荧光定量两探针法检测HCV RNA的研究

目的建立荧光定量两探针检测HCVRNA方法。方法对105例抗HCV抗体阳性和220例阴性样本,用荧光定量两探针法和2种商品荧光定量试剂进行检测,并对检测结果进行比较。结果荧光定量两探针法阳性率分别为89.5((94/105)和2.3((5/220)。两种商品荧光定量试剂阳性率分别为71.4((75/105)和0.45((1/220);69.5((73/105)和1.8((4/220)。结论荧光定量两探针法检测HCVRNA有较高的敏感性和特异性。

双探针实时荧光定量检测HCV RNA的研究

目的建立双探针荧光定量HCV RNA检测方法,探讨解决HCV RNA定量灵敏度和特异性问题。方法对89例抗HCV抗体阳性和220例阴性样本用双探针荧光定量法和两种商品荧光定量试剂方法进行检测。结果双探针荧光定量法阳性率分别为91.0%(81例)和2.72%(6例)。两种商品荧光定量试剂方法阳性率分别为82.0%(73例)和0.9%(2例);79.7%(71例)和2.27%(5例)。结论双探针荧光定量提高了HCV RNA检测的灵敏度和特异性。

结直肠癌变过程中增殖诱导配体及其受体表达水平分析

目的分析结直肠癌发生各阶段组织中增殖诱导配体（APRIL）及其受体mRNA的表达水平。方法在APRIL及其受体基因的高保守区设计相应引物和荧光探针，实时检测PCR产物的荧光强度，根据标准品建立标准曲线，由软件自动计算出待测样本中靶基因mRNA的准确含量，并以靶基因和内参β2微球蛋白（β2M）mRNA含量比值作为评价靶基因表达水平的指标。结果批内和批间重复性测定的变异系数（cv）分别为6．52％-12．02％和8．76％-14．16％。APRIL在中、重度异型增生肠组织中的表达水平显著高于正常肠粘膜（P〈0．05），在原位癌、浸润癌组织中的表达水平又显著高于正常肠粘膜（P〈0．05），而其受体B细胞成熟抗原（BCMA）和穿膜蛋白活化物（TACI）在各种胃粘膜病变之间表达水平差异无统计学意义（P〉0．05）。结论APRIL在结直肠癌病变演进过程中呈现累积和渐进趋势。可能在结直肠癌发生、发展过程中起重要作用。

线粒体基因异常糖尿病临床预报的探讨

目的 拟建立基因序列检测的糖尿病 (DM )临床预报方法。方法 对 10 4例糖尿病患者和 5 0例正常无DM家族史对照者 ,用聚合酶链反应扩增 3 161～ 3 610基因片段直接测序。结果 10 4例DM患者有 2 .88%同时出现mtDNA3 497C→T、3 5 71C→T点突变 ,和 3 2 90T→C点突变 ;1.92 %出现 3 42 1G→A基因突变。DM组与正常对照组比较有显著性差异 (P <0 .0 1)。结论 3 497C→T、3 5 71C→T位点同时突变 ,或同时合并其他基因突变 ;3 3 16G→A位点突变合并 3 2 90T→C或其他错义基因突变时与DM有关。

Youden图的衍变及其在临床化学质量控制中的应用

国际临床化学会(IFCC)与世界卫生组织(WHO)推荐的临床化学质量控制计划有较大区别。WHO规定中等实验室室间质评超过推荐的1.5CCV(VIS>150)允许误差界限为失控。

糖尿病周围神经病变患者血液流变学指标变化

对 78例糖尿病周围神经病变患者的血液流变学指标进行分析 ,发现该病患者发作时均有不同程度的改变 ;治疗前与治疗后比较 ,针刺法组患者血流变指标结果差异性显著 ( P<0 .0 1)

线粒体DNA3161-3610片断基因突变与糖尿病的关系

104例糖尿病(DM)患者和50名正常无DM家族史对照者的基因测序研究显示,线粒体DNA3316G→A伴随3290T→C、3421G→A点突变;3497C→T和3571C→T同时基因突变可能与DM发生有关。

结直肠癌组织APRIL表达检测方法的比较

目的观察结直肠癌组织中增殖诱导配体(APRIL)表达检测方法,实时荧光定量PCR法、免疫组化染色法的相关性。方法实时荧光定量PCR法检测29例结直肠癌患者肿瘤组织及自身癌旁组织;免疫组化染色法检测相同29例结直肠癌患者组织及正常结直肠组织12例的APRIL蛋白表达。结果 29例结直肠癌组织中实时荧光定量PCR法检测APRIL阳性率为93.1%(27/29);免疫组化染色法检测APRIL阳性率为89.6%(26/29);两方法比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论实时荧光定量PCR法、免疫组化染色法检测APRIL的表达方法,能为临床提供有诊断参考价值的信息。

糖尿病线粒体基因异常的临床预报

对104例糖尿病患者和58例正常无糖尿病家族史对照者,用聚合酶链反应(PCR)扩增3161-3610基因片段直接测序。通过基因突变特点和临床资料分析,mtDNA3316G→A伴随3290T→C、3421G→A点突变;3497C→T和3571C→T同时基因突变可能与DM有关。提出用PCR扩增3161-3610基因片段直接测序的糖尿病临床预报方法。

