PGC-1α通过上调SIRT3表达发挥心肌保护作用

【目的】探讨第III类组蛋白去乙酰化酶成员3(SIRT3)在过氧化物酶体增殖物受体γ共激活因子1α(PGC-1α)的调控下发挥改善心肌肥大和心肌能量代谢的作用。【方法】建立血管紧张素II(Ang II)诱导的心肌肥大模型;利用质粒转染诱导PGC-1α基因过表达、si RNA干扰敲低SIRT3表达;Western blot检测PGC-1α、SIRT3及心肌肥大标志蛋白肌球蛋白重链β(β-MHC)的水平。TMRE染色法测定线粒体膜电位;测定ATP含量;DHE染色法测定活性氧水平;q RT-PCR法检测线粒体编码基因、能量代谢相关基因的表达水平。【结果】过表达PGC-1α能够显著提高SIRT3的蛋白表达水平和酶活性(P<0.05)。过表达PGC-1α抑制Ang II诱导的β-MHC上调(P<0.05),增加ATP水平(P<0.05),促进线粒体编码基因的转录水平(P<0.05),降低细胞内活性氧(P<0.05),上调脂肪酸氧化磷酸化代谢相关基因的表达(P<0.05)。SIRT3干扰可逆转PGC-1α的心肌保护作用(P<0.05)。【结论】PGC-1α通过上调SIRT3发挥调控心肌肥大、线粒体功能、活性氧清除、能量代谢等方面的作用。

基于标准提取物的欧洲越橘提取物质量控制方法及药效活性关联研究

目的建立对照品非依赖性的20种花青素类成分定量分析方法,并利用该法对市售欧洲越橘Vaccinium myrtillus提取物进行质量控制,同时筛选出代表性抗氧化活性成分。方法以欧洲越橘标准对照提取物替代对照品,采用超高效液相色谱-三重四极杆串联质谱(UPLC-QQQ-MS/MS)联用技术,建立一种针对20种花青素类成分的定量方法,并利用该法对10批市售欧洲越橘提取物中的花青素类成分含量进行研究。采用DPPH自由基清除法和总抗氧化能力测试法评价不同欧洲越橘提取物的抗氧化能力。结果方法学验证结果显示,20种花青素类成分线性良好,r为0.9994~1.0000,精密度RSD为0.05%~4.23%,稳定性RSD为0.29%~3.38%,平均加样回收率为98.1%~102.1%,RSD为0.50%~4.12%。样品分析结果显示,不同样品中部分花青素类成分含量存在显著差异,其中锦葵素变化最大,RSD为18.23%。欧洲越橘提取物具有较好的DPPH自由基清除能力和总抗氧化能力。其中矢车菊素与DPPH自由基率相关性为0.94,芍药素-3-O-半乳糖苷与总抗氧化活性相关性为0.93。二者有望作为欧洲越橘提取物清除DPPH自由基活性和总抗氧化活性的潜在质控成分。结论基于UPLC-QQQ-MS/MS所建立的对照品非依赖性的欧洲越橘提取物中20种花青素类成分定量分析方法,灵敏度高,准确性好,方法简单,适用于欧洲越橘提取物中20种花青素类成分的含量测定,为中药对照提取物替代单体对照品在中药质量控制中的应用提供了数据支撑,为中药材质量控制研究提供新的研究思路。