拟南芥AtPLC4基因RNAi载体的构建及遗传转化

利用RNAi技术,构建了AtPLC4基因的RNAi双元载体,并进行了拟南芥的遗传转化,通过抗性筛选及PCR鉴定,获得20株遗传转化株系.进一步通过RT-PCR检测,得到3株AtPLC4基因表达降低的转基因植株,为运用反向遗传学的方法深入研究AtPLC基因家族的生物学功能提供基础.

拟南芥TUA2参与ABA胁迫下的种子萌发过程

【目的】利用反向遗传学研究拟南芥TUA2与ABA途径相关基因的相互关系以及对种子萌发的影响。【方法】采用PCR、Tail PCR和RT-PCR技术对来自ABRC的T-DNA插入TUA2突变体进行插入位点的鉴定和转录活性的分析;利用转基因技术获得TUA2超表达植株;检测了含不同浓度ABA的MS培养基中各突变体和TUA2超表达植株的种子萌发;通过RT-PCR检测了突变体中ABA途径相关基因HAB、ABI1、RD22和P5CS的表达变化。【结果】突变体tua2-1和tua2-2的T-DNA插入位点均位于TUA2的启动子区,且二者的TUA2表达量均升高。在含有ABA(0.8μmol.L-1)的MS培养基中,突变体和转基因等5个株系的种子萌发延迟,播种第5天萌发率在6%—18%,相同条件下的野生型种子萌发率为76%;ABI1和HAB在TUA2超表达体中的表达明显低于野生型,受ABA诱导后被诱导表达的程度也远低于野生型。【结论】TUA2可能参与了ABA信号途径对种子萌发过程的调节。

拟南芥中一种新的参与蔗糖代谢活动的酶蛋白的表达与鉴定

为了检测拟南芥AtPGH基因—一个推测为糖苷水解酶的基因的生化活性,利用酵母真核表达系统对该基因进行了体外表达,经纯化后获得AtPGH-His重组蛋白。进一步利用3.5-二硝基水杨酸法和间苯二酚法分别检测了该重组蛋白的蔗糖酶与蔗糖合酶活性。结果发现:AtPGH-His重组蛋白既有蔗糖酶活性,也有蔗糖合酶活性。比对拟南芥已知的蔗糖酶基因和蔗糖合酶基因,发现AtPGH与这2个家族的基因序列同源性均很低。推断AtPGH是拟南芥中一个新的具有双重酶活性的蔗糖代谢酶。