沙眼衣原体D型MOMP基因原核表达载体的构建及序列分析

目的:构建沙眼衣原体D型MOMP基因的原核表达载体,为沙眼衣原体基因工程疫苗的研究提供材料。方法:PCR技术扩增D型沙眼衣原体标准株的MOMP基因片段,将其定向插入原核表达载体pRSET多克隆位点中,构建重组表达载体。并用酶切分析、PCR扩增及序列测定方法对重组载体进行鉴定。结果:沙眼衣原体MOMP基因被正确克隆到原核表达载体pRSET-A中,测序结果与Genebank中AF279589等菌株序列有99.99%同源性。结论:原核表达载体pRSET-MOMP构建成功。

血清基质金属蛋白酶-3检测试剂盒用于MODULAR P800型全自动生化分析仪中的性能评价

目的:评价MODULAR P800型全自动生化分析仪应用定量检测基质金属蛋白酶-3(MMP-3)方法的分析性能。方法:依据国家系列行业标准及国际指南要求,对MMP-3试剂盒在MODULAR P800型生化分析仪应用中的不精密度、准确度、灵敏度、线性范围、临床可报告范围、生物参考区间及抗干扰能力进行全面评价;采集表观健康体检者男性、女性各65名的血清标本,验证试剂盒说明书中的生物参考区间。结果:低浓度(30 ng/ml)及高浓度(160 ng/ml)两个水平MMP-3质控品日内不精密度分别为4.6%和1.2%,日间不精密度分别为5.8%和2.3%,均低于厂商的日内不精密度10%及日间不精密度10%;不同浓度校准品测量结果与靶值相比偏差均<3%;验证定量检出限为10 ng/ml;线性范围和临床可报告范围分别为10~1600 ng/ml和10~8000 ng/ml,表观健康体检者的血清标本验证结果中,只有2名的标本超出试剂盒说明书中生物参考区间,验证通过。采用商业化干扰标准物质检测结果显示,在游离胆红素<20 mg/dl、结合胆红素<20 mg/dl,血红蛋白<500 mg/dl,乳糜<2000 FTU(福尔马肼浊度)对检测结果影响轻微。结论:Modular P800型全自动生化分析仪测定血清MMP-3的分析性能与厂商数据一致,符合临床要求,可以应用于临床。

3例血栓性血小板减少性紫癜临床分析及普拉斯米克评分的应用

血栓性血小板减少性紫癜(thrombotic thrombo-cytopenic purpura,TTP)是一种严重的微血管性血栓-出血综合征,临床上并不常见,其临床表现不具特异性,鉴别比较困难,常以体内血小板聚集,外周血出现大量红细胞碎片为特征。该病起病急,进展快,病情凶险,如得不到有效治疗,死亡率高达90%,因表现为血小板减少,如盲目输注血小板制剂有可能加重血栓形成并造成严重后果。本文报道3例TTP的诊治经过。

日本积水乳胶凝集法KL-6试剂盒的性能评价

目的评价日本积水公司血清人唾液化糖链抗原6(KL-6)检测试剂盒在罗氏MODULAR P800全自动生化分析仪上的分析性能。方法参照国内行业标准及国际指南的要求,对血清KL-6检测试剂盒在罗氏MODULAR P800生化分析仪上的不精密度、正确度、分析检测范围、临床可报告范围、检测限、生物参考区间验证及抗干扰能力进行全面评价。结果低值和高值2个水平的KL-6质控品日内不精密度分别为3.15%和0.98%,日间不精密度分别为4.99%和1.66%,均低于厂商声明的标准。校准验证结果显示,不同水平校准品测量结果与偏差均<2%。线性范围和临床可报告范围分别为50~5000U/mL和50~15000U/mL;验证定量检测限(LoQ)为50.0U/mL。以表观健康体检成人各74例的血清标本验证试剂说明书声明生物参考区间,结果只有3例超出,符合率为95.9%,验证通过。采用商业化干扰标准物质检测结果显示,在游离胆红素20mg/dL以下,结合胆红素20mg/dL以下,血红蛋白500mg/dL以下,乳糜微粒2000FTU以下对检测结果影响轻微。结论日本积水公司血清KL-6检测试剂盒在罗氏MODULAR P800全自动生化分析仪上的分析性能与厂商声明一致,符合临床要求,本检测系统可应用于实验室临床标本检测。

