干旱胁迫下开花期玉米消减文库的构建及分析

分别以1d干旱和7d干旱处理的开花期玉米顶叶cDNA为tester，正常生长的玉米顸叶cDNA为driver，利用抑制性差减杂交技术构建了两个干旱胁迫下开花期玉米消减文库．两个文库的重组率均高于95％，插入片段集中在300—600bp之间．对两个文库部分克隆进行测序发现，文库中含有脱水素、蔗糖合成酶、甜菜碱醛脱氢酶。DRE结合因子等大量的抗旱相关基因，说明两个干旱胁迫下开花期玉米抑制性消减文库已经构建成功。且具有重要意义．

利用生物信息数据库克隆玉米基因PIS2与MFSP全长

利用玉米表达序列标签数据库(dbEST)电子克隆了玉米基因PIS2的cDNA全长,并采用反转录聚合酶链反应(RT-PCR)技术得到了包含该基因完整开放阅读框(ORF)的cDNA序列;借助水稻非冗余核酸数据库联合应用电子克隆技术和RT-PCR技术克隆得到玉米主易化子超家族蛋白基因MFSP的cDNA全长,并进一步利用植物基因组数据库(PlantGDB)快速地获得了该基因的基因组全长序列。研究证实,充分利用分子生物信息数据库,可以简便地克隆得到玉米目的基因的cDNA乃至基因组全长序列。

小盐芥(Thellungiella salsuginea)CBF1基因的克隆

CBFs(CRT/DREbinding factor)是结合DNA顺式元件CCGAC的转录因子.拟南芥中CBFs由一个小的基因家族编码,包括3个成员:CBF1、CBF2和CBF3,它们在植物抗逆性调控中起重要作用.为了获得高度耐盐耐旱的转基因植物,我们以盐生植物小盐芥为材料,依据拟南芥中CBF1的序列信息设计引物,扩增出小盐芥中CBF1的部分序列,然后使用SMARTTMRACE等方法,从小盐芥中克隆到全长的CBF1cDNA序列,进而重组到植物表达载体中,为植物抗逆基因工程提供了有用基因.

莴苣1-FFT基因的克隆及其功能分析

利用反转录PCR技术和cDNA末端快速扩增（RACE）技术从莴苣中分离出1-FFT（果聚糖：果聚糖1-果糖基转移酶）候选全长cDNA,序列分析表明该基因的开放阅读框中具有β-果糖苷酶单元（蔗糖结合框）、RDP域和EC域三个活性中心域。Southern杂交分析表明该基因在莴苣基因组中以单拷贝形式存在。利用农杆菌介导的叶盘转化法将该基因转入无1-FFT基因的烟草细胞,获得了转基因植株。体外酶反应证实转基因叶片提取物中具有1-FFT活性,该基因编码1-FFT。

高通量测序技术在动植物研究领域中的应用

高通量测序是核酸测序研究的一次革命性技术创新,该技术以极低的单碱基测序成本和超高的数据产出量为特征,为基因组学和后基因组学研究带来了新的科研方法和解决方案.在动植物研究领域,高通量测序引领了一次具有里程碑意义的科学研究模式革新,科研人员可利用该技术在基因组、转录组和表观基因组等领域展开多层次多方面多水平研究.本文就高通量测序技术应用于动植物基因组学和功能基因组学研究进展进行了系统阐述,并对当前高通量测序技术的现状和热点及未来的发展趋势作了深入剖析和讨论.