针刺捻转补泻手法对自发性高血压大鼠神经递质及炎症因子的影响

目的通过观察针刺捻转补泻手法对自发性高血压大鼠(SHR)下丘脑室旁核(PVN)中神经递质γ-氨基丁酸(GABA)、谷氨酸(Glu)含量以及血清中炎症因子白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)水平表达的影响,探寻针刺调控血压的作用机制。方法27只雄性SHR大鼠随机分配到补法组、泻法组和模型组中。9只Wistar-Kyoto(WKY)大鼠作为空白组。空白组和模型组只进行捉抓固定不做针刺干预,补法组和泻法组均取双侧的太冲穴进行针刺干预。各组每日上午干预1次,周期为14 d,2周之间休息1 d。于针刺第0、3、7、14日定期测量大鼠尾动脉收缩压并记录。实验第14日取材,采用ELISA法检测大鼠PVN中GABA、Glu的含量,以及检测血清中炎症因子IL-6、TNF-α的含量,最后使用HE染色法观察PVN组织病理学改变。结果与模型组相比,补法组和泻法组均能显著降低SHR大鼠血压(P<0.01),且泻法组降压效果更为显著(P<0.05)。针刺后,与模型组相比,补法组和泻法组PVN组织中GABA含量显著增加,Glu含量显著降低(均P<0.01);补法组和泻法组血清中IL-6、TNF-α水平相比模型组显著下降(P<0.05或P<0.01)。HE染色结果显示:与模型组相比,补法组和泻法组可改善病变情况,细胞总数增多。结论针刺捻转补泻手法可明显降低SHR大鼠血压,且捻转泻法降压效果更为显著,其作用机制可能与PVN中神经递质GABA含量升高、Glu含量降低,以及炎症因子IL-6、TNF-α水平下降相关。

电针原发性高血压模型大鼠太冲、曲池穴观察microRNA-9对其下游靶点P2X7受体、炎性因子、血管紧张素Ⅱ的影响

目的通过观察microRNA-9对其下游靶点P2X7受体、炎性因子、血管紧张素Ⅱ的影响,分析电针降压机制。方法选择原发性高血压模型大鼠(spontaneous hypertension rat,SHR)作为高血压动物模型,将SHR随机分为4组:假手术组、miR9抑制剂+电针组、电针组、模型组,Wistar大鼠作为空白组(共5组,每组10只)。其中,miR9抑制剂+电针组在SHR室旁核内行双极插管植入术后注射microRNA-9抑制剂(每单侧100 nL/天),假手术组、电针组注射等剂量脑脊液。术后5天进行电针干预,穴取双侧太冲、曲池。在电针前和电针后3、7、10、14天测量收缩压,连续电针治疗2周后取材,通过实时荧光定量多聚核苷酸链式反应(real-time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)对各组大鼠下丘脑microRNA-9的表达进行定量检测,利用qPCR和蛋白免疫印迹法(western blot,WB)检测各组大鼠P2X7受体的mRNA和蛋白水平,使用酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,Elisa)检测下丘脑室旁核和血浆中炎性因子白介素(interleukin,IL)-6、肿瘤坏死因子(tumor necrosis factor,TNF)-α和血管紧张素Ⅱ(angiotensinⅡ,ANGⅡ)的含量。最后使用抗体Iba1进行免疫组化染色,评估下丘脑室旁核内小胶质细胞的活化程度。结果(1)与假手术组相比,电针组降低了高血压大鼠的收缩压(P<0.01),与电针组相比,miRNA9抑制剂+电针组的降压效果下降(P<0.05);(2)电针组与miRNA9抑制剂+电针组、假手术组相比,miRNA9水平明显升高(P<0.01);(3)与miRNA9抑制剂+电针组相比,电针组室旁核、血清中的IL-6含量更低(P<0.01,P<0.01),与miRNA9抑制剂+电针组相比,电针组室旁核、血清中的TNF-α含量更低(P<0.05,P<0.05);(4)与假手术组相比,电针组的ANGⅡ含量下降明显(P<0.01),但电针组与miR-9抑制剂+电针组ANGII的含量相比无统计学差异(P>0.05);(5)与假手术组相比,电针组降低了P2X7受体的蛋白及mRNA表达(P<0.01,P<0.01),与电针组相比,miRNA9抑制剂+电针组中P2X7受体的蛋白及mRNA表达明显较高(P<0.01,P<0.01);(6)免疫组化染色结果显示,电针组与miRNA9抑制剂+电针组、假手术组相比,室旁核小胶质细胞激活程度明显降低(P<0.01,P<0.01)。结论电针干预后影响了SHR下丘脑室旁核内miRNA-9的表达,并可能通过抑制P2X7受体的表达、炎症因子IL-6、TNF-α的释放、小胶质细胞的激活,从而降低血压。

