HPLC-ESI-LTQ-Orbitrap分析芪归银方中黄酮成分体内代谢过程

为进一步明确芪归银方的药效物质基础,采用HPLC-ESI-LTQ-Orbitrap技术对大鼠灌胃芪归银方后血清中黄酮类活性成分进行表征,并通过鉴别其尿液及粪便中的代谢物对结果进行佐证。从含药血清中鉴定出8个黄酮类化合物,其中,芹菜素-6,8-二葡萄糖苷和芹菜素以原型入血,芒柄花素、木犀草素、毛蕊异黄酮、5,7,4′-三羟基黄酮醇-7-O-β-D-葡萄糖苷、木犀草素-7-O-葡萄糖苷、山奈酚-3-O-葡萄糖苷等6个化合物以Ⅱ相代谢产物入血;从尿液中鉴定出9个黄酮类成分,包括6个入血成分的相应代谢产物;从粪便中检出3个黄酮类化合物的原型形式,未检测到与入血成分相同的成分。实验结果显示,芪归银方中的黄酮类入血成分大部分是经肾脏代谢排出,这可为阐明芪归银方延缓耐药的药效物质基础提供依据。

盐酸阿霉素-黄芪甲苷脂质体制备工艺研究

目的优选盐酸阿霉素-黄芪甲苷脂质体(LPs-DOX/AS)的制备工艺条件。方法通过单因素试验考察了脂质体制备方法、游离药物去除方式、孵育温度对脂质体制备的影响;以盐酸阿霉素、黄芪甲苷的包封率与载药量为考察指标,采用L9(34)正交试验,考察了磷脂浓度、磷脂与胆固醇的比例、药脂比对LPs-DOX/AS制备工艺的影响,并对所制得脂质体的粒径大小、微观形态和药物包封率及载药量等进行表征。结果 LPs-DOX/AS最佳制备工艺条件:磷脂浓度为8 mg/mL,磷脂与胆固醇比为10∶1,药脂比为1∶5。所制备的脂质体粒径为(102.6±0.2)nm,大小分散均匀;盐酸阿霉素的包封率和载药量分别为(98.57±0.49)%、(4.62±0.02)%,黄芪甲苷的包封率和载药量分别为(99.37±0.08)%、(14.45±0.04)%。结论优选工艺所制备的LPs-DOX/AS包封率和载药量较高,大小分散均匀,为LPs-DOX/AS的进一步研究奠定了基础。

基于HPLC-LTQ-Orbitrap MS技术芪归银提取物在ICR小鼠体内入血移行成分的鉴定

目的:分析芪归银提取物灌胃ICR小鼠后的入血成分,探讨芪归银的生物体内效应成分。方法:应用HPLC-ESI-LTQ-Orbitrap技术,通过对比空白血浆、口服芪归银提取物后的血浆以及芪归银提取物的色谱图和质谱碎片离子信息,并结合文献报道和对照品比对,筛选和鉴定小鼠灌胃芪归银提取物后的血中移行成分。结果:在小鼠血浆中筛选出27个药源性成分,并鉴定了其中的21个成分,其中包括原型成分15个,葡萄糖醛酸化和异构化产物6个。结论:芪归银在小鼠体内主要以原型、葡萄糖醛酸化和异构化产物的形式入血;所建立的分析方法简便灵敏,可为阐明芪归银方的药理作用及其机制提供依据。

紫草素明胶-海藻酸钠微囊制备

目的：优选紫草素明胶-海藻酸钠微囊的制备工艺条件。方法：以紫草素微囊载药量、包封率、粒径大小及分布为制备工艺的优化指标,通过单因素试验和L9（34）正交试验,考察了乳化剂种类、乳化温度、明胶/海藻酸钠最佳浓度与比例、芯壁比、Ca Cl2浓度等因素对微囊形成的影响。结果：紫草素复合微囊的最佳制备条件为：2%的明胶和海藻酸钠（比例为1∶3）,芯壁比为1∶1,Ca Cl2浓度为5%,吐温-司盘（1∶1）为乳化剂,乳化温度55℃;所得微囊成球性好、粒径分布均匀,载药量和包封率分别为18.27%、81.90%。结论：优选工艺所制备的紫草素明胶-海藻酸钠微囊包封率和载药率都较高,粒径均一,为紫草素微囊的进一步研究奠定基础。

