离子浓度等扩增条件也进行了优化,并检测了PCR和LAMP的引物特异性,比较了PCR法、LAMP法和加环引物的LAMP法的灵敏度.结果表明:普通PCR法检测的灵敏度为2.28×103cfu/ml,未加环引物的LAMP法的灵敏度为2.28×101cfu/ml,加环引物的LAMP法的灵敏度为2.28×100cfu/ml.通过三种方法的比较可知:LAMP法检测沙门氏菌比PCR法更加快速、灵敏,而加环引物可进一步提高LAMP的扩增效率.本研究为快速检测沙门氏菌方法的构建奠定了基础,并认为LAMP在检测微生物方面有着广泛的发展前景.

肉制品中生物胺的控制技术及其检测方法的研究进展

生物胺是氨基酸在脱羧酶作用下脱羧后的产物,是植物和微生物体内具有生物活性的含氮化合物,参与机体正常的生理调节,少量的生物胺也有利于人体和动物生理活动。但是,当人体摄入量过多时会引起食物中毒。作者就肉制品中生物胺技术控制和干预及检测方法进行了综述。

双重PCR方法检测沙门氏菌和空肠弯曲菌

为建立能够同时检测食品中沙门氏菌和空肠弯曲菌的双重PCR方法。采用沙门氏菌鞭毛基因fimY和空肠弯曲菌马尿酸酶基因hipO设计特异性引物,并对影响PCR扩增的主要因素——引物浓度、退火温度、Mg2+浓度因素进行优化,比较单一PCR和双重PCR的检测效果。结果表明:采用单一PCR法检测沙门氏菌和空肠弯曲菌时,灵敏度分别可达到3.98pg和4.05pg;而采用双重PCR检测时,灵敏度较单一PCR法有所下降,沙门氏菌和空肠弯曲菌检出限量分别为398pg和40.5pg。本研究建立的特异性强和灵敏度高的双重PCR检测方法,可为实现食品中沙门氏菌和空肠弯曲菌的同时检测提供新方法。

使用环介导等温扩增（LAMP）技术快速检测鸡蛋中的沙门氏菌

本次试验分别采用LAMP法、PCR和国标法对市场上销售的鸡蛋蛋壳及内容物进行沙门氏菌的检测。鸡蛋内容物及蛋壳样本经过增菌后，样液采用酚氯仿法提取细菌DNA，作为LAMP和PCR反应的模板。试验结果表明：LAMP和PCR的沙门氏菌检出率均高于国标法，而LAMP法敏感性、特异性和符合率也均高于PCR法，因此，LAMP是一种快速、敏感和高度特异性的沙门氏菌检测方法，值得推广。在本研究中还发现，鸡蛋内容物检出沙门氏菌的鸡蛋样品中，大约有70％的鸡蛋在蛋壳上都能检出沙门氏菌。因此，沙门氏菌污染鸡蛋主要是由于外部原因引起的，为了减少沙门氏菌污染，建议企业做好蛋壳的消毒工作，加强生产、储存、运输和销售过程的管理。