电针“太冲”“曲池”对自发性高血压大鼠下丘脑室旁核P2X7受体及PI3K/AKT通路相关蛋白因子表达的影响

目的:探讨电针“太冲”“曲池”对自发性高血压大鼠(SHR)下丘脑室旁核(PVN)相关蛋白P2X7受体、PI3K和AKT含量以及血清IL-1β和IL-10浓度的影响,探讨电针对血压的中枢调控机制。方法:10只雄性WKY大鼠作为空白对照组,40只雄性SHR采用完全随机数字表法分为模型组、假手术组、电针组和抑制剂+电针组。假手术组和抑制剂+电针组行PVN双击套管置入术,并每天用微量注射器分别注射人工脑脊液、P2X7受体抑制剂A438079,一侧PVN每次给药剂量为100 nL。电针组和抑制剂+电针组采用电针双侧“太冲”“曲池”,其余各组不做电针干预。各组于电针前和电针后定期测量血压。实验结束后采用免疫组化法观察下丘脑PVN中P2X7受体蛋白表达情况,Western blot法观察下丘脑PVN中PI3K、AKT蛋白表达情况,用Elisa法观察血清中IL-1β、IL-10浓度。结果:与模型组比较,电针组和抑制剂+电针组大鼠血压明显降低,差异具有统计学意义(P<0.01),下丘脑PVN中P2X7受体、PI3K、AKT蛋白和血清中IL-1β浓度降低,差异具有统计学意义(P<0.01或P<0.05),血清中IL-10浓度升高,差异具有统计学意义(P<0.01);且抑制剂+电针组较电针组降压效果、下丘脑PVN和血清中炎症因子的良性调控作用更明显,差异具有统计学意义(P<0.01或P<0.05)。结论:电针可以通过良性调控P2X7受体以及PI3K/AKT通路上PI3K、AKT蛋白和IL-1β、IL-10的表达,来实现降压的目的,这可能是电针治疗高血压的中枢降压机制之一。

手针和不同刺激参数电针干预溃疡性结肠炎小鼠的疗效差异研究

目的探讨手针及不同刺激参数下电针对溃疡性结肠炎(ulcerative colitis,UC)模型小鼠的疗效差异,筛选针刺治疗UC的最佳干预方法及刺激参数。方法5%葡聚糖硫酸钠、自由饮水诱导小鼠建立UC模型,选取双侧“天枢”穴、双侧“上巨虚”穴进行针刺干预。实验1:在实验第7~11天对小鼠进行针刺干预,每次干预15分钟。空白组与模型组不给予治疗;治疗组分别为电针1组(疏密波,2/100 Hz,0.3 mA)、电针2组(疏密波,2/100 Hz,0.6 mA)、电针3组(疏密波,2/100 Hz,0.9 mA)、电针4组(连续波,100 Hz,0.9 mA)、手针组。实验2:在实验第3~11天对小鼠进行针刺干预,每次干预15分钟。空白组与模型组不给予治疗;治疗组分别为电针1组(疏密波,2/100 Hz,第3~6天:0.3 mA,第7~11天:0.9 mA)、电针2组(疏密波,2/100 Hz,0.3 mA)、电针3组(疏密波,2/100 Hz,0.9 mA)、手针组。比较各组小鼠体质量、疾病活动指数评分(disease activity index,DAI),采用苏木精—伊红染色法观察结肠组织形态,免疫组化法检测各组小鼠结肠组织内肿瘤坏死因子-α(tumor necrosis factor-α,TNF-α)、髓过氧化物酶(myeloperoxidase,MPO)、基质金属蛋白酶-9(matrix metalloprotease-9,MMP9)表达水平。结果实验1中电针1组、电针3组小鼠结肠长度较模型组明显增加(均P<0.05),其中电针3组小鼠体质量较模型组显著增加(P<0.05),且结肠组织炎性浸润减轻,其他组未见明显差异。实验2中电针2组、电针3组小鼠体质量较模型组增加(P<0.01;P<0.05),两组DAI评分较模型组降低(P<0.01;P<0.05),结肠组织中TNF-α、MPO、MMP9表达下降,但电针3组小鼠结肠长度较模型组显著增加(P<0.01),结肠组织损伤较轻。电针治疗UC的疗效优于手针,疏密波疗效优于连续波,频率2/100 Hz疗效优于100 Hz,2/100 Hz下0.9 mA疗效优于0.3 mA、0.6 mA。结论针刺治疗UC小鼠的最佳干预方式为电针,最佳刺激参数为0.9 mA、2/100 Hz、疏密波。