SIRT1通过降低NF-kB p65表达减轻异烟肼致人肝细胞损伤的研究

目的探讨沉默信息调节因子1(SIRT1)在异烟肼致人肝细胞损伤中的作用。方法培养人正常肝细胞HL-7702,实验分为6组:空白对照组、异烟肼组、异烟肼+SIRT1激动剂组、SIRT1激动剂对照组、异烟肼+SIRT1抑制剂组、SIRT1抑制剂对照组。取各组细胞上清液测定丙氨酸转氨酶(ALT)、天门冬氨酸转氨酶(AST)含量;实时荧光定量聚合酶链反应(q RT-PCR)检测肝细胞SIRT1、NF-k B p65 mRNA表达水平;酶联免疫吸附法(ELISA)检测SIRT1、核转录因子k B(NF-k B p65)、白细胞介素6(IL-6)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)蛋白表达水平。结果与空白对照组比较,异烟肼组细胞SIRT1的mRNA和蛋白表达下降(P<0.05),其下游靶基因NF-k B p65的mRNA和蛋白表达升高(P<0.05),炎症因子IL-6、TNF-α蛋白表达水平升高(P<0.05)。加入SIRT1激动剂可减轻异烟肼引起的炎症反应,加入SIRT1抑制剂可使NF-k B p65、IL-6、TNF-α表达水平进一步升高从而加重细胞的炎症损伤。结论异烟肼诱导肝细胞损伤过程中,降低SIRT1水平,增加炎症因子的表达。SIRT1的激活可以通过降低NF-k B p65表达进而减轻肝细胞损伤的发生。

乳腺癌化疗药物性肝损伤风险预测模型构建

目的通过收集乳腺癌患者化疗期间的各项临床数据,发现乳腺癌患者化疗时导致肝功能异常的影响因素,并建立风险预测模型。方法对入院的乳腺癌患者进行流行病学问卷调查、临床生化检测和血样标本的收集,并分析乳腺癌患者化疗期间的年龄、肿瘤分型、肿瘤TNM分期、化疗方案等数据,使用决策树构建乳腺癌化疗药物性肝损伤风险预测模型。采用EpiData 3.0建立数据库,R软件进行统计分析。结果共收治675例乳腺癌患者,均为女性。按照研究对象的纳入与排除标准,发现人口学信息、临床生化指标以及血样标本均收集完整的乳腺癌患者640例。经化疗后,106例乳腺癌患者发生肝损伤,占比16.56%。60~80岁年龄组发生药物性肝损伤的患者比例(22.82%)高于其他年龄组,且肝损伤的发生率随着年龄的增加呈上升趋势(P<0.05)。已绝经的乳腺癌患者及有长期服药史的乳腺癌患者发生肝损伤的比例分别为21.17%和17.32%,高于未绝经和无长期服药史的肝损伤患者,差异有统计学意义(P<0.05)。肿瘤病理学分型、肿瘤TNM分期及化疗方案均与乳腺癌患者药物性肝损伤发生率相关,其中化疗方案中联合用药组的肝损伤发生率为20.67%,明显高于其他药物组别,差异有统计学意义(P<0.05)。乳腺癌化疗药物性肝损伤风险的决策树模型筛选出3个预测肝损伤风险的观测指标为年龄、肿瘤TNM分期和联合用药,这三个指标对乳腺癌化疗药物性肝损伤风险预测的正确率为92.19%,其中灵敏度和特异度分别为86.36%和93.40%。结论年龄、是否绝经、长期服药史、肿瘤病理学分型、肿瘤TNM分期及化疗方案是乳腺癌患者化疗期间发生肝损伤的影响因素。结合以上影响因素建立了乳腺癌化疗药物性肝损伤风险预测模型,从而实现患者个体化治疗,保障乳腺癌患者化疗顺利进行。