视网膜色素变性视紫红质部分基因序列检测

建立了重盐、异丙醇提取视紫红质 ( RHO)基因 DNA序列检测方法。结果显示正常人 RHO第 5外显子基因所选 2 77碱基排列与 Nathans- Hogness报道的基因密码一致。RHO基因直接提取法不能用于序列测定。该法与酚提取法相比 ,时间缩短数个小时 ,成本降低 50 %

关于医院评审中临床化学实验室间质量评价规定的问题

医院等级和一些荣誉称号的评审是建立在若干规定基础上的,对临床化学实验室间质量评价(简称室间质评)的规定就是其中之一。1986年江苏省卫生厅制定的《关于文明医院检查标准(草案)》中规定:“

糖尿病神经病变患者治疗前后理化指标的分析

用血液流变学和电生理检查作为糖尿病神经病变患者的理化指标 ,对 89例患者进行治疗前后比较分析。周围神经病变 78例、植物神经病变 11例 ,随机分为针刺治疗组和药物治疗组。结果 :周围神经病变针刺组治疗前后理化指标差异有显著性意义 (P <0 .0 1) ;植物神经病变针刺组治疗前后血流变差异显著 (P <0 .0 1) ;药物组无显著性差异 (P >0 .0 5 )。

增殖诱导配体及其受体在肿瘤组织中的表达与意义

目的分析增殖诱导配体(APRIL)及其受体在不同肿瘤组织及肿瘤发展不同阶段的表达水平,探讨其与肿瘤发生的关系。方法采用实时荧光定量聚合酶链反应(RFQ-PCR)检测了临床上常见肿瘤组织中APRIL及其受体mRNA的准确含量,并以靶基因和内参mRNA含量的比值作为评价靶基因表达水平的指标。结果肿瘤组织中APRIL表达水平显著高于交界组织(P<0.05)和正常组织(P<0.05);B细胞成熟抗原(BCMA)和穿膜蛋白活化物(TACI)表达水平在大多数肿瘤组织中与正常组织差异无统计学意义(P>0.05);APRIL在肠上皮化生、异型增生和胃癌组织中表达水平显著高于正常黏膜(P<0.05),APRIL在胃癌组织中表达水平显著高于肠上皮化生和异型增生(P<0.05),而其受体BCMA和TACI在各组胃黏膜病变之间表达水平无统计学意义(P>0.05)。结论成功建立RFQ-PCR检测APRIL及其受体mRNA含量的方法,具有较好的检测灵敏度和重复性;APRIL在肿瘤发生、发展过程中可能起了重要作用;除了BCMA和TACI外,肿瘤细胞可能还存在APRIL未知受体;APRIL在某些类型肿瘤有可能主要是通过受体BCMA而不是TACI发挥作用。

实时荧光定量检测HCV RNA含量的临床意义

目的:建立实时荧光定量RT-PCR(RFQ-RT-PCR)检测HCV RNA含量的方法,初步探讨HCV RNA含量变化与病情的相关性. 方法:HCV抗体阳性样本80例,包括慢性肝炎(CH) 39例,肝硬化(LC)23例,肝癌(HCC)18例,献血员样本40例为正常对照.在HCV基因组5’非编码区(5’UTR)设计特异性引物和一对杂交探针,构建相应基因片段载体,体外转录RNA作为标准品,根据其建立的标准曲线对血清HCV RNA进行定量,同时用传统的套式RT-PCR进行定性分析. 结果:本法检测HCV RNA含量的线性范围为1012-104copies/L,批内和批间重复性测定的v分别为1.68-5.97%和6.40-10.58%.在HCV抗体阳性患者中, 肝硬化和肝癌患者的HCV RNA含量显著高于慢性肝炎患者(7.75±0.29,7.86±0.32 vs 4.67±0.41,P<0.05), 而且HCV RNA含量与ALT水平呈正相关(r=0.89, t=8.29,P<0.05). 结论:RFQ-RT-PCR检测HCV RNA含量具有较好的灵敏度和特异性,其含量与丙型肝炎患者的病情变化及严重程度有一定相关性.

系统性红斑狼疮患者B细胞激活因子mRNA定量测定及其意义

目的建立实时荧光定量PCR(RFQ PCR)检测人B细胞激活因子(BLyS)mRNA含量的方法,初步探讨BLyS表达水平与系统性红斑狼疮(SLE)的相关性。方法在BLyS基因保守区设计特异性的引物和荧光探针,RT PCR扩增目的片段并实时检测产物的荧光强度,以标准品建立标准曲线,由软件自动计算出待测样本中BLySmRNA含量,并以BLySmRNA和内参β2M mRNA含量的比值作为评价BLyS表达水平的指标。结果本法检测BLySmRNA含量的线性范围为109pg/ml～101pg/ml,批内和批间变异系数(CV)分别为2.4%～7.4%和4.3%～12.3%。SLE患者BLySmRNA表达水平(1.45±0.33)显著高于健康献血员(0.88±0.13),P<0.01,而且与血清IgG水平和抗ds DNA抗体滴度有显著相关性。结论建立RFQ PCR检测BLySmRNA含量的方法,具有较好的检测灵敏度和重复性;BLyS在SLE的发生、发展及预后等方面可能具有重要作用。