系统生物学方法研究金龙胶囊逆转A549细胞对紫杉醇耐药的机制

目的利用系统生物学技术分析抗肿瘤中药复方金龙胶囊逆转A549细胞对紫杉醇耐药的分子机制。方法取金龙胶囊干预组及空白对照组的A549/Paclitaxel耐药细胞系样本进行基因芯片检测,通过对比获得差异基因;使用一步过连通测算和多步骤隐藏节点测算获取拓扑基因;采用富集分析法分析其生物学功能;借助MetaCore平台构建分子机制网络图。结果与对照组相比,金龙胶囊干预组共有203个差异基因(倍数>2),416个拓扑基因,分子机制网络图提示,金龙胶囊的靶点主要集中在细胞周期调控和免疫应答等。结论金龙胶囊通过对肿瘤细胞周期调控和免疫调节发挥逆转A549/Paclitaxel细胞对紫杉醇的耐药作用。

金龙胶囊抗脑肿瘤的系统生物学研究

目的:利用系统生物学技术分析中药复方金龙胶囊抗脑肿瘤的分子机制。方法:取金龙胶囊组及空白对照组小鼠的原位脑肿瘤组织样本进行基因芯片检测,通过比对获取差异基因;使用一步过连通测算和多步骤隐藏节点测算获得拓扑基因;采用富集分析法分析其生物功能;借助MetaCore平台构建分子机制网络图。结果:与对照组相比,金龙胶囊组共有37个差异基因(倍数>2),106个拓扑基因。金龙胶囊的靶点主要集中在细胞粘附和凋亡、免疫应答、神经组织发育等。结论:金龙胶囊通过诱导神经细胞特有基因表达和抑制干扰素信号转导发挥抗脑肿瘤作用。

金龙胶囊治疗脑肿瘤药理机制研究

目的研究复方中药金龙胶囊(守宫、金钱白花蛇和蕲蛇)治疗脑肿瘤的药理机制。方法利用基因芯片技术取得金龙胶囊干预后裸鼠脑肿瘤组织的差异基因表达谱,采用网络药理学和系统生物学的分析方法,进行整体性、系统性分析。结果基因芯片检测发现了96个差异基因(ratio>2)。网络药理学和系统生物学分析结果显示,差异基因涉及多个生物学过程、分子功能、细胞组件和信号通路,与肿瘤发生、发展关系密切。所预测疾病的前10位中,7种为肿瘤,其中前3位均为神经系统肿瘤,分别是恶性胶质细胞瘤、星形细胞瘤和其他神经系统相关肿瘤。结论金龙胶囊可干预多基因、多通路、多环节,形成一个复杂的调控网络,发挥抗脑肿瘤的作用。

金龙胶囊对耐紫杉醇及长春新碱肿瘤细胞株的逆转及增敏作用

目的评价抗肿瘤复方中药金龙胶囊对耐紫杉醇及长春新碱(VCR)肿瘤细胞的逆转及增敏活性。方法测定金龙胶囊对四种耐药细胞(人肺腺癌耐紫杉醇细胞A549/Paclitaxel、人乳腺癌耐紫杉醇细胞MX-1/Paclitaxel、人口腔上皮癌耐长春新碱细胞KB/V、人肝癌耐5-氟尿嘧啶细胞Bel7402/5-Fu)及相应亲本细胞的IC50,然后将无毒浓度金龙胶囊与化疗药合用,评价其对各细胞获得性耐药、交叉耐药和内在耐药的逆转活性及细胞增敏作用。结果 100、200、400μg/ml金龙胶囊对A549/Paclitaxel细胞对Paclitaxel的获得性耐药有一定逆转活性,最高达10.64倍;50、100、200μg/ml金龙胶囊在MX-1细胞对Paclitaxel及VCR均显示一定增敏活性,最高达12.61,且有量效关系;200μg/ml金龙胶囊对Bel7402/5-Fu细胞对VCR的内在耐药具有一定增敏作用,达4.03倍。结论金龙胶囊具有一定化疗耐药逆转和化疗增敏潜能,并且有细胞选择性和化疗药物选择性。

复方中药金龙胶囊抗脑肿瘤药效及机制的初步探讨

目的探讨金龙胶囊对裸鼠原位脑肿瘤的药效及机制。方法建立裸鼠原位脑肿瘤动物模型,予以替莫唑胺(0.096 g·kg-1)、高、低剂量金龙胶囊(0.75、1.5 g·kg-1)和溶媒干预,用荧光成像技术实时监测肿瘤。连续灌胃给药28 d后处死裸鼠。用基因芯片检测模型组和金龙胶囊组肿瘤组织的基因表达谱,RT-PCR方法验证金龙胶囊组表达谱中上调最显著基因的表达量。结果与模型组相比,给药28 d后,阳性对照组、金龙胶囊高、低剂量组均明显抑制颅内肿瘤生长(P<0.05);但阳性对照组小鼠体质量降低显著(P<0.05);与模型组比较,金龙胶囊组上调差异达2倍以上基因有48个,下调差异达2倍以上的基因48个。其中表达差异最为显著的基因为VNN1,上调比率为9.4595。RT-PCR测得金龙胶囊组VNN1表达量为模型组的48.34倍。结论金龙胶囊可有效抑制裸鼠颅内肿瘤生长,安全性好,48个基因表达上调,VNN1是其潜在靶点之一。