CYP450、GSTs、UGT基因多态性与抗结核药物肝损伤的关系

目的探讨细胞色素P450(CYP450)、谷胱甘肽转移酶(GSTs)、尿苷二磷酸葡萄糖醛酸转移酶(UGT)基因多态性及其交互作用与抗结核药物性肝损伤(ADLI)发生的关系。方法选择接受抗结核化疗6个月内出现肝损伤的汉族结核病患者207例纳入病例组,以同期治疗中未出现肝功能异常的结核病患者207例为对照组。采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性法观察CYP1A2 734C/A、CYP3A4 18B-20232G/A、CYP3A5 3-6986A/G、CYP2C19 681G/A、GSTA1-69C/T、GSTM3缺失突变、UGT2B7-268A/G、UGT2B7 802C/T位点的多态性。采用单因素、多因素Logistics回归分析法分析CYP450、GSTs、UGT基因多态性与ADLI发生的关系。采用多因子降维法分析CYP450、GSTs、UGT基因多态性位点之间的交互作用与ADLI发生的关系。结果 CYP1A2 734C/A的AA基因型、CYP3A4 18B-20232G/A的GA基因型、UGT2B7-268A/G的AG基因型、UGT2B7 802C/T的TT基因型是ADLI的保护基因型,而CYP3A5 3-6986A/G的AG及GG基因型、GSTA1-69C/T的TT基因型则是ADLI的危险基因型。调整其他基因多态性的影响后,发现CYP3A4*18B-20232G/A、CYP3A5*3-6986A/G、UGT2B7-268A/G和UGT2B7802C/T位点基因多态性与ADLI的发生有关。多因子降维法分析得到UGT2B7-268A/G、CYP3A4 18B-20232G、CYP3A5 3-6986G组成的3因素模型为最佳模型,检验样本准确度为61.29%,交叉验证一致性为10/10。最佳模型的估计结果显示,与低危基因型组合相比,高危基因型组合显著增加ADLI的发病风险。结论 CYP3A4*18B-20232G/A、CYP3A5*3-6986A/G、UGT2B7-268A/G、UGT2B7 802C/T位点基因多态性与ADLI的发生有关,且基因位点之间存在交互作用,其中UGT2B7-268A/G、CYP3A4 18B-20232G、CYP3A5 3-6986G组合将显著增加ADLI的发生风险。

代谢综合征与肺腺癌患者临床分期的相关性研究

目的:探讨代谢综合征(metabolic syndrome,MS)与肺腺癌临床分期的相关性。方法:2018年1月至2019年1月由华北理工大学附属医院首次确诊为肺腺癌的患者135例。57例被诊断为代谢综合征合并肺腺癌患者纳入病例组,78例为单纯肺腺癌患者纳入对照组。收集病例人口学信息、首次生化检查结果、临床症状及肺腺癌临床分期,SPSS 23.0用于数据分析。结果:经多元Logistic回归分析发现MS并不会导致肺腺癌临床症状的改变(P均大于0.05),但是却与肺腺癌患者的临床分期相关(P=0.019),与单纯肺腺癌患者相比,MS合并肺腺癌的患者肿瘤临床分期为晚期的概率上升了51.8%。结论:MS与肺腺癌患者的肿瘤临床分期存在相关性,MS可能是导致肺腺癌临床分期严重程度的独立危险因素。

NADH/NAD+快速诊断结核分枝杆菌异烟肼耐药研究

目的分析NADH/NAD+稳态系统诊断结核分枝杆菌(mycobacterium tuberculosis,MTB)临床分离株异烟肼耐药的效能。方法 MTB临床分离株经改良罗氏药敏检测,以鉴别是否异烟肼和丙硫异烟胺(protionamide, Pto)耐药。设计异烟肼耐药靶基因katG和inhA突变位点引物,PCR扩增产物并测序,根据峰值判读是否突变。MTT法测定NADH和NAD+水平;通过ROC曲线下面积(area under curve, AUC)初步筛选异烟肼耐药的诊断标志物,采用净重新分类指数(net reclassification imporvement, NRI)和整体鉴别指数(integrated discrimination improvement, IDI)指标进一步评估异烟肼耐药的高效诊断指标。结果 24株表型异烟肼耐药的MTB临床分离株中,18株(75.00%)存在靶基因常见位点突变。经过ROC曲线初步筛选,相比靶基因突变和NAD+水平,NADH水平和NADH/NAD+比值诊断异烟肼耐药的AUC较大,分别为0.79和0.87,且与AUC=0.5相比,差异均有统计学意义(P<0.01);靶基因突变、NAD+水平、NADH水平和NADH/NAD+比值4个指标诊断Pto耐药的AUC,与AUC=0.5相比,差异均无统计学意义(P>0.05)。进一步评估NADH水平和NADH/NAD+比值诊断异烟肼耐药的效能,以NADH水平为参照,NADH/NAD+比值诊断效能增加(NRI增加10.6%,IDI增加2.0%),且差异均有统计学意义(P=0.03、0.006)。结论 NADH/NAD+比值可以作为MTB临床分离株异烟肼耐药的快速诊断方法,但具体比值的阈值大小仍需要大规模的流行病学研究证实。

