林芝地区不同草地土壤微生物区系分析

通过对林芝地区3种不同类型草地(高寒草甸草地、沼泽草地和栽培草地)土壤微生物进行研究,利用稀释平板法对3种草地土壤中的细菌、真菌和放线菌进行分离。结果显示,该地区不同草地中的微生物均以细菌占优势,占微生物总数的91.2%以上,放线菌数量最少,仅占3.79%。不同类型草地微生物总数有明显差异,栽培草地>沼泽草地>高寒草甸草地;同一类型草地不同土层深度垂直动态明显,0～10cm土层数量较多,且与10～20cm土层微生物数量有显著差异。不同草地土壤含水量差异较大,低湿条件有利于放线菌的生长,但不利于真菌的生长。

一株西藏白菜型黄籽油菜黑斑病菌的鉴定及生物学特性

为明确西藏林芝地区油菜黑斑病的病原物,从发病田采集病株,采用组织分离法得到一株链格孢菌XZ-S1,用柯赫氏法则对该菌进行致病性测定,结合形态学特征和核糖体基因内转录间隔区（r DNA-ITS）序列构建系统发育树对该菌进行鉴定,菌株XZ-S1与芸薹链格孢Alternaria brassicae在自举值99%相聚一群。生物学特性试验结果表明：该菌最适生长温度为25℃,最适生长p H值为6.5~7.5,淀粉为最佳碳源,蛋白胨为最佳氮源,马铃薯蔗糖琼脂培养基为最适生长培养基,马铃薯胡萝卜琼脂培养基为最适产孢培养基。

小孢子链格孢endoPG基因核苷酸序列分析及系统发育研究

对供试小孢子链格孢菌株的内聚半乳糖醛酸酶(endoPG)基因进行扩增,大部分菌株都可获得PCR产物。核苷酸和氨基酸序列比较表明:不同种小孢子链格孢endoPG基因核苷酸序列存在明显差异,甚至表现在氨基酸水平,这些差异可以作为一些种如梨黑斑链格孢、长柄链格孢区分的分子性状。利用邻近结合法构建系统发育树,所有菌株被分为8个聚类组。在系统发育树上,链格孢的一些不同分离物被聚在不同组中,而细极链格孢、链格孢的部分菌株、苹果链格孢、柑橘链格孢、粗柠檬褐斑链格孢、橘树链格孢被聚为一组,显示根据形态学特征划分的这些种与分子性状的不一致性。endoPG基因核苷酸序列富于变化,为小孢子链格孢系统发育研究提供了一种有用的手段。

银杏内生小孢子链格孢的分离与鉴定

【目的】对银杏内生小孢子链格孢进行分类鉴定,探索鉴别内生小孢子链格孢的有效方法。【方法】采用组织分离法分离银杏叶片中的小孢子链格孢,分别用产孢表型鉴定法和OPA2-1核苷酸序列分析法对分离的小孢子链格孢进行初步鉴定。【结果】从银杏叶片中分离到55株内生小孢子链格孢,老叶中内生小孢子链格孢的分离几率(7.8%)明显比新叶(4.3%)高,是新叶的1.8倍。根据产孢表型可将55个分离物归为5个类群;通过OPA2-1核苷酸序列及系统发育分析,将银杏内生小孢子链格孢分为2个聚类组,其中分离物N02-4和XL-7聚在一个独立的分支上,而其余9个分离物与细链格孢(A.alternaria)、细极链格孢(A.tenuissima)、粗柠檬链格孢(A.limoniasperae)聚为一类,未能反映遗传上的差异。分离物N02-4的产孢表型与其他分离物不同,且其OPA2-1核苷酸序列与其他分离物有3个碱基的差异;分离物XL-7的产孢表型与细极链格孢(A.tenuissima)一致,但在核苷酸序列上存在3个碱基的差异。【结论】仅根据产孢表型对银杏内生小孢子链格孢进行归类,信息有限,结果不准确,需结合分子生物学手段才能进行准确归类。

