重组干酪乳杆菌在模拟消化环境中生存性能的研究

目的 探讨重组干酪乳杆菌Lactobacillus casei 393在模拟胃肠道环境中的存活能力.方法 人工模拟胃肠道环境,即人工胃液（pH=1.5～4.5）、人工肠液、胆汁（质量浓度0.3～3.0 g/L）和高盐（质量浓度40～90g/L）.结果 重组干酪乳杆菌在pH为2.5～4.5的人工胃液中具有较强的生存能力,3 h活菌数仍达108/ml;在人工肠液中经过不同时间的作用后,重组干酪乳杆菌显出生长趋势;在0.3%的胆汁环境作用8 h仍有存活,且能耐受7%NaCl浓度的高渗环境.结论 实验为干酪乳杆菌Lactobacillus casei 393能否作为益生菌制剂在胃肠道中发挥作用提供了理论基础.

表达猪细小病毒VP2蛋白的重组干酪乳杆菌诱导小鼠产生特异性抗体

【目的】研究以干酪乳杆菌作为传递抗原活载体表达猪细小病毒主要免疫保护性抗原VP2蛋白的免疫特性。【方法】将构建的重组猪细小病毒(PPV)VP2基因的细胞表面表达型载体pPG-VP2电转化干酪乳杆菌L.casei393,获得阳性重组菌pPG-VP2/L.casei393。重组菌以2%乳糖为诱导物,在MRS培养基中进行诱导,经SDS-PAGE、Westernblot及间接免疫荧光分析,目的蛋白获得表达。将重组菌及空质粒菌株分别口服接种Balb/c小鼠,收集粪便及肠黏液样品测定小鼠产生抗VP2的特异性sIgA,采集血液样品测定小鼠产生抗VP2的特异性IgG,并对获得的抗体进行PPV中和活性的测定。【结果】重组干酪乳杆菌pPG-VP2/L.casei393免疫小鼠能够产生明显的抗PPV的sIgA和IgG抗体水平,其对PPV的中和效价分别为1﹕24和1﹕128。【结论】为PPV重组乳酸菌口服疫苗的研制提供了重要的物质基础。

猪瘟病毒T细胞表位E290多肽与猪细小病毒VP2蛋白在干酪乳杆菌中的共表达及免疫小鼠特异性抗体的测定

将分别编码猪瘟病毒T细胞表位E290多肽和猪细小病毒主要保护性抗原VP2蛋白的重组基因插入干酪乳杆菌分泌型表达载体pPG中,构建了重组表达载体pPG-VP2-E290,将其电转化干酪乳杆菌Lactobacillus casei 393,获得了猪瘟病毒T细胞表位E290多肽与猪细小病毒VP2蛋白的乳酸菌共表达系统,经2%乳糖在MRS培养基中的诱导表达,对诱导表达的菌体及培养上清液进行SDS-PAGE检测表明,有约70kDa蛋白得到了表达,表达蛋白的大小与理论值相符。Western blot分析结果表明所表达的蛋白具有与天然病毒蛋白一样的抗原特异性。以诱导表达上清液作为抗原进行的间接ELISA实验也表明,重组的目的蛋白获得了分泌表达。将该重组干酪乳杆菌经口服接种途径免疫BALB/c小鼠,收集粪便样品检测小鼠产生抗PPV的特异性sIgA抗体,采集血液样本检测血清中抗PPV及抗E290的特异性IgG。结果表明分泌型的重组菌pPG-VP2-E290/L.casei 393免疫小鼠能够产生明显的抗体水平,为重组猪瘟与猪细小病毒乳酸菌口服活菌疫苗的研制奠定了重要的物质基础。