IL-10启动子区基因多态性与抗结核药物性肝损伤关系

目的探讨白细胞介素10(interleukin 10,IL-10)启动子区的-592 A/C(rs1800872)和-819 C/T(rs1800871)位点基因多态性与抗结核药物性肝损伤(antituberculosis drug-induced liver injury,ADLI)易感性关系。方法采用病例对照研究设计,以发生肝损伤的180例患者为病例组,按性别进行频数匹配未发生肝损伤的180例患者为对照组。对研究对象进行流行病学调查,同时留取外周血以聚合酶链式反应-限制性片段长度多态性技术鉴定两位点基因型。结果研究对象两位点的基因型分布在ADLI间差异均无统计学意义(均有P> 0. 05)。-592 A/C位点的C等位基因在病例组的频率高于对照组,显性模型(CC+AC)出现ADLI的危险是AA型的1. 62倍,分布差异均有统计学意义(均有P <0. 05)。-819 C/T位点等位基因在两组中的分布差异无统计学意义(P=0. 190),但-592 A/C和-819 C/T两位点间存在连锁不平衡,单倍型-819 C/-512 C(OR=1. 37,95%CI:1. 02～1. 85)和-819 C/-512 A(OR=0. 49,95%CI:0. 34～0. 70)在病例组和对照组中的分布均有统计学差异(均有P <0. 05)。结论 IL-10启动子区-592 A/C和-819 C/T位点的基因多态性可能与ADLI易感性有关。

核转录相关因子2信号通路中微小RNA-153-3p对异烟肼致肝细胞损伤的影响研究

目的研究微小RNA(miR)-153-3p经由核转录相关因子2(Nrf2)信号通路调控异烟肼(INH)致肝细胞损伤的作用及其相关机制。方法体外培养HL-7702细胞,分为空白组、模型组、实验组和对照组。空白组不做任何处理,模型组用800μg·L^(-1)异烟肼处理,实验组和对照组在模型组的基础上通过miRNA mimics和阴性对照序列分别转染处理。用荧光素探针法检测细胞内活性氧(ROS)含量;以实时荧光定量聚合酶链式反应法(RT-qPCR)检测miR-153-3p,Nrf2、醌氧化还原酶(NQO1)和血红素氧合酶1(HO-1) mRNA表达水平;以蛋白免疫印迹法检测对应的蛋白含量。结果模型组的ROS荧光强度是空白组的1. 51倍,差异有统计学意义(P <0. 05)。过表达miR-153-3p的实验中,模型组、对照组和实验组的Nrf2 mRNA相对表达量分别为1. 06±0. 38,0. 88±0. 43,0. 35±0. 06; NQO1 mRNA相对表达量分别为1. 00±0. 10,0. 84±0. 11,0. 64±0. 18; HO-1 mRNA相对表达量分别为1. 00±0. 08,0. 90±0. 40,0. 40±0. 16;实验组分别与模型组及对照组比较,差异均有统计学意义(均P <0. 05)。结论异烟肼可致肝细胞发生氧化应激损伤; miR-153-3p可通过调控Nrf2信号通路,改变肝细胞状态。

