成人骨髓间充质干细胞的体外诱导培养及向脂肪细胞的定向分化

目的 :确定人骨髓的间充质干细胞 (MSCs)体外培养扩增、培养 ,向脂肪细胞表型转化的方法 ,并了解其生物学特性变化。方法 :用 Percoll分离液 (1.0 73g/ ml)分离成人 MSCs,传代培养。流式细胞仪检测表面标记物CD14 ,CD34,CD4 5 ,CD4 4,VLA- 1,HLA- DR和细胞周期 ,用 1-甲基 - 3-异丁基 -黄嘌呤、吲哚美辛、牛胰岛素、地塞米松实现向脂肪细胞的定向诱导分化。油红 O染色 ,光镜下观察橙红色脂滴沉着的细胞比例。结果 :分离培养获得贴壁细胞 ,流式细胞仪检测 CD14 ,CD34,CD4 5 ,HL A- DR阴性 ,CD4 4阳性 ,VLA- 1表达微弱。G0 / G1期细胞约为86 %。诱导 72 h后出现脂滴 ,第 3周油红 O染色示 85 %以上细胞转变为脂肪细胞。结论 :从人骨髓分离、体外诱导培养间充质干细胞 ,可定向促进向脂肪细胞表型转化。

骨髓间充质干细胞的研究

骨髓间充质干细胞(MSCs)是骨髓中的非造血细胞,构成造血微环境,支持造血,具有向成骨细胞、软骨细胞、成肌/心肌细胞、脂肪细胞、神经元等分化的潜能,表达多种表面标记物,但不具特异性。骨髓、外周血的MSCs是一循环的整体,具有其自身代谢、更新的循环,终末分化可能跨越胚层界限。MSCs应用前景广阔。

骨髓间充质干细胞的分离培养和生物学性状

目的建立一种体外分离纯化和培养扩增人骨髓间充质干细胞(mesenchymalstemcells熏MSCs)的方法,并探讨其生物学特性,为MSCs的进一步应用研究提供数据。方法抽取人骨髓后用Percoll分离液经密度梯度离心法分离得到单个核细胞熏以105个细胞蛐cm2密度接种,培养液为含10%胎牛血清的L-DMEM。倒置相差显微镜及吉姆萨-瑞氏染色观察其形态,MTT法测其生长曲线、流式细胞仪检测细胞周期及表面标记物。结果培养的MSCs12h后换液,有部分细胞贴壁生长熏4～5d可见有集落形成熏14～20d左右可达到80%～90%融合熏倒置相差显微镜及吉姆萨-瑞氏染色可见细胞形态为梭形、多角形及纺锤状等熏生长曲线图显示MSCs增殖活跃,流式细胞仪检测显示约有86%的细胞处于G0、G1期,表面标记物中CD14、CD34、VLA-1、CD45和HLA-DR阴性,而CD44、CD105和CD29阳性。结论成功地建立了一种分离培养人骨髓MSCs的方法熏获得的细胞形态多样、增殖稳定。

rhGH对烧伤患者垂体-睾丸轴影响的文献对照研究

目的探讨重组人生长激素(rh GH)治疗对烧伤患者垂体-睾丸轴的影响。方法采用化学发光免疫测定法和竞争性化学发光酶免疫分析法测定9名男性特重度烧伤患者应用rh GH治疗后,在伤后30天内,血清黄体生成素(LH)、卵泡刺激素(FSH)、睾酮(T)、雌二醇(E2)水平的变化。通过与文献对照,比较rh GH治疗对烧伤患者垂体-睾丸轴的影响。结果文献报道特重度烧伤后患者血清LH、FSH、T水平明显降低,伤后30天,LH升高至正常水平,FSH、T仍未恢复正常水平;E2水平伤后明显增高,而后逐步下降,伤后30天至正常水平。本研究中应用rh GH治疗的特重度烧伤患者血清LH、FSH、T在伤后明显降低与文献一致,在伤后30天,血清LH、FSH已恢复到正常水平,血清T水平有显著的增高,但未达到正常水平。血清E2水平伤后明显升高,在伤后30天已明显下降但尚未降至正常对照组水平。结论特重度烧伤后垂体-睾丸轴功能受到抑制,合理的rh GH应用有利于LH、FSH水平恢复正常,有助于烧伤后垂体功能的恢复。

重度烧伤患者伤后应激障碍发生的随访研究

目的探讨重度烧伤患者伤后应激障碍的发生情况。方法以2010年4月至2011年6月间浙江大学医学院附属第二医院烧伤科收治的27例重度烧伤患者为研究对象,创面治疗和心理疏导同步。分别于伤后1个月和伤后1年,对患者进行症状自评量表(SCL-90)、艾森克人格测验(EPQ)、事件影响量表-修订版(IES-R)测评,判定患者是否存在创伤后应激障碍(PTSD)。结果27例重度烧伤患者均被诊断为急性应激障碍,所有患者伤后1个月SCL-90的躯体化评分高于国内常模[(1.66±0.46)分vs.(1.37±0.48)分,t=3.112,P=0.002],人际关系敏感评分低于国内常模[(1.35±0.26)分vs.(1.65±0.61)分,t=2.550,P=0.011],其他因子与国内常模比较差异均无统计学意义(P均>0.05)。完成1年随访的10例患者中,与伤后1个月比较,各因子间评分差异均无统计学意义(P均>0.05);且IES-R测评显示,没有患者达到PTSD阳性筛查标准,其中2例为亚临床创伤后应激反应症状,7例为轻度创伤后应激反应症状,1例为中度创伤后应激反应症状。结论重度烧伤患者存在急性应激障碍和创伤后应激反应症状,早期进行心理疏导和药物干预值得探索。

严重烧伤合并精神障碍的救治及心理追踪一例

严重烧伤可以引发创伤后应激障碍的发生，若患者伤前已有精神障碍存在，治疗会变得更为复杂。故早期开展有计划的心理评估和干预，显得尤为必要。现将浙江大学医学院附属第二医院收治的严重烧伤合并酒精中毒性精神障碍病例的临床转归及心理追踪与大家分享。

人骨髓间质干细胞向表皮细胞分化的研究

目的探讨人骨髓间质干细胞（MSC）在体外培养条件下能否定向诱导分化为表皮细胞。方法抽取无造血系统恶性疾病的成人骨髓标本，采用Percoll细胞分离液（1．073g／ml）分离MSC，在体外传代培养至第3代，分为对照组和实验组。两组分别用普通L-DMEM培养基和含表皮生长因子、胰岛素、维甲酸、氯化钙的L-DMEM培养基诱导7d。在倒置相差显微镜下每天观察两组细胞的形态；采用免疫组织化学法检测P63和广谱细胞角蛋白（PCK）的表达情况。结果实验组细胞由长梭形逐渐转变为扁圆形或形态不规则，部分细胞P63和PCK呈阳性表达；对照组细胞持续呈长梭形，P63和PCK未见表达。结论人骨髓MSC在体外可诱导分化为表皮细胞。