武汉地区糖化血红蛋白一致性计划的建立和评价

目的建立武汉地区糖化血红蛋白检测一致性计划(WHGHP),提高武汉地区各实验室间糖化血红蛋白(HbA_(1c))检测结果的一致性。方法通过调查问卷方式征集武汉地区自愿参加WHGHP的实验室。由3家有着良好检测质量保证的实验室组成HbA_(1c)定值实验室,对比对样本进行定值后,向其他参加WHGHP的实验室发放。统计各实验室的上报数据,计算2018年和2019年WHGHP的通过率和室间变异系数(CV)。选取2019年4个季度HbA_(1c)靶值为5.5%~6.0%的比对样本,统计各方法组内均值与偏移情况。结果参加WHGHP的实验室由2018年的23家增加到2019年的43家,参加实验室的通过率由2018年的81.8%~82.6%提升到2019年的83.7%~90.7%,WHGHP室间最大CV由7.9%降至3.6%,逐步接近美国病理学家协会(CAP)、美国国家糖化血红蛋白标准化计划(NGSP)、国家卫生健康委临床检验中心(NCCL)的HbA_(1c)室间CV。2019年4个季度中,第2季度各方法组内的偏移较大,最大CV达10.2%;第4季度的最大CV降至3.1%。结论WHGHP的建立和实施提高了参加实验室的HbA_(1c)检测质量,推动了武汉地区HbA_(1c)检测的一致性和标准化进程。

Abbott CELL-DYN Sapphire全自动血液分析仪的性能评价

目的:对Abbott CELL-DYN Sapphire全自动血液分析仪的性能进行评估。方法:根据卫生部行业标准制定的验证方法对该仪器检测白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)、血细胞比容(HCT)、血小板(PLT)、平均红细胞体积(MCV)、平均红细胞血红蛋白量(MCH)、平均红细胞血红蛋白浓度(MCHC)的本底计数、携带污染率、精密度、准确度、线性范围等方面进行验证,并进行稀释回收试验及手动与自动2种吸样模式对比、与Sysmex XE-5000全自动血液分析仪室内比对、WBC分类的人机对比试验。结果:该仪器检测WBC、RBC、HGB、PLT的本底值符合要求,携带污染率均≤0.36%,稀释回收率高,检测各项目的批内和批间精密度高,室内比对和不同吸样模式比对结果均符合要求;WBC、RBC、HGB、PLT的线性验证范围分别为(0~291)×10~9/L、(0~8.15)×10^(12)/L、(0~252)g/L和(0~1 525)×10~9/L,各项目检测线性良好,线性回归方程的斜率均≤1.00±0.05,相关系数均大于0.975;准确度验证中5份室间质评物的测定偏差均小于5.0%,WBC分类人机比对准确度100%,该仪器检测与手工镜检检测中性粒细胞(NEUT)、淋巴细胞(LYM)、单核细胞(MONO)、嗜酸性粒细胞(EO)、嗜碱性粒细胞(BASO)的相关系数分别为0.935、0.923、0.689、0.741、0.651。结论:Abbott CELL-DYN Sapphire全自动血液分析仪检测性能合格,能满足临床应用和临床实验室的血常规检测要求。