藏东南地区毛壳属真菌多样性及系统发育分析

为分析藏东南地区毛壳属(Chaetomium Kunze)真菌多样性及系统发育情况,从藏东南5个市、县采集土壤、植物残体和动物粪便等标本共355份,采用组织分离法和稀释分离法得到36株毛壳菌,平均分离几率为10.14%。将分离得到的菌株进行多样性指数特征分析,并按形态特征初步分类;运用聚合酶链式反应对菌株的rDNA-ITS和β-tubulin基因序列进行扩增与序列测定;利用MEGA 5.0软件构建rDNA-ITS和β-tubulin基因系统发育进化树。结果显示:林芝县的毛壳属真菌多样性指数最高,为1.178 5,物种均匀度指数也最高,为0.605 6;昌都市的毛壳属真菌丰富度指数最高,达到0.861 4。不同地区毛壳属真菌的优势种也存在差异:工布江达县的优势种为球毛壳(C.globosum);墨脱县和昌都市的优势种为粪生毛壳(C.funicola);察隅县的优势种为旋丝毛壳(C.bostrychodes);林芝县的优势种为反卷毛壳(C.convolutum)。根据形态特征可将36株菌归属为8个种。分析扩增后的rDNA-ITS和β-tubulin基因序列发现,β-tubulin基因的变异位点、单倍型总数、单倍型多样度、核苷酸多样性指数和核苷酸平均差异数与rDNA-ITS序列的这些参数存在显著差异,体现出更大的碱基变异性。系统发育进化树表明,供试的36个菌株被分为7个组,rDNA-ITS和β-tubulin这2个基因片段不仅可用来区分毛壳菌属中形态差异较大的种,如印度毛壳(C.indicum)、大果毛壳(C.megalocarpum)、球毛壳(C.globosum)、粪生毛壳(C.funicola),还可区分形态特征非常相似的印度毛壳(C.indicum)和直立毛壳(C.erectum),同时也可以对一些形态上难以鉴定的种进行初步鉴定,但不能较好地区分反卷毛壳(C.convolutum)、旋丝毛壳(C.bostrychodes)和黑毛壳(C.nigricolor),需要结合更多的基因片段进行区分。综上所述,本文对藏东南地区毛壳属真菌多样性与系统发育情况进行了研究,为丰富西藏毛壳属真菌资源和开发毛壳菌代谢产物奠定了理论基础。

林芝地区温室番茄灰霉病病原菌生物学特性研究

[目的]研究林芝地区温室番茄灰霉病菌的生物学特性,为该地区番茄灰霉病的防治奠定基础。[方法]采用不同的温度、pH值、碳源和氮源,研究林芝地区番茄灰霉病菌菌丝生长和产孢的最佳条件。[结果]番茄灰霉病菌在10～30℃均能生长,适宜温度为20～25℃,最佳温度为25℃,30℃以上的高温抑制病原菌生长及产孢。pH值5.0～9.0范围菌丝均能生长,以pH值6.0为最适,中性条件下不利于产孢。碳源以果糖对菌丝生长最佳,产孢以蔗糖溶液中最多。氮源以蛋白胨对菌丝生长和产孢最佳,缺氮条件下不产孢。[结论]番茄灰霉病在林芝地区日光温室中流行,最利于病原菌菌丝生长的碳源不一定最利于其产孢,最利于病原菌菌丝生长的氮源同时也有利于其产孢。

苹果褐腐病拮抗毛壳菌的筛选及鉴定

【目的】筛选适合于防治苹果褐腐病(Monilinia fructigena)的生防毛壳菌,为苹果采后病害的生物防治提供潜在的菌株材料。【方法】选择4株毛壳菌,采用平板对峙法测量抑菌率和抑菌带宽度;通过生防毛壳菌发酵粗提物检测其抑菌活性强弱;通过离体接种苹果果实比较毛壳菌的控病作用。结合形态学特征和核糖体基因内转录间隔区(r DNA-ITS)序列对抑菌活性强的毛壳菌菌株进行鉴定。【结果】供试的4株毛壳菌中,菌株24-9在平板对峙试验、发酵粗提物抑菌试验和离体接种试验中均表现出稳定而较强的抑菌活性,通过形态学特征和核糖体基因内转录间隔区(rDNA-ITS)序列构建系统发育树,将菌株24-9鉴定为球毛壳菌Chaetomium globosum。【结论】该生防毛壳菌菌株可用于开发苹果采后病害生防制剂,提高植物抗性,丰富我国苹果采后病害的生防菌资源库。

小孢子链格孢的IGS-RFLP分析

用基因间隔区特异性引物对10个小孢子链格孢种和作为对照的1个大孢子链格孢种(茄链格孢)(Al-ternaria solani)进行扩增,小孢子链格孢种获得约3.0kb片段,而大孢子链格孢种获得约4.0kb片段,大孢子种和小孢子种可通过IGS扩增片段明确区分.分别用限制性核酸内切酶HaeⅢ和MspⅠ对小孢子链格孢的扩增产物进行限制性酶切,可产生不同的酶切图谱.根据酶切图谱可以把细链格孢和细极链格孢区分.IGS扩增产物表现出长度和序列结构上的多态性,是一个良好的遗传标记,对于一个种内的不同菌株具有一定鉴别意义,但是由于利用现有引物一些菌株难以扩增出PCR产物,该方法的利用受到一定限制.

