丹参素衍生物对斑马鱼促血管新生作用的研究

目的观察丹参素衍生物(ADTM)对斑马鱼胚胎血管新生的影响,并探讨其可能作用的信号通路。方法选择正常血管转基因斑马鱼和血管生长因子受体酪氨酸激酶抑制剂(VRI)诱导血管损伤转基因斑马鱼两种模型,分别给予50、100、200μmol·L^(-1)的ADTM干预处理,以0.1%的DMSO为空白对照,分别观察不同浓度的ADTM对斑马鱼肠下静脉血管(SIVs)的直径和内皮细胞数以及节间血管(ISVs)生长的影响,并对VRI和ADTM处理后的斑马鱼做转录组学研究。用荧光定量PCR的方法对转录组测序的4个基因进行验证。结果对于正常转基因斑马鱼模型,ADTM处理后,斑马鱼的SIVs血管直径明显增加,内皮细胞的数目轻微增加;在VRI损伤模型中,ADTM表现出修复ISVs损伤的效果。转录组分析表明,19个明显变化的基因富集在胰岛素信号通路。荧光定量PCR的结果与转录组中获得的序列吻合。结论对于正常和血管损伤的斑马鱼模型,ADTM均有促血管新生的效果,其作用机制可能与胰岛素信号通路的激活有关。

从活血化瘀中药中虚拟筛选P2Y12受体拮抗剂及其抗血小板聚集作用的评价

目的建立从活血化瘀中药中虚拟筛选P2Y12受体拮抗剂的模型,并验证候选化合物抗血小板聚集的药理活性。方法根据《中国药典》中的活血化瘀药种类,找出了32种具有抗血栓作用的中药,建立中药成分的虚拟化合物库,以P2Y12受体为靶标蛋白进行虚拟筛选,获得结合自由能最低的化合物,然后进行体外抗血小板凝集实验以验证其活性。结果通过虚拟筛选,得到了结合自由能最低的化合物紫丁香苷,计算其结合自由能力为-14.3 kcal/mol。进一步的实验验证结果表明,该化合物有显著的抗二磷酸腺苷(ADP)诱导的血小板凝集作用。结论从32种活血化瘀的中药中,基于P2Y12受体三维蛋白结构,利用虚拟筛选的方法,筛选出紫丁香苷对ADP诱导的血小板聚集有显著的抑制作用,该模型可用来后续的进一步虚拟筛选P2Y12受体拮抗剂。

铝对斑马鱼幼鱼的神经毒性作用及其转录组学研究

目的探讨铝对斑马鱼的神经毒性作用及其在转录水平的机制。方法选取受精1 d后发育良好的斑马鱼胚胎,随机分为2组,分别给予单纯培养基(对照组)和50μg/L浓度的AlCl_3处理6 d(AlCl_3处理组)。检测幼鱼自主运动行为、活性氧(ROS)释放及转录组学变化。结果与空白对照组相比,经AlCl_3处理后的斑马鱼,表现出运动轨迹明显无规律,游泳速度减慢,差异有统计学意义(P<0.05);AlCl_3增加斑马鱼幼鱼的活性氧释放(P<0.05);转录组学数据显示,AlCl_3处理组与对照组相比,Neurogenin 1等19个与退行性神经疾病相关的基因表达发生显著变化(P<0.0001),22个显著变化的基因富集在MAPK信号通路。结论铝对斑马鱼具有神经毒性作用,其分子机制可能与Neurogenin 1等19个基因表达的变化及MAPK信号通路的调控有关。

旋毛虫属分类的研究进展

近年来,随着遗传学、生物学和生物化学的发展,已将旋毛虫属分为8个种和3个分类地位尚未定的基因型。文章就不同种和基因型的旋毛虫,分别具有的不同宿主、环境选择因素和世界性分布区域做一综述。

基因工程药物PBL教学模式的探索与实践

目的：探讨改良的PBL（Problem-BasedLearning，简称PBL，也称作问题式学习）教学法在医学院校的基因工程药物课程教育的效果。方法：围绕基因工程药物相关话题，20位同学自由选题后并进行汇报，然后在小组内讨论。针对同学们想到的问题做深入的文献查阅和总结。结果：同学们积极为发言做准备，学习氛围活跃，调动了同学们学习的积极性和主动新，提升了学生的自学能力，也有利于按学生的兴趣进行个性化人才培养。结论：改良后PBL教学法的采用，大大提高了基因工程药物课程的教学效率和质量，值得兄弟院校的同行进一步的推广和探索。