武汉地区0~3 d新生儿末梢血网织红细胞相关参数参考区间

目的初步建立武汉市0~3 d新生儿末梢血网织红细胞(RET)6项参数的参考区间。方法选取2018年6—12月华中科技大学同济医学院附属同济医院产科病房0~3 d新生儿406名,检测其网织红细胞比例(RET%)、网织红细胞绝对值(RET#)、高荧光强度网织红细胞比例(HFR%)、中荧光强度网织红细胞比例(MFR%)、低荧光强度网织红细胞比例(LFR%)、网织红细胞血红蛋白含量(RET-He)共6项参数,用于建立生物参考区间,均采用x±1.96s表示。结果不同出生天数新生儿RET 6项参数差异均有统计学意义(P<0.05);除HFR%外,其他5项参数不同性别新生儿差异均无统计学意义(P>0.05);武汉地区0~3 d新生儿RET 6项参数的生物参考区间为:RET%第1天2.63%~6.27%、第2天2.55%~6.35%、第3天2.06%~6.06%;RET#第1天(0.139~0.397)×10^12/L、第2天(0.150~0.400)×10^12/L、第3天(0.124~0.386)×10^12/L;HFR%(男)第1天12.16%~30.97%、第2天7.64%~29.30%、第3天4.85%~20.64%;HFR%(女)第1天10.64%~27.67%、第2天6.78%~25.10%、第3天2.06%~19.26%;MFR%第1天13.48%~25.73%、第2天13.24%~26.61%、第3天11.45%~23.00%;LFR%第1天48.67%~71.07%、第2天48.24%~77.26%、第3天58.38%~83.56%;RET-He第1天29.58~37.30 pg、第2天29.25~36.23 pg、第3天27.49~34.85 pg;结论因人群所属地区和年龄不同,RET参考区间也会存在差异,本研究初步建立了武汉地区0~3 d健康新生儿RET 6项参数的参考区间,可为贫血性疾病的诊疗提供依据。

基于电感耦合等离子体质谱的尿碘检测方法的建立及应用

目的建立基于电感耦合等离子体质谱(inductively coupled plasma mass spectrometry,ICP-MS)的尿碘检测方法,并应用于临床尿碘检测。方法采用碘元素的国家标准物质并利用基质尿为背景配制标准曲线,以1%四甲基氢氧化铵/0.2%曲拉通溶液作为稀释液对尿液标本进行稀释,建立一种临床检测尿碘的方法,评估该方法的不精密度、准确度、稀释线性、可报告范围、携带污染、检出限与定量限等,并应用于健康体检人群尿碘检测。结果测定德国ClinChek尿液元素标准品(No.8847,No.8848)与尿碘国家标准物质(GBW09108m,GBW09109i),检测值均在可接受范围内,日间不精密度小于10%。2份随机临床尿液标本3个浓度的加标回收率在(100±10)%以内,尿液标本稀释2倍的回收率在(100±10)%以内,该方法无明显携带污染,检出限4.28μg/L,定量限6.81μg/L。该方法应用于165份健康体检人群的尿碘检测结果显示,尿碘中位数225.4μg/L,尿碘/尿肌酐比中位数为160.2μg/g,95%数据分布区间为尿碘62.0～734.6μg/L,尿碘/尿肌酐比值73.3～560.9μg/g。结论该方法利用电感耦合等离子体质谱法检测尿碘,快速准确,各项参数均能满足临床检测需求。应用于健康体检人群尿碘检测显示,人群碘摄入量较为合适。

某品牌血液分析仪测定全血样本红细胞和网织红细胞新参数稳定性分析

为分析临床常见症状--贫血的原因,XN-20全自动血液分析仪(简称XN-20)增加了网织红细胞(reticulocyte,RET)和红细胞(red blood cell,RBC)新参数,包括网织红细胞百分比(the percentage of reticulocyte,RET%)、网织红细胞绝对值(the absolute value of reticulocyte,RET#)、低荧光网织红细胞百分比(the percentage of low fluorescent reticulocyte,LFR%).