林芝地区常见杂草病害调查及病原初步鉴定

通过对林芝地区的实地调查,共发现杂草病害7种:西藏白茅条锈病、西藏白茅黑痣病、大籽蒿黑锈病、大黄锈病、大黄轮纹病、密花香薷白粉病和老鹳草斑点病,对病害症状进行了描述,结合各方面资料对病原进行了初步鉴定,为杂草的生物防治提供依据。

无创通气治疗重症哮喘疗效分析

目的探讨重症哮喘患者采取无创通气治疗的临床效果。方法将该院2012年4月—2014年10月接诊的重症哮喘患者40例作为研究对象,随机均分为研究组与对照组,对其临床资料进行回顾性对比分析。结果研究组患者的临床治疗效果明显优于对照组患者,差异有统计学意义(P<0.05)。结论重症哮喘患者采取常规治疗联合无创通气治疗可明显改善血气分析指标、肺功能情况,同时并发症少,安全性高,值得借鉴。

西藏林芝地区不同牧草种子带菌检测

采用种子外部洗涤检测,内部带菌检测,对5种牧草种子进行了种子携带真菌和细菌的检测,纯化和鉴定。研究结果表明,每种牧草种子均带菌,所有牧草种子携带细菌的数量均大于真菌的数量,共检测出牧草种子寄藏真菌3属4个种,链格孢菌、细极链格孢菌、青霉,黑曲霉是这些牧草种子寄藏真菌的优势菌群。实验表明供试的5种牧草种子质量较好,对加速农牧区建植人工草地,提高牧草产量和质量发挥重要作用。

藏中矿区先锋植物重金属积累特征及耐性研究

西藏中部矿区重金属污染严重,在矿区废弃地的先锋植物中筛选和研究适合当地气候与土壤条件的重金属耐性植物,是藏中矿区植被恢复和污染土壤修复的前提。本研究采用野外调查取样,并结合室内分析测试来进行。对矿区尾矿库生长的6种先锋植物及其土壤重金属含量进行测定分析,结果表明:拉屋矿区尾矿库重金属污染严重,并且土壤受到Zn,Cu,Pb,Cd元素的复合污染;6种先锋植物均能适应矿区土壤重金属元素较高的环境,对重金属具有一定的耐性;6种植物对重金属的吸收表现出3种特征:尼泊尔酸模(Rumex nepalensis)和紫羊茅(Festuca rubra)属于富集型植物;高山嵩草(Kobresia pygmaea)、高原荨麻(Urtica hyperborea)、珠芽蓼(Polygonum viviparum)属于根部囤积型植物;垂穗披碱草(Elymus nutans)属于重金属规避型植物;在复合污染条件下,尼泊尔酸模对Zn的吸收超过1000mg·kg-1,高原荨麻对Cd的吸收超过50mg·kg-1,高原荨麻和尼泊尔酸模具备超富集植物的特征和潜能,对尾矿库区重金属污染有较强的耐性,可作为治理该地区污染环境的修复材料。

青稞全蚀病和根腐病生防毛壳菌的筛选及鉴定

青稞根腐病与青稞全蚀病是西藏青稞的常见根部病害,为筛选适合于防治青稞全蚀病与根腐病的毛壳菌,通过皿内拮抗试验、发酵粗提物抑菌试验和温室盆栽防效试验对4株毛壳菌的抑菌活性进行了鉴定,通过形态学和分子生物学方法对高活性菌株进行了鉴定。结果发现,在皿内拮抗试验中,毛壳菌41-4在培养第7天至第9天时,对青稞根腐病和全蚀病的抑制率分别达到60.00%和44.44%,抑菌带宽度均达到1.4cm。培养7d时毛壳菌41-4发酵粗提物对青稞根腐病和全蚀病的抑制率分别达到64.44%和60.00%,抑菌带宽度均达到1.5cm。在温室盆栽防效试验中,毛壳菌41-4对青稞根腐病和全蚀病的发病严重度和病情指数均有降低作用,防效分别达到62.67%和39.45%。结合形态学特征和核糖体基因内转录间隔区(rDNAITS)序列构建系统发育树,将菌株41-4鉴定为球毛壳菌Chaetomium globosum。该生防菌株可用于开发微生物菌肥,对西藏的无公害农业生产和保护西藏的原生态具有重要意义。