胆碱和蛋氨酸缺乏饲料诱导大、小鼠非酒精脂肪性肝炎动物模型的比较研究

目的为防治非酒精脂肪性肝炎(NASH)的研究提供理想的动物模型。方法将C57BL/6雄性小鼠和SD大鼠分别随机分成2组,分别喂养蛋氨酸-胆碱充足(MCS)饲料(正常组)和蛋氨酸-胆碱缺乏(MCD)饲料(模型组)。分别在各组中饲养3、5、8周后,取动物血清和肝脏。测定血清的谷丙转氨酶(ALT)、谷草转氨酶(AST)、甘油三酯(TG)和胆固醇(TC)的含量;肝脏切片后经HE染色,观察肝脏的病理形态学变化并对其病变程度进行评分。结果饲喂MCD饲料5周后,SD大鼠血清AST含量无显著变化(P>0.05),但是C57BL/6小鼠AST水平显著升高(P<0.05)。同时,SD大鼠和C57BL/6小鼠模型的血清ALT水平均显著升高(P<0.05),此外,SD大鼠和C57BL/6小鼠血清中TG和TC的水平均显著下降(P<0.05),肝组织的病理评分均出现显著升高(P<0.05)。但是C57BL/6小鼠血清AST、ALT的变化幅度及肝组织病理评分明显高于SD大鼠。结论 C57BL/6小鼠NASH模型优于SD大鼠NASH模型。C57BL/6小鼠NASH模型相对SD大鼠,更适合NASH的分子机制和防治药物的评价。

牛场布氏杆菌病的净化

奶牛布氏杆菌病是由布氏杆菌引起的一种人畜共患传染病,属于我国规定的二类动物疫病.布氏杆菌病严重危害着奶牛业的发展,其中奶牛是布氏杆菌病最易感动物,一旦在牛群中发生常引起奶牛场毁灭性打击.近年来随着奶牛业在全国各地的迅猛发展以及奶牛流通的增加,原在牧区流行的布氏杆菌病在内地也悄然上升.由于该病直接影响奶牛生产效益并危害人类健康,所以,有效地对该病进行防治和净化极为必要.现将奶牛场进行布氏杆菌病的防治与净化关键性措施概括如下,供广大同行参考.

生物工程本科生创新素质和自学能力培养的实践和探索

提高生物工程本科生的创新素质和自学能力是大学教育的主要目标。本文旨在对生物工程本科生创新素质和自学能力培养方面进行探讨,针对其目前培养过程中存在的问题进行了分析,指出了解决问题的基本方法。

阿奇霉素对斑马鱼心脏毒性的初步研究

目的建立阿奇霉素诱导斑马鱼幼鱼心脏毒性的模型,为后续抗菌类药物心脏毒性的机理研究奠定基础。方法以受精后2 d发育正常的斑马鱼胚胎作为模型,以不同浓度的阿奇霉素处理斑马鱼胚胎3 d后,观察斑马鱼胚胎心脏形态并计算其心率和心搏量以评价斑马鱼胚胎心脏的功能。结果 0.3和1 mm浓度的阿奇霉素作用3 d后,可见斑马鱼胎心明显毒性。与正常对照组比较,模型组斑马鱼胎心肿大,心率减慢和心搏量减小。结论阿奇霉素对斑马鱼胎心有明显毒性作用,且与阿奇霉素的浓度正相关,该模型可以用于后续抗生素类药物引起的心脏毒性的机理研究。

嗜水气单胞菌重组Aer毒素的纯化和抗原性分析

对原核表达的重组嗜水气单胞菌Aer毒素进行初步纯化,比较了它与天然Aer毒素的抗原性,为建立检测该毒素的免疫学方法奠定了基础。将原核表达的重组Aer毒素经SDS-PAGE后,切下目的蛋白,利用电洗脱法将蛋白洗脱出来,后经透析、PEG8000浓缩、定量,对獭兔进行免疫,采集血清,提纯IgG,在W estern b lotting试验中可与天然Aer毒素起反应,说明,体外表达的重组Aer毒素保留了天然Aer毒素所具有的抗原性。同时,将嗜水气单胞菌AHCS02菌接种于兔鲜血平板,30℃、培养15 h后,将具有β-溶血的单菌落于LB液体培养基中培养后,用饱和硫酸铵法提取上清液中的天然Aer毒素,用甲醛脱毒后,以同样免疫方法免疫獭兔,免疫结束后,采集血清提取IgG,在W estern b lotting试验中,可以检测到重组Aer毒素。试验说明:原核表达的重组Aer毒素和天然Aer毒素诱导獭兔产生的血清IgG抗体可以互相识别重组Aer毒素和天然Aer毒素,重组Aer毒素和天然Aer毒素有相似的抗原性。