肿瘤标志物在脐尿管癌诊断中的价值

目的分析脐尿管癌患者CEA、CA199、CA724的表达情况,探索其与疾病诊断、分期、进展和治疗反应的相关性。方法选取12例进行了相关肿瘤标志物检测的脐尿管癌患者作为研究对象,分为远处转移组4例和非转移组8例。选取40例膀胱尿路上皮癌患者和40例健康人群作为对照组。运用SPSS 23.0和MedCalc 19进行数据分析。结果 12例脐尿管癌患者均为腺癌。脐尿管癌组患者CEA表达水平明显高于尿路上皮癌组和健康对照组(P=0.01)。CA724在远处转移组中的阳性检出率明显高于非转移组(75% vs.0,P=0.018)。单独检测时,CEA诊断脐尿管癌的AUC最大,为0.750,95%CI:0.584~0.916。CEA、CA724联合检测与三种肿瘤标志物联合检测的AUC均大于单项检测的AUC,但差异无统计学意义(0.817 vs.0.805,P=0.8509)。结论脐尿管癌患者CEA表达水平明显增高,CA724可作为脐尿管癌远处转移的预测指标,且与CEA联合检测可为脐尿管癌的临床诊断提供有效参考。

电感耦合等离子体质谱法快速检测全血中13种必需及有毒元素

目的利用电感耦合等离子体质谱(ICP-MS)建立快速测定全血中13种必需及有毒微量元素的方法。方法采用0.1%Triton X-100+0.1%HNO3+200ppb Au对全血样品稀释20倍后直接用ICP-MS分析,采用碰撞反应池(CCT)消除质谱干扰。结果测定Seronorm全血质控品(L2(Ref:210205),L3(Ref:210305)),各元素检测值均在可接受范围内,病人全血标本各元素两个浓度的加标回收率基本都在100±10%以内,方法检出限Pb等10种微量元素为0.02-0.95ug/L,常量元素Fe、Ca、Mg为0.01-1.50mg/L,日间精密度各元素均小于9.0%。结论本研究使用CCT的ICP-MS技术直接测定全血中l3种必需及有毒微量元素,方法简单、快速且准确,可满足日常大量标本的快速检测要求。

武汉地区0~12岁健康儿童血常规检验项目参考区间调查

目的调查武汉地区0 ~12岁健康儿童血常规检验项目参考区间.方法收集1 035例0~12岁健康儿童全血样本,按年龄分组,进行血常规检验.结果0~1岁组、2~6岁组、7~12岁组男童和女童WBC值和参考区间比较差异无统计学意义(P>0.05),RBC值和参考区间比较差异有统计学意义(P<0.05).RBC、HGB结果与文献数据较一致.结论研究初步建立了适用于武汉地区0~12岁健康儿童的血常规检验项目参考区间.

XN-9000血小板检测方法的选择在妊娠合并血小板减少中的运用

目的:使用血细胞分析仪XN-9000不同的检测方法分别检测妊娠合并血小板(PLT)减少产妇及正常待产妇的PLT值,以评估其方法学的准确性。方法:收集产科妊娠合并PLT减少待产妇193例(PLT<100×10~9/L),同时收集PLT正常待产妇224例(PLT>100×10~9/L),利用XN-9000血细胞分析仪分别使用阻抗法通道(PLT-I)和荧光法通道(PLT-F)检测PLT,手工PLT计数(PLT-M)作标准对照。结果:正常待产妇的PLT-I与PLT-F、PLT-M进行比较,3种方法间的差异均无统计学意义(P>0.05),其均值分别为207.43、208.32、209.05。晚期妊娠合并PLT减低组PLT-I与PLT-M的差异有统计学意义(P<0.05),其均值分别为59.41和70.30,其相关系数r为0.879,其偏倚Bias为-10.88;PLT-F与PLT-M的差异无统计学意义(均P>0.05),其均值分别为70.91、70.30,其相关系数r为0.947,其偏倚Bias为0.61;血小板平均体积(MPV)、大血小板比率(P-LCR)、血小板体积分布宽度(PDW)在2组之间差异有统计学意义(P<0.05),妊娠合并PLT减少产妇分别为12.03、41.11、16.70,正常待产妇分别为10.25、28.56、12.53。结论:妊娠期待产妇,如遇合并PLT减少并MPV、P-LCR、PDW明显增大时,应选择荧光法通道重新检测PLT,而真实的检测结果对该类型产妇生产方式及麻醉方式的选择都有一定的指导意义。