大花黄牡丹内生菌的分离鉴定及其抗菌活性菌株的筛选

采用研磨法从健康大花黄牡丹的根、茎、叶柄、叶和种子中进行菌种分离,依据其形态、培养特征及其他生物学特性对菌株进行初步鉴定;采用平板对峙法对分离的内生菌进行拮抗试验研究,并对强活性菌株进行16SrD-NA序列鉴定,以明确大花黄牡丹内生菌的种类,筛选对农作物病害有抑制作用的菌株。结果表明:(1)获得内生真菌188株,鉴定为10个属,以短蠕孢属(50%)、青霉孢属(18.6%)和曲霉孢属(12.3%)为优势种群。获得内生放线菌145株,以链霉菌属(98.6%)为优势种群。表明大花黄牡丹内生菌在数量和种类上存在极丰富的多样性,同时在不同组织存在一定的差异性。(2)抑菌试验结果显示,21.6%真菌对指示菌有抑菌作用,抑菌圈直径最大为10mm;27.8%放线菌对指示菌有抑菌作用,其中菌株PND31的抑菌活性较强,抑菌谱较广。(3)16SrDNA序列鉴定显示,菌株PND31与链霉菌属聚在一起,初步归为链霉菌属一个种。

西藏色季拉山土壤放线菌的区系

2007-08～09从西藏色季拉(也称色齐拉)山采集不同植被、不同海拔的土样,采用稀释平板分离法研究了色季拉山土壤中放线菌的数量、组成、与生态因子的关系以及部分菌株的生理生化特性,借以研究色季拉山土壤放线菌的生态分布及其活性。结果表明:①色季拉山土壤放线菌的数量表现为从山脚至山顶呈现低高低的分布现象,中温菌数量多于低温菌。②色季拉山土壤放线菌数量受多种因素影响:随土壤pH值的升高菌数增加,随有机质含量的增加而减少。③土壤放线菌的组成较复杂,共分离到7个属的放线菌,以链霉菌属为主,其次为诺卡氏菌属、束丝放线菌属和链异壁菌属。④土壤放线菌组成的复杂程度随植被的丰富度变化而变化,植被越丰富,放线菌的组成越复杂。⑤链霉菌的组成较复杂,共分离到12个类群,以白孢类群为主,其次为灰褐类群和金色类群。⑥色季拉山土壤放线菌分别有50%和60%的菌株能利用纤维素和明胶,40%的菌株能产生凝乳酶,这些放线菌水解淀粉的能力弱。⑦从拮抗性结果来看,参试菌对细菌的拮抗性强于对真菌的拮抗性,对G+菌的拮抗性强于对G-菌的拮抗性。

拉鲁湿地自然保护区放线菌组成分析及生物活性测定

探究拉鲁湿地自然保护区的放线菌组成及其抑菌和酶活性,为放线菌新药物先导化合物和高活性酶的筛选提供资源。从拉鲁湿地自然保护区不同土壤类型、不同优势植被采集25份土样,用分散差速离心法分离了拉鲁湿地中温放线菌和低温放线菌。从中温放线菌中选择15株代表菌株进行了初步分类鉴定。采用打孔法检测了其对2株细菌和4株病原真菌的抑菌活性。结果表明:(1)拉鲁湿地放线菌数量从水生环境向陆地生态系统递增,中温放线菌数量显著多于低温放线菌;(2)拉鲁湿地土壤中分离到链霉菌属、小单孢菌属、诺卡氏菌属、马杜拉菌属、小链孢菌属5个放线菌属。其中以链霉菌属和小单孢菌属为优势属。链霉菌属以金色类群、白孢类群和粉红孢类群为主,小单孢菌分离到黄橙类群和黑褐类群;(3)供试菌株分解纤维素能力较强,分解蛋白质活性较低,具有抗菌活性的菌株很少,且抗菌活性较弱;(4)供试菌株耐毒性物质的能力较强,这些菌可用于毒害有机物污染物的处理。