微小RNA155通过降低核转录因子κB表达减轻异烟肼致人肝细胞损伤

目的探讨异烟肼(INH)致人肝细胞损伤中微小RNA155(miR-155)调控核转录因子κB(NF-κB)信号通路的作用机制。方法培养人正常肝细胞HL-7702,加入INH成功建立肝细胞损伤模型后,向细胞内转染小干扰RNA(miR-155 mimics与miR-155 inhibitor)。实验分为6组:对照组、模型组、过表达组(INH+miR-155 mimics)、mimics阴性对照组(mimics阴性对照)、敲减组(INH+miR-155 inhibitor)、inhibitor阴性对照组(inhibitor阴性对照)。赖氏法检测各组细胞上清液中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)含量;实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-q PCR)检测肝细胞中miR-155、NF-κB、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的mRNA表达水平。结果对照组,模型组,过表达组,mimics阴性对照组,敲减组,inhibitor阴性对照组的ALT分别为(3. 60±0. 48),(9. 63±0. 27),(15. 54±0. 35),(3. 95±0. 69),(7. 63±0. 36),(4. 33±0. 19) U·L^(-1); AST分别为(6. 97±0. 18),(13. 59±0. 22),(18. 53±0. 26),(6. 94±0. 23),(10. 79±0. 20),(6. 92±0. 20) U·L^(-1); NF-κB mRNA分别为0. 99±0. 02,2. 47±0. 04,3. 16±0. 05,0. 98±0. 05,1. 64±0. 06,0. 99±0. 02; TNF-αmRNA分别为0. 97±0. 02,2. 56±0. 12,3. 24±0. 06,1. 03±0. 02,1. 70±0. 03,0. 97±0. 02; IL-6 mRNA分别为1. 06±0. 02,2. 12±0. 06,2. 91±0. 07,1. 04±0. 04,1. 66±0. 12,0. 94±0. 03,差异均有统计学意义(均P <0. 05)。结论通过敲减miR-155可降低NF-κB的表达,从而减轻INH致人肝细胞损伤。

异烟肼对肝细胞CYP2E1和GSTP1表达的影响

目的探讨异烟肼(INH)诱导的人正常肝细胞中组蛋白乙酰化水平变化对CYP2E1、GSTP1表达的影响。方法将人正常肝细胞HL-7702分为对照组、INH组、INH+Garcinol组、Garcinol组、INH+TSA组、TSA组;培养3h后收获细胞和上清液。采用比色法检测细胞培养液中丙氨酸氨基转移酶(ALT)、天门冬氨酸氨基转移酶(AST)活性;荧光定量聚合酶链反应(PCR)法检测CYP2E1、GSTP1及下游凋亡指标JNK、Bax及抗凋亡指标Bcl2的mRNA水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测肝细胞HAT和去乙酰化酶HDAC活性及CYP2E1、GSTP1蛋白含量。结果与对照组相比,INH组HAT活性降低,HDAC活性增加,CYP2E1mRNA及蛋白表达增加,GSTP1mRNA及蛋白表达降低,凋亡指标JNK、Bax mRNA增加,抗凋亡指标Bcl2mRNA降低,差异均有统计学意义(P<0.05)。与INH组比较,加入Garcinol后,HAT活性降低,CYP2E1、GSTP1mRNA及蛋白表达亦降低;加入TSA后则相反,HDAC活性降低,CYP2E1、GSTP1mRNA及蛋白表达均增加;同时,2个抑制剂组的JNK、Bax mRNA表达减少,Bcl2mRNA表达增加,差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 INH能诱导人正常肝细胞乙酰化水平改变进而影响CYP2E1、GSTP1表达。

SIRT1及相关因子在抗结核药物致人肝细胞损伤中的作用

目的探讨沉默信息调节因子1(SIRT1)及相关因子在抗结核药物致人肝细胞损伤中的作用。方法将培养的人正常肝细胞HL-7702分为4组:空白对照组(A组)、异烟肼+利福平组(B组)、异烟肼+利福平+SIRT1激动剂组(C组)、SIRT1激动剂对照组(D组)。取各组细胞上清液检测丙氨酸转氨酶(ALT)、天冬氨酸氨基转移酶(AST)水平;实时荧光定量PCR(RT-PCR)法检测肝细胞中SIRT1、核因子κB(NF-κB)p65mRNA表达水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测SIRT1、NF-κB p65、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)蛋白表达水平。结果与A组比较,B组细胞SIRT1的mRNA和蛋白表达明显下降(P<0.01),其下游靶基因NF-κB p65的mRNA及蛋白表达升高(P<0.01),炎症因子IL-6、TNF-α蛋白表达水平升高(P<0.01)。与B组比较,C组细胞SIRT1的mRNA和蛋白表达增加(P<0.01),NF-κB p65的mRNA及蛋白表达减少(P<0.01),炎症因子IL-6、TNF-α蛋白表达水平降低(P<0.01)。D组与A组比较炎症因子表达差异均无统计学意义(P>0.05)。结论抗结核药物刺激可以造成肝细胞的炎症损伤,SIRT1的激活可通过降低NF-κB p65表达进而减轻肝细胞损伤发生。