基于RAA-CRISPR/Cas12a的鸡毒支原体核酸检测方法的建立

将重组酶介导的扩增技术(RAA)、CRISPR/Cas12a的切割反应及酶标仪或试纸条相结合,建立设备依赖度低的鸡毒支原体(Mycoplasma gallisepticum,MG)核酸检测方法。以MG基因mgc2为靶标,设计CRISPR RNA及RAA引物,并优化检测体系、评价新建核酸检测方法性能。结果表明,该方法特异性和灵敏性均较好,对除MG外其他常见病原体检测结果均为阴性,检测下限可达10 copies·μL^(-1)。与商业化荧光定量PCR试剂盒对比检测45份临床样品符合率超过93%。综上,通过将RAA与CRISPR/Cas12a相结合,建立一种不依赖昂贵仪器的MG核酸检测方法,具有良好应用前景。