表达重组猪瘟病毒E290多肽的干酪乳杆菌口服免疫特性及诱导特异性CTL反应的研究

经PCR扩增获得约60bp编码猪瘟病毒T细胞表位E290多肽基因片段,克隆至表达载体pPG-VP2中VP2基因5′端上游,命名为pPG-VP2-E290,电转化干酪乳杆菌,构建了表达猪瘟病毒E290多肽的重组乳酸菌系统。口服免疫BALB/c鼠和新西兰兔,检测诱导小鼠和兔体内产生特异性抗猪瘟病毒E290多肽IgG水平,并对E290多肽的CTL活性进行检测,同时对免疫兔进行猪瘟病毒攻毒实验,检测E290多肽抗体对免疫兔的保护作用。构建的重组猪瘟病毒T细胞表位的干酪乳杆菌具有良好的免疫性,口服免疫后的小鼠和兔血清中均检测到了较高水平的抗E290多肽抗体IgG,且能诱导小鼠机体产生抗猪瘟病毒的特异性CTL反应,亦证实猪瘟病毒E290免疫兔能够抵抗猪瘟病毒的攻击。

苏里格气藏岩石应力敏感性研究

在气藏的生产过程中,随着流体的产出,净上覆岩层压力不断升高,储层孔隙结构因受到压缩而发生改变,导致渗流速度降低,使油气井的产能下降。在模拟地层温度及应力条件下,分析了苏里格气藏小岩心和全直径岩心渗透率与净上覆岩层压力之间的关系,研究了小岩心与全直径岩心的应力敏感性。结果表明:岩心渗透率均随上覆岩层压力的升高而逐渐降低,且随净上覆岩层压力的增大,渗透率下降的幅度逐渐变小,并表现出明显的渗透率滞后效应;苏里格气藏岩石的渗透率损害程度或应力敏感性属于中等;全直径岩心的应力敏感性较小岩心弱。

猪细小病毒VP2蛋白在干酪乳杆菌表面的表达

将编码猪细小病毒主要免疫保护性抗原VP2基因插入干酪乳杆菌细胞表面表达载体pPG中,构建了重组表达载体pPG-VP2,将其电转化干酪乳杆菌Lactobacillus casei 393,获得了表达猪细小病毒VP2蛋白的重组干酪乳杆菌系统,经2%乳糖在MRS培养基中的诱导表达,SDS-PAGE检测表明,有约74kD蛋白得到了表达,表达蛋白的大小与理论值相符。Western-blot结果分析表明,表达的蛋白可被鼠源PPV抗血清所识别,间接免疫荧光实验结果表明,所表达的蛋白能够在干酪乳杆菌菌体表面检测到。

多孔介质对凝析气藏露点的影响机理研究

分析了多孔介质中的各种界面现象以及它们之间的相互关系,并分析了多孔介质影响凝析气藏露点的机理。认为,多孔介质对凝析气藏露点的影响体现在毛细凝聚和气体吸附的共同作用,由气藏流体的组成、状态及储集层的孔隙结构特征决定:多孔介质中的毛细凝聚和气体吸附均使得露点压力升高;富含凝析油的凝析气藏受吸附作用的影响较强,露点值升高的幅度相对较大;储层孔隙半径r越小,毛细凝聚作用的影响越强,露点值升高的幅度越大,当孔隙半径r<5×10-6cm时,毛细凝聚现象对露点的影响已不能忽略;对于低渗气藏,吸附态气体在总气量中所占的比重相对较大,吸附产生的影响相应也会增强;地露压差越大,吸附作用的影响越强;相同体系储层温度越高,由吸附和毛细凝聚引起的露点变化越小。

分泌型和非分泌型表达猪细小病毒VP2蛋白的重组乳酸菌经口免疫小鼠的效果分析

对比分析在不同细胞部位表达猪细小病毒(PPV)主要免疫保护性抗原VP2蛋白的重组干酪乳杆菌系统作为口服疫苗的免疫效果。将构建的细胞表面表达和分泌表达猪细小病毒VP2蛋白的重组干酪乳杆菌分别经口免疫BALB/c小鼠,免疫分3次进行,时间间隔为2周,每次连续接种3 d,每只小鼠每次接种100μL 1010CFU/mL的菌量,对照组小鼠接种相同剂量的PBS。初免后不同时间收集免疫小鼠粪便及肠黏液样本测定小鼠产生抗PPV的特异性sIgA抗体水平,采集小鼠血液样本测定其血清中抗PPV的特异性IgG抗体水平。间接ELISA检测结果表明,两种表达系统均能诱导小鼠产生黏膜及系统免疫应答,分泌型的重组菌系统免疫小鼠诱导机体产生的抗PPV的特异性sIgA和IgG抗体水平高于细胞表面表达型的重组菌系统的免疫效果,表明分泌型的重组乳酸菌作为活菌疫苗具有更好的免疫性。