冠心病患者载脂蛋白E、血管紧张素转换酶联合基因型研究

目的 :研究中国人载脂蛋白E(ApoE)基因多态性及血管紧张素转换酶 (ACE)基因插入 /缺失 (I/D)多态性与冠心病的关联。方法 :分别用PCR -RFLP及PCR技术检测了 12 9例冠心病患者及 90例健康人ApoE ,ACE基因型。结果 :冠心病组ε3 / 4基因型及ε4等位基因频率显著高于对照组 ,ε3 / 3 基因型及ε3 等位基因频率则显著低于对照组 ;ACE各基因型及等位基因频率两组间无显著差异 ;在ε4携带情况下 ,不同ACE基因型冠心病危险度不同 ,DD型 >ID型 ,而Ⅱ型似有一定的保护作用。结论 :ε4等位基因是冠心病的遗传易患因子 ;ACE基因与冠心病发病无显著关联 ,但对ε4等位基因有一定的“修饰”作用。

APRIL及其受体在结直肠癌变过程中表达水平的改变

目的探讨APRIL及其受体表达水平在结直肠癌变过程中的作用。方法采用实时荧光定量PCR(RFQ-PCR)技术检测结直癌发生各阶段组织中APRIL及其受体mRNA水平,并以靶基因和内参β_2-M mRNA含量的比值作为评价靶基因表达水平的指标。结果 APRIL在中、重度异型增生肠组织及原位癌、浸润癌组织中表达水平显著高于正常肠黏膜(P＜0．05),APRIL在癌组织中表达水平显著高于中、重度异型增生肠组织(P＜0．05),而其受体BCMA和TACI在结直肠癌发生各阶段的表达水平无统计学意义(P＞0．05)。结论 APRIL在结直肠癌的病变演进过程中呈现累积和渐进趋势,可能在结直肠癌发生、发展过程中起了重要作用,有可能成为结直肠癌早期诊断和抗癌治疗的靶分子。

RNA荧光定量标准品制备新方法的探讨

目的以丙型肝炎病毒(HCV)为例,介绍一种简便快速的RNA定量标准品的制备方法。方法RT-PCR扩增目的片段,产物以pGEM-T载体连接并转化感受态大肠杆菌DH 5α,经筛选和测序鉴定,阳性质粒体外转录合成cRNA,准确定量后作为标准品。结果RNA标准品具有较大的线性范围(109cop ies/m l^10 cop ies/m l),批内和批间重复性也较好,CV分别为1.68%~5.97%和6.40%~10.58%。结论此法制备的RNA标准品具有较好的检测灵敏度和特异性,适合临床推广应用。

针刺治疗糖尿病性周围神经病变临床研究

将 78例糖尿病性周围神经病变患者随机分为针刺治疗组和药物对照组 ,针刺组以益气养阴、活血通络为治则进行临床研究。结果显示 ,针刺组治疗前后疗效差异有显著性意义 (P <0 0 1 ) ,与对照组比较差异有显著性意义 (P <0 0 5 )。两组患者血液流变学检查和肌电图检查治疗前差异不明显 ,针刺治疗后差异有显著性意义 (P <0 0 1 )。

乙型肝炎病毒核酸的实时荧光定量PCR检测及其临床意义

目的建立实时荧光定量PCR(rea l-tim e fluorescence quan titative PCR,RFQ-PCR)检测HBV-DNA含量的方法,探讨其在乙型肝炎预防、诊断、治疗及判断病情等方面的临床应用价值。方法在HBV S基因高保守区设计了特异性的引物和探针,利用T aqM an探针的基本原理,PCR扩增目的片段并实时检测产物的荧光强度,根据标准品建立的标准曲线,由软件自动计算出待测样本中HBV-DNA的准确含量。结果220例临床样本的检测结果显示,乙肝大三阳患者HBV-DNA阳性率(98.8%)显著高于其它各组(P<0.01),病毒平均含量为7.52±0.43 cop ies/m l;小三阳患者HBV-DNA阳性率低于大三阳组(P<0.01),但平均病毒含量与大三阳组无差异(P>0.05),高达7.41±0.26 cop ies/m l;单独HB sA g阳性和单独HB sA b阳性组HBV-DNA阳性率分别为56.4%,19.2%,平均病毒含量分别为5.35±0.32 cop ies/m l,4.02±0.31 cop ies/m l;80例献血员血清仍有3例HBV-DNA阳性,其病毒含量低于其它各组。结论RFQ-PCR检测HBV-DNA含量比EL ISA法具有更好的灵敏度和特异性,能准确反映HBV在体内的复制情况,对临床上抗病毒药物的选择和判断疾病的预后意义重大。