基于转录组学探讨黄芪甲苷逆转乳腺癌阿霉素耐药的作用机制

目的:采用转录组学技术探讨黄芪甲苷逆转乳腺癌阿霉素(DOX)耐药的作用机制。方法:通过接种人乳腺癌DOX耐药细胞构建原位乳腺癌耐药裸鼠模型,根据裸鼠肿瘤体积和体质量随机分为对照组、DOX组、DOX-黄芪甲苷联用组,取各组裸鼠肿瘤组织用以提取总RNA,Illumina平台测序,检测各组裸鼠肿瘤组织中所有基因表达差异,通过功能注释与富集分析,筛选出与耐药产生及逆转相关的基因及信号通路。结果:黄芪甲苷与DOX联用可上调Dkk-1、神经生长因子受体、NF-κB、BAMBI基因的表达;下调了GPC-4、分泌性卷曲相关蛋白5、FLT4(VEGFR3)、IQSEC2基因表达。结论:黄芪甲苷对乳腺癌DOX耐药发挥增敏或逆转耐药的作用机制可能与调控Wnt、MAPK等信号通路有关。

黄芪甲苷逆转人乳腺癌细胞MDA-MB-231对阿霉素多药耐药的体外研究

目的探讨黄芪甲苷对耐药人乳腺癌细胞MDA-MB-231/DOX多药耐药的逆转作用。方法以噻唑蓝(MTT)法测定黄芪甲苷的细胞毒性及其处理前后乳腺癌细胞对阿霉素的敏感性或耐药性变化。采用乙醇注入法-硫酸铵梯度法构建共载阿霉素-黄芪甲苷的脂质体(LPs-DOX/AS),并评价其对乳腺癌细胞多药耐药的逆转作用,采用流式细胞术测定LPs-DOX/AS对细胞凋亡的影响。结果黄芪甲苷在实验浓度范围内对乳腺癌细胞无明显细胞毒性;与黄芪甲苷联用后,阿霉素对MDA-MB-231、MDA-MB-231/DOX细胞的半数抑制浓度(IC50)值均下降(P<0.05),并且对耐药细胞的干预效果更明显(P<0.01)。脂质体包载后的LPs-DOX/AS-IV比游离DOX/AS-IV对2种乳腺癌细胞的IC50值均下降(P<0.05),同样对耐药株的效果更明显(P<0.01)。经LPs-DOX/AS-IV处理的耐药株细胞凋亡率也显著高于游离药物组(P<0.05)。结论黄芪甲苷对人乳腺癌细胞MDA-MB-231对阿霉素多药耐药具有很好的逆转作用,黄芪甲苷与阿霉素联用及其脂质体共递送体系的开发可以有效逆转或增敏乳腺癌的多药耐药。

苯溴马隆对高尿酸血症模型大鼠脂质代谢的影响

目的基于脂质组学方法研究苯溴马隆治疗高尿酸血症(hyperuricemia,HUA)大鼠的作用机制,并揭示尿酸水平增高与脂质代谢异常的内在相关性。方法利用超高效液相色谱-四极杆飞行时间质谱(UPLC-Q-TOF/MS)技术,结合主成分分析(PCA)和偏最小二乘法判别分析(OPLS-DA)研究正常组、模型组和苯溴马隆组的大鼠血清中内源性脂质代谢物的变化,寻找潜在生物标记物,分析相关代谢通路,绘制代谢网络机制图。结果脂质组学分析发现,苯溴马隆可使HUA大鼠体内水平异常的20个差异代谢物回调到正常水平;相关代谢通路分析发现,苯溴马隆影响果糖诱导HUA大鼠血清中的脂质水平,主要与甘油磷脂代谢通路相关。结论苯溴马隆对HUA的治疗可能与改善体内甘油磷脂代谢通路异常密切相关。

推广鲜药先要做好质量标准

鲜药在某些内科杂病的调治、危重病症的救治以及解毒外治等方面疗效独特，具有干品不可替代的作用。传承和发展鲜药，不仅有利于祖国中医药文化的弘扬，而且对临床上治疗疑难杂症、急性热病具有重要意义。