PTPN11对急性髓系白血病细胞株生物学行为的影响

目的:检测PTPN11在急性髓系白血病(AML)细胞株中的表达水平,探讨过表达PTPN11对AML细胞株生物学行为的影响。方法:应用逆转录聚合酶链反应、实时定量PCR和Western blot等方法检测5种AML细胞株(HEL、U937、K562、KG-1、HL-60)中PTPN11的表达水平;应用RT-PCR技术扩增PTPN11全长片段,通过酶切、连接,构建PCDH-PTPN11重组慢病毒载体;通过三质粒系统进行慢病毒包装,获得过表达PTPN11(Lv-PTPN11)及空载体(Lv-Ctrl)的慢病毒颗粒,感染HEL及U937细胞;应用Q-PCR及Western blot检测病毒感染后PTPN11的表达水平。通过CCK-8及Annexin V/7-AAD试剂盒检测过表达PTPN11对AML细胞增殖及凋亡的影响。结果:5种AML细胞株均表达PTPN11,限制性内切酶酶切和基因测序证实成功构建了携带过表达PTPN11的慢病毒载体,Q-PCR及Western blot均证实慢病毒转染细胞后可有效上调PTPN11表达,CCK-8法检测细胞增殖显示Lv-PTPN11组细胞OD值较对照组增高(P<0.05),Annexin V/7-AAD检测显示Lv-CUEDC1组凋亡细胞比例较对照组减少(P<0.05)。结论:5种急性髓系白血病细胞株均表达PTPN11基因,成功构建了过表达PTPN11的慢病毒载体,获得稳定上调PTPN11表达的HEL及U937细胞株;过表达PTPN11可促进AML细胞增殖,抑制细胞凋亡。