缓慢释放型起泡剂的研究与应用

针对普通起泡剂在井筒中溶解迅速、发泡时间短、泡沫排水采气效果差的难题,开展了缓慢释放型起泡剂的研究,考察了温度、矿化度、甲醇、凝析油对起泡剂的影响。结果表明,温度从60℃升至100℃,起泡剂起泡高度和携液率分别从120 mm和77%降至105 mm和56%;矿化度由0增至250 g/L,起泡高度和携液率分别从130 mm和71%降至90 mm和48%;甲醇体积分数由0增至40%,起泡高度和携液率分别从140 mm和85%降至70 mm和78%;凝析油体积分数由0增至40%,起泡高度和携液率分别从140 mm和85%降至120 mm和76.3%。该起泡剂耐温90℃、抗矿化度150 g/L、抗甲醇30%、抗凝析油30%,完全满足苏里格气田低压低产气井的排水采气需求。2012~2013年开展了5口井现场试验,平均油套压差降低1.3 MPa,平均产气量增加0.07×104m3/d。

干酪乳杆菌Lactobacillus casei 393在鼠消化道内定植能力及分布规律的研究

研究了干酪乳杆菌Lactobacillus casei 393在小鼠肠道中定植能力及分布规律。利用羧基荧光素二乙酸琥珀酰亚胺酯分子探针对干酪乳杆菌Lactobacillus casei 393进行标记,以每只1010mL-1的量,口服途径喂给BALB/c鼠,分别于口服后的第1,3,5,6 d取其十二指肠、空肠、回肠、结肠等肠段,通过流式细胞仪检测肠内的标记阳性菌。实验结果显示:经口服后第5 d,干酪乳杆菌Lactobacillus casei 393开始在BALB/c鼠肠道中定植,在十二指肠、空肠、回肠、结肠的定植率分别为28.70%,29.77%,15.63%,26.17%,第6 d标记的阳性菌出现明显的生长趋势,阳性检出率分别为71.77%,57.31%,65.44%,53.13%。研究表明干酪乳杆菌Lactobacillus casei 393具有良好的肠道定植能力。

梅花鹿的同期发情技术

于 2 0 0 0年 9月 9日 ,在吉林松花湖鹿场对 30头东北梅花鹿分两试验群进行了同期发情试验。两试验群分别采用不同的试验药物进行处理 :第一试验群 (共 14头 )采用了 18甲基炔诺酮埋植并配合PMSG、HCG和雌二醇的处理方法 ,其中 18甲基炔诺酮采用了高 (80mg/头 )和低 (6 0mg/头 )两剂量进行了对比试验 ;第二试验群 (共 16头 )采用了PG两次处理同时配合PMSG和HCG的处理方法 ,其中PG也采用高 (6 0 0 μg/头 )、低 (5 0 0 μg/头 )两剂量进行对比试验。通过试验 ,第一试验群中 :18甲基炔诺酮高、低两剂量组的同期发情率分别为 5 7.14 %和 0 ,其中 18甲基炔诺酮高剂量组的双仔率为 4 2 .86 % ,产仔时间也较上一年有明显的缩短 ,平均缩短天数为 2 3d。第二试验群中 :PG高、低两剂量组的第一情期同期发情率分别为 2 5 %和 14 .2 % ,PG低剂量组产仔时间也比上一年缩短了 2 1d。本次试验的两试验群的受胎率均为 10 0 % 。

梅花鹿血液中卵磷脂含量的高效液相色谱法测定研究

研究建立了梅花鹿血液中卵磷脂含量测定的高效液相色谱法。对采集的梅花鹿血液，经3000r／min离心获得血清，血清通过0．45μm的微孔滤膜过滤后进样测定。色谱柱为C18柱（150mm×4．6mm），流动相为甲醇：乙腈（50：50），流速为2．0mL／min，紫外检测波长为206nm。结果表明：本方法在浓度为0～159．84μg／mL的浓度范围内峰面积与浓度呈线性相关，r=0．9997，变异系数RSD为0．66％，平均回收率为96．45％，该方法经济、简便、快速、灵敏度高、重现性好，适用于梅花鹿血液中卵磷脂的血药浓度检测。