几丁质酶产生菌发酵条件初步研究

微生物几丁质酶在生物防治中有着重要的应用价值,发酵条件的优化是大量获取几丁质酶的重要前提;试验利用单因素优化法研究了影响地衣芽孢杆菌JDZ-3产生几丁质酶的培养基的初始pH、碳源、氮源、培养温度、金属离子,利用正交试验确定了发酵培养基的组成;培养基的最佳初始pH为7.0,几丁质酶的最佳碳源为胶体几丁质,最佳氮源为酵母膏,最佳金属离子为Mg2+,最适的发酵温度为30℃,该菌株产几丁质酶发酵培养基的三大营养元素的组成为:胶体几丁质0.2%,酵母膏0.6%,MgSO4·H2O0.1%;在此优化条件下,地衣芽孢杆菌JDZ-3产几丁质酶的能力明显提高,其发酵上清液中的几丁质酶的活力可达2.76U/mL。

匙叶翼首草内生真菌的分离鉴定及其抗菌活性

研究匙叶翼首草内生真菌的种群组成及其代谢产物的抑菌活性,获得抗菌活性较好的菌株,以寻找新型抗菌物质。采用内生菌常规分离法和3种培养基对匙叶翼首草健康植株的根、花葶、叶进行内生真菌的分离鉴定,并采用7种指示菌,用平板对峙法对分离获得的内生真菌进行抑菌活性试验。结果表明,从健康匙叶翼首草植株中共分离获得64株内生真菌;同一植株不同组织中的内生真菌数量以根最多,其次为叶,花葶最少;经形态学鉴定分属于4目、6科、14个属,其中青霉孢属为匙叶翼首草内生真菌中的优势菌群,链格孢属、曲霉孢属、暗双孢属和无孢类群为常见属。平板对峙抑菌试验表明,有11.9%的菌株对所测试病原真菌具有抑菌活性,且抑菌活性较弱。

慈巴沟自然保护区土壤放线菌区系分析及其生物活性测定

【目的】分析西藏察隅慈巴沟自然保护区土壤放线菌的组成及其抑菌活性和酶活性,为放线菌新药物先导化合物和高活性酶的筛选提供资源。【方法】从慈巴沟自然保护区采集不同植被和不同海拔高度的45份土样,用5种培养基分别分离高温、中温和低温放线菌,根据形态和化学分类特征对分离到的放线菌进行鉴定。采用植物相似性系数计算公式,将慈巴沟土壤放线菌区系与临近地区云南、青海以及地理位置及气候条件具有显著差异的河北承德和武陵山放线菌区系进行比较分析,并采用琼脂移块法,检测了617株中温放线菌对2株细菌和3株农作物病原真菌的抑菌活性及酶活性。【结果】慈巴沟自然保护区土壤放线菌区系复杂,从45份土样中共分离到11个属的放线菌。该地土壤中广泛分布着高温放线菌,其分布的上限海拔为4000m,主要属于链霉菌属、小单孢菌属和高温放线菌属;中温放线菌较复杂,共分离到10个属的中温放线菌;低温放线菌组成简单,仅分离到3个属。在区系亲缘关系上,慈巴沟放线菌与云南区系较为接近,与武陵山、河北承德及青海区系较远。617株中温放线菌中的大部分菌株能利用明胶、还原硝酸盐和产生凝乳酶等,对农作物病原真菌拮抗比率小,但活性较强。【结论】慈巴沟自然保护区原始森林土壤蕴涵着种类和活性丰富的放线菌,从该地区酸性土壤中能筛选到对植物病原真菌有较强活性的拮抗放线菌。

珠穆朗玛峰自然保护区土壤放线菌的生态分布及拮抗性研究

[目的]探究珠穆朗玛峰自然保护区土壤放线菌的生态分布及抑菌活性,为放线菌新药物先导化合物筛选提供资源。[方法]采用稀释平板法及琼脂块法对珠穆朗玛峰自然保护区土壤放线菌进行分离及拮抗性测定。[结果]珠穆朗玛峰自然保护区植被类型不同,放线菌的数量分布均有明显差异。农田土放线菌数量最多,人工林与原始森林土壤放线菌数量最少。在同一剖面内表层放线菌数量最高,随着土层加深,有机质含量减少,放线菌数量亦相应降低。该区放线菌种类较复杂,共分离到10个属,其中链霉菌属占绝对优势。链霉菌属分离到11个类群,以白孢类群、灰褐类群和粉红孢类群为主。供试菌株抗病原真菌强于细菌,抗革兰氏阳性细菌强于抗革兰氏阴性细菌。[结论]珠穆朗玛峰自然保护区土壤蕴含着种类和拮抗活性丰富的放线菌,可进一步用于生物农药的开发利用。