鲤鱼IL8的克隆及序列分析

利用DD-RTPCR(正常鲤鱼外周血白细胞和经有丝分裂源刺激后白细胞的总RNA)获得的差异显示片段B10克隆(编码IL8的一段序列),对该基因进行DIG标记,对有丝分裂原刺激的鲤鱼外周血白细胞cDNA文库进行核酸杂交筛选,从0.8×104个重组噬菌体中,经过2轮筛选最终获得阳性克隆,挑选了3个分别命名为IL8-1,IL8-2,IL8-3。测序后经NCBI Blast分析表明,阳性克隆具有完整阅读框架,均为编码鲤鱼IL8的全长cDNA,编码的多肽由98个氨基酸残基组成,其相对分子质量理论推导值为10 848.9 Da,等电点为8.68。且与2003年12月Dev Comp Immunol.杂志报道的荷兰鲤鱼氨基酸的同源性达84%。

奶牛皱胃变位发病机理研究进展

近20年来,我国奶牛集约化饲养的规模在大中城市近郊地区迅速扩大,其皱胃变位的发病率也有明显增加。调查发现,平均有3.3%的奶牛会发生皱胃变位,产前3周到产后4周的围产期是发生此病的危险期。其中有85%表现为左方变位(left displace,LD),15%表现右方变位(right displace,RD)。文章从皱胃弛缓、机械性因素、胃壁损伤、某些营养物质缺乏、有毒物质慢性中毒、遗传因素及饲养管理等方面阐述了皱胃变位的可能发病原因及可能的发病机理,从而对该病的实验室检验指标进行描述和分析,以便建立系统的诊断思路。

鲤鱼外周血白细胞蛋白酶体激活因子PA28全长cDNA的克隆与差异表达分析

对DD-RTPCR获得的差异显示片段C15进行地高辛标记后作为探针,对有丝分裂原刺激的鲤鱼外周血白细胞cDNA文库进行核酸杂交筛选,从0.8×104个重组噬菌体中,经过2轮筛选获得阳性克隆DM7。测序分析表明,该阳性克隆长1 097 bp,具有完整的开放阅读框架,为编码鲤鱼蛋白酶体激活因子PA28的全长cDNA,编码249个氨基酸,含有PA28的α和β亚单位功能结构域,与已报道的斑马鱼的蛋白酶体激活因子PA28的同源性达93%。分离鲤鱼外周血白细胞,经有丝分裂原在不同条件下刺激后,利用Trizol提取总RNA,根据得到的PA28全长cDNA序列和鲤鱼β-actin的序列,设计引物,采用半定量反转录聚合酶链反应(RT-PCR)方法测定白细胞中PA28基因mRNA表达量的变化。结果表明,白细胞经LPS、ConA刺激后,PA28基因的mRNA表达量有所增加,但并不随时间的延长而持续增加。

噬菌体展示文库筛选技术的研究进展

噬菌体展示技术是将编码外源蛋白或多肽的基因片段定向插入到噬菌体的外壳蛋白基因区,使外源蛋白或多肽通过与噬菌体外壳蛋白融合而表达并展示于噬菌体表面,进而筛选表达特异蛋白或多肽的噬菌体,已发展成为生物学后基因组时代一个强有力的实验技术.噬菌体展示文库的筛选是其关键环节.为了提高筛选效率,许多研究者对传统的筛选技术进行了改进,如选择性感染噬菌体、迟延感染性噬菌体、以DNA为基础的筛选方法、亲合力捕获和反复筛选和封闭筛选法等,用于筛选的靶标也越来越具有多样性,使得这一技术有了更加广阔的发展前景.

旋毛虫新生幼虫期特异性基因N10的表达及鉴定

根据旋毛虫新生幼虫期特异性基因pBK-CMV-N10序列设计引物,利用PCR技术将基因N10的信号肽去除后,用T/A法克隆到pMD-18T载体,转化至大肠杆菌NovaBlue,经鉴定及序列测定,结果显示成功克隆到N10基因。将重组质粒pMD-18T-N10进行酶切后连接到原核表达载体pET-28a中,重组质粒经鉴定后转化大肠杆菌BL21star(DE3),用IPTG诱导表达出与理论相符的融合蛋白,相对分子质量为38700,诱导4h的表达量占菌体总蛋白量的15%。从N10重组蛋白提取可溶性融合蛋白,对其生物学特性初步鉴定结果表明,具有类似脱氧核糖核酸酶的活性。

RNA干扰技术在寄生虫基因功能研究中的应用

RNA干扰（RNAi）技术是近几年发现的一种基因沉默技术，已成为分析寄生虫基因功能的有效手段，它为基因治疗、药物阻断剂候选基因的筛选等方面的研究提供了新方法。该文对RNAi技术的发现、作用机制、分子特征及其在寄生虫基因功能研究中的最新进展作一综述。

