高产核酸的热带假丝酵母诱变选育及其发酵条件优化

以热带假丝酵母(Candida tropicalis)HY4-17为出发菌株,采用电子束辐射技术诱变,经过初筛、复筛及遗传稳定性试验选育核酸高产菌株,通过Plackett-Burman试验、最陡爬坡试验及响应面法优化培养基,并优化接种量和发酵时间以提高核酸产量。结果表明,获得一株生长快速,遗传稳定的突变菌株EBI-21,其核酸含量较出发菌株HY4-17提高了25%。最佳培养基组成为:糖蜜185g/L,硫酸铵3g/L,硫酸锌0.05g/L,硫酸镁0.5g/L,硫酸亚铁0.05g/L,磷酸1mL/L,pH值为4.5。在优化培养基及接种量8%,发酵时间12h条件下,核酸产量达到1.73g/L,较未优化前提高了80.21%,培养时间缩短了10h。

优化尼罗红荧光染色法简便快速筛选高油脂裂殖壶菌

裂殖弧菌是商业化生产二十二碳六烯酸(DHA)的重要菌株。为了快速检测裂殖壶菌细胞油脂含量,本文基于尼罗红荧光染色法,系统地筛选了激发光与发射光,并探究了简化细胞处理步骤,在不使用磷酸缓冲盐溶液洗涤细胞的条件下,优化二甲基亚砜(DMSO)体积分数、尼罗红用量、染色时间及细胞密度等因素对裂殖壶菌胞油脂检测的影响,并通过气相色谱法与荧光染色法的相关性分析,验证该方法的准确性。结果表明背景荧光未对荧光强度测定造成干扰;细胞密度在一定范围内,荧光强度与油脂含量的相关性良好,通过荧光强度可以较为准确地反映裂殖壶菌油脂含量。最佳染色及检测条件为:细胞密度0.7<OD600<1.3,尼罗红浓度1μg/mL,DMSO浓度20%,激发光515 nm,发射光576 nm,常温避光染色20 min。本研究优化后尼罗红荧光染色法可应用于高含油量的裂殖弧菌突变株或亲缘关系相近的高油脂菌株的高通量筛选。