结核分枝杆菌耐药性相关膜蛋白MmpL6的表达与纯化

目的构建结核分枝杆菌外排泵蛋白MmpL6(Rv1557)表达载体,在大肠杆菌E.coli中诱导MmpL6蛋白高表达并进行纯化。方法以结核分枝杆菌H37Rv菌株基因组DNA为模板,采用聚合酶链反应扩增目的基因片段,构建pET21b-MmpL6表达载体。将表达载体转化至大肠杆菌中,加入异丙基-β-D-硫代吡喃半乳糖苷(IPTG)诱导重组蛋白表达,并针对不同表达菌株、温度进行优化,获取最优表达条件。采用Ni-NTA亲和层析以及凝胶过滤色谱纯化目标蛋白。结果成功构建pET21b-MmpL6重组表达质粒,经IPTG诱导后,在Rosetta菌株中25℃条件下获得最高表达量。结论成功表达并纯化了MmpL6蛋白,为该蛋白后续的结构与功能研究奠定了基础。

术后化疗对HER2阳性老年胃癌患者外周血淋巴细胞亚群的影响

目的明确术后辅助化疗前后老年胃癌患者外周血淋巴细胞亚群的变化,分析人类表皮生长因子受体2(HER2)在老年胃癌患者预后评估中的价值。方法回顾性收集中国科学技术大学附属第一医院2017年1月~2019年12月收治的67例进行术后辅助化疗的胃癌患者的临床资料,分析不同年龄组HER2阳性及阴性患者化疗前后白细胞和各淋巴细胞亚群的数量变化。结果60岁及以上胃癌患者HER2阳性率为45.2%,明显高于60岁以下患者(阳性率为12.0%),差异具有统计学意义(P=0.003)。深入分析发现,60岁及以上胃癌患者首次化疗后,HER2阳性患者CD3^(^(+))T、CD3^(^(+))CD4^(^(+))T及CD3^(^(+))CD8^(+)T细胞绝对数均较化疗前显著降低(P均<0.05),且其CD3^(+)CD8^(+)T细胞绝对数显著低于HER2阴性患者化疗后水平。同时,CD3^(-)CD56^(+)NK细胞和CD4^(+)CD25^(+)Treg细胞在化疗前后无明显变化。而在HER2阴性患者中,化疗并不影响其淋巴细胞的数量。结论老年(≥60岁)胃癌患者HER2阳性比例显著增加,与HER2阴性患者相比,术后辅助化疗显著抑制HER2阳性患者淋巴细胞的数量,进而影响HER2阳性患者的免疫状态,由此推测精准的免疫治疗或联合小剂量化疗比传统化疗更适用于HER2阳性的老年胃癌患者。

共生菌对小鼠肺脏组织核转录因子κB与抑制性κB激酶α/β及磷脂酰肌醇3-激酶表达的调控作用

目的研究共生菌对小鼠肺脏组织中核转录因子κB(NF-κB)、抑制性κB激酶α/β(IKK-α/β)及磷脂酰肌醇3-激酶(PI3K)等信号通路分子表达的调控作用。方法用Western blot方法检测共生菌缺失小鼠(Abx鼠)及正常小鼠(WT鼠)肺脏组织中NF-κB、IKK-α/β及PI3K等的表达量及其磷酸化水平,并进行分析比较。结果小鼠缺失共生菌后,其肺脏组织中NF-κB表达上调(Abx比WT,1.609±0.084比1.000±0.000;t=7.287,P<0.01),NF-κB磷酸化水平上调(Abx比WT,2.039±0.133比1.000±0.000;t=7.812,P<0.01),IKK-α表达无明显变化(Abx比WT,1.206±0.095比1.000±0.000;t=2.170,P=0.055),IKK-β表达上调(Abx比WT,3.389±0.184比1.000±0.000;t=13.012,P<0.01),IKK-α/β磷酸化水平上调(Abx比WT,1.433±0.053比1.000±0.000;t=8.203,P<0.01),PI3K表达上调(Abx比WT,1.414±0.024比1.000±0.000;t=17.206,P<0.01),PI3K磷酸化水平上调(Abx比WT,3.171±0.237比1.000±0.000;t=9.160,P<0.01)。结论共生菌对小鼠肺脏组织中NF-κB、IKK-α/β及PI3K等的表达量及其磷酸化水平均有重要的调控作用。