丹酚酸B对阿霉素诱导H9c2细胞毒性的保护作用及其作用靶点

目的探讨丹酚酸B对阿霉素诱导心肌细胞毒性的保护作用及其可能的作用靶标蛋白。方法用MTT法检测丹酚酸B对阿霉素诱导H9c2细胞毒性的保护作用,用反向分子对接在线服务器Pharm Mapper预测丹酚酸B保护心肌细胞的相关作用靶点,用Autodock做正向分子对接对其反向对接的方法进行验证。结果 100μmol/L和300μmol/L丹酚酸B对阿霉素诱导的H9c2细胞毒性有显著的保护作用,丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶12和DNA拓扑异构酶2可能是丹酚酸B心肌保护作用的靶标蛋白。结论丹酚酸B对阿霉素诱导H9c2细胞毒性有一定的保护作用,其作用机制可能与调控丝裂原活化蛋白激酶磷酸酶12和DNA拓扑异构酶2有关。

凤冈富锌硒茶对ERp57蛋白酶的抑制作用及其有效成分的虚拟筛选

目的探讨凤冈富锌硒茶水提取物对抗血小板聚集的潜在药物靶点ERp57蛋白酶的抑制作用及其潜在的有效成分。方法利用超高效液相色谱分析凤冈富锌硒茶水提取物的主要成分,采用胰岛素浑浊度分析方法检测提取物对ERp57蛋白酶的抑制作用,采用体外血小板聚集率实验分析提取物对血小板聚集的干预作用。采用计算机虚拟筛选和实验验证相结合的方法,分析提取物中抑制ERp57蛋白酶的主要活性成分。结果凤冈富锌硒茶水提取物主要存在4种化合物,提取物对ERp57蛋白酶有显著的抑制作用,且表现出一定程度的抗血小板聚集作用,其中表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对ERp57蛋白酶的抑制作用最强。结论长期饮用绿茶有益于降低心血管疾病死亡率,可能与绿茶抑制ERp57蛋白酶活性,从而抗血小板聚集有关,其中EGCG是其主要有效成分之一。

基于网络邻近度方法探讨枣仁五味苓志复方改善睡眠的作用机制

目的评估枣仁五味苓志复方(ZWLZ)对小鼠睡眠的改善作用,采用网络邻近度方法探讨其促进睡眠的作用机制。方法采用雄性BALB/c小鼠,分为对照组、阳性药物组、ZWLZ低剂量组(0.32 g/kg)及高剂量组(0.96 g/kg),进行戊巴比妥钠睡眠时间延长实验和巴比妥钠睡眠潜伏期实验,同时检测相关睡眠指标。采用液相色谱-质谱联用(LC-MS)的方法检测获得枣仁五味苓志复方的化学成分,进一步利用网络邻近度计算方法,分析ZWLZ改善睡眠的物质基础。结果与空白组相比,高剂量ZWLZ组在睡眠小鼠模型测试中,显著延长戊巴比妥钠诱导小鼠的睡眠时间(P<0.05),显著缩短巴比妥钠睡眠潜伏期(P<0.05),并显著增加脑部5-羟色胺和γ-氨基丁酸含量。网络邻近度计算结果表明,茶氨酸、麦角胺、去氢骆驼蓬碱等8个成分的靶点集合与睡眠障碍相关蛋白的邻近度较小。结论ZWLZ可有效改善BALB/c小鼠睡眠,茶氨酸、麦角胺、去氢骆驼蓬碱等8个成分为潜在的干预睡眠障碍的有效成分。

富锌硒绿茶中PDI蛋白酶抑制剂的筛选及其抗血小板聚集的作用

目的从富锌硒绿茶中筛选蛋白质二硫异构酶(PDI)的抑制剂,探讨抑制剂对血小板聚集的抑制作用。方法从PDB(protein data bank)下载PDI的晶体结构(PDB ID:4EKZ);建立绿茶的化合物数据库;通过分子模拟软件MOE对化合物库进行PDI抑制剂的虚拟筛选,挑选出6个命中的化合物进行对PDI酶活性抑制作用的测试,然后对有抑制活性的化合物进行抗血小板聚集作用的测定。结果 6个虚拟筛选命中的化合物中,表儿茶素没食子酸酯(ECG)和表没食子儿茶素没食子酸酯(EGCG)对PDI蛋白酶具有抑制作用。其次,两个化合物对ADP诱导的血小板聚集也有抑制作用。结论绿茶活血化瘀的作用,与抑制PDI酶活性有关,ECG和EGCG是有效活性成分。