论工伤优先原则和社会保险一体化

工伤优先原则在社会保险领域存在已久,但在社会保障体系发展的过程中,工伤优先与社会保险一体化存在一定的冲突。在经济发达的基础上,应选择社会保险一体化,没有任何保险是相对优先的。但基于我国目前的经济状况,仍须选择工伤优先,走渐进的社会保险一体化过程。

基于DNA环介导等温扩增技术快速检测溶藻弧菌的研究

溶藻弧菌是引起海产鱼类、虾、贝等细菌性疾病的主要病原之一,严重危害水产养殖业的发展,建立快速、准确的检测方法对防控溶藻弧菌及保障水产养殖安全具有重要意义。本研究引入环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification,LAMP)技术,以溶藻弧菌胶原酶基因为靶基因,建立了溶藻弧菌LAMP快速检测方法,45～60min内即可完成检测。试验结果显示,该LAMP方法可特异性检测溶藻弧菌,且灵敏度高,对纯培养溶藻弧菌的检测灵敏度约10CFU/mL,对污染水产品中溶藻弧菌的检测灵敏度为19CFU/mL。本研究建立的溶藻弧菌LAMP检测方法操作简便、检测快速,具有良好的实用性。

动物医学专业基础课实验教学体系的改革与实践

针对动物医学专业基础课,对实验教学体系的改革模式进行了构建与实施。在新的实验教学体系中,综合设计性实验,特别是多门课程综合交叉和学生自主设计的实验环节对培养大学生的创新能力具有重要的实践意义。

乳酸杆菌基因表达系统的研究进展

乳酸杆菌是人及动物肠道中重要的益生菌,被公认为安全级(generally recognized as safe,GRAS)微生物。乳酸杆菌表达系统是近几年发展起来的一种表达系统,随着乳酸杆菌分子生物学的发展、各类表达调控元件的分离,相继发展了乳酸杆菌的克隆载体、表达载体和整合载体。乳酸杆菌具有免疫佐剂、吸附黏膜、抗胆汁酸能力,以乳酸杆菌为载体,作为外源基因的传递和表达系统,研制口服疫苗,刺激黏膜免疫系统产生有效的免疫应答,具有重要开发前景。

基于环介导等温扩增技术水产品中副溶血弧菌快速检测方法的建立与应用

本试验基于环介导等温扩增(LAMP)技术,以副溶血弧菌toxR基因为靶基因,设计两对LAMP引物F3/B3和FIP/BIP,建立了副溶血弧菌LAMP检测方法,60min内即可完成检测。该LAMP方法特异性强、灵敏度高,对纯培养副溶血弧菌的检测灵敏度为42CFU/mL,对污染食品中副溶血弧菌的检测灵敏度为67CFU/mL。实践应用证明,本试验建立的副溶血弧菌LAMP检测方法操作简单、检测结果准确,具有良好的实用性。

肌肉生长抑制素基因在畜禽肌肉发育调控中的研究进展

肌肉生长抑制素(Myostatin)是主要在骨骼肌中特异性表达的肌肉发育负调控因子,和畜禽的生产性能密切相关。本文综述了Myostatin在畜禽肌肉发育调控中的研究进展,并对其应用前景进行了展望和讨论。

研究生学位论文匿名评审过程中相关主体分析与对策

研究生学位论文匿名评审制度是提高研究生学位论文质量的重要举措,是保证研究生培养质量的重要途径之一。然而,深入调查目前实行的学位论文匿名评审制度,发现实施过程中还存在着一定程度的形式化倾向,这一倾向的出现固然有多方面的原因,但学位论文匿名评审过程中各相关主体的利益及其强化是根本原因。要想解决现行研究生匿名评审制度形式化倾向的问题,需要加强制度建设与制度创新,通过严格执行论文上交时间、改变导师观念、强化评审专家的积极动机、加强对行政人员的管理等,改变现行匿名评审制度中的利益格局,以进一步发挥研究生学位论文匿名评审制度的作用。