〔B25－Trp〕去B链C端五肽胰岛素酰胺的合成及性质

去Ｂ链Ｃ端八肽胰岛素（ＤＯＩ）与Ｇｌｙ－Ｐｈｅ－Ｔｒｐ－ＮＨ２通过胰蛋白酶催化缩合后，经分离纯化得到聚丙烯酰胺凝胶电泳均一的Ｂ２５－Ｔｒｐ取代的去Ｂ链Ｃ端五肽胰岛素酰胺（〔Ｂ２５－Ｔｒｙ〕ＤＰＩ－ＮＨ２）．酶促缩合率大于８５％，回收率为３６．２％。用小白鼠惊厥法测得〔Ｂ２５－Ｔｒｐ〕ＤＰＩ－ＮＨ２的体内活力约为天然胰岛素的７０％，用人胎盘细胞膜测得的其胰岛素受体结合能力为天然胰岛素的７２．５±２．４％；利用色氨酸和酪氨酸的内源荧光研究了此类似物的溶液构象．

人工合成成骨生长肽对正常小鼠造血的促进作用和体外造血活性测定

目的 通过观察sOGP在体内的促造血活性和体外促进造血祖细胞增殖的作用 ,初步探索sOGP促造血活性的作用环节及机制。方法 正常小鼠连续 14d皮下注射sOGP ,观察外周血象、骨髓有核细胞数及骨髓有核细胞分类计数的变化 ;又应用离体骨髓细胞培养方法观察sOGP对正常小鼠和人骨髓粒系祖细胞集落形成的影响。结果 sOGP能升高正常小鼠骨髓有核细胞数和外周血白细胞数分别为2 0 %和 40 % ,红细胞和血小板也有增加趋势 ,骨髓细胞增生较空白对照组活跃 ,粒系增生较明显。体外CFU G集落培养实验进一步证实了sOGP具有直接刺激小鼠和人骨髓粒系祖细胞增殖的作用 ,1× 10 -14 mol·L-1浓度时已有明显的效果 ,sOGP和阳性对照药rhG CSF在相近浓度时效果相接近。结论 sOGP可能具有促进小鼠骨髓全系细胞增生的作用 ,以促进粒系造血为主 ,其机制可能是直接作用于造血干 /祖细胞或改善造血微环境促进造血 ,提示sOGP在促进放

成骨生长肽促进大鼠骨量增加的作用

探讨成骨生长肽（ＯＧＰ）对骨量增加的作用。方法采用低钙饲料饲养成为骨质疏松模型的５０只ＳＤ大鼠，随机分为５组，每组１０只，分别皮下隔日注射，Ａ组（低剂量ＯＧＰ）、Ｂ组（高剂量ＯＧＰ）、Ｃ组（人降钙素）、Ｄ组（鲑鱼降钙素）和Ｅ组（生理盐水）对照，共１２周。测定血清碱性磷酸酶（ＡＬＰ）、骨钙素（ＢＧＰ）、骨密度（ＢＭＤ），扫描电镜和透射电镜观察。结果ＯＧＰ治疗组碱性磷酸酶、骨钙素和骨密度明显增高（Ｐ＜０．０１），扫描电镜观察到Ａ、Ｂ组骨小梁粗大、完整、间隙小，表面光滑，对照组骨小梁变细、断裂，空隙大。透射电镜观察到Ａ、Ｂ组成骨相骨细胞较多，Ｅ组退变相骨细胞较多。结论ＯＧＰ能刺激成骨细胞的活性，能提高骨量。

大鼠侧脑室及鞘内注射孤啡肽对痛反应及电针镇痛的影响

孤啡肽（orphaninFQ，OFQ）是最近发现的一种门肽，为阿片受体家族中一个新成员—“孤儿受体”（orphareceptor）的内源性配基。OFQ在痛觉调制中的作用与内阿片肽明显不同。本实验在大鼠电刺激甩尾测痛模型上，观察了侧脑室（ICV）及鞘内注射（IT）OFQ对伤害性电刺激引起的痛反应及电针镇痛的影响。结果发现，大鼠ICV及IT0．1μg（0.055nmol）OFQ对痛反应无影响，而1.0μg（0.55nmol）的OFQ可明显降低痛阈；但两种剂量的0FQ阴无论是脑室还是鞘内给药，均可对抗电针镇痛；采用反义核苷酸技术阻断OFQ受体合成，大鼠痛阈升高，此时再给予OFQ，则电针镇痛效应无明显改变。表明OFQ对基础痛阈的影响与剂量有关：小剂量无影响，大剂量使痛阈降低。但无论对基础痛阈有无影响，OFQ均对抗电针镇痛。

合成成骨生长肽对大鼠骨髓基质干细胞的促成骨作用

目的研究合成成骨生长肽(sOGP)对体外培养的大鼠骨髓基质干细胞(BMSCs)的作用,并与经典的成骨诱导剂地塞米松相对比。方法取大鼠股骨骨髓,贴壁法分离骨髓基质干细胞进行体外培养,加入不同浓度的sOGP,观察细胞形态变化,细胞增殖率,细胞内碱性磷酸酶(ALP)的表达,RT-PCR法检测3种主要成骨标志物(ALP、Ⅰ型胶原、骨钙素)的表达,组织化学染色检测碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原的表达及钙质的沉积并进行图像分析。结果sOGP对BMSCs增殖的影响随浓度不同呈现双向作用。sOGP和地塞米松在mRNA和蛋白水平均能促进各成骨标志物的表达,定量分析结果显示,sOGP在10-9mol/L浓度组促成骨的作用最强,明显高于对照组和地塞米松组。结论sOGP能明显促进大鼠BMSCs向成骨方向转化。这种促成骨能力与其浓度密切相关,以10-9mol/L浓度下促成骨能力最强。

成骨生长肽对不同血清浓度下OPG^(-/-)小鼠骨髓基质细胞增殖和分化作用

目的研究合成成骨生长肽(synthetic osteogenic growth peptide,sOGP)对在不同血清浓度条件下OPG-/-小鼠骨髓基质细胞(bone marrow derived stroma cells,BMSCs)的增殖和分化作用。方法取OPG-/-小鼠股骨,分离骨髓基质细胞进行体外培养。在各自培养条件下分为实验组(OGP组)、空白对照组(CON组)和阳性对照组(bone morphogenetic protein-2 group,BMP-2组),倒置相差显微镜下观察细胞形态变化、MTT法测定细胞增殖率、PNPP法测定碱性磷酸酶(alkaline phosphatase,ALP)的表达。结果OGP在含10%胎牛血清(fetal bovine serum,FBS)的LG-DMEM和矿化液的培养条件下,对OPG-/-小鼠BMSCs起到增殖作用,在第3、5天均高于CON组和BMP-2组(P<0.05);OGP组对ALP表达的影响与CON组相似,而与BMP-2组存在较大差异,BMP-2组在所有不同血清浓度条件下的第3、5天ALP活性均高于CON组和OGP组(P<0.05)。结论OGP组对OPG-/-小鼠BMSCs的增殖作用要求较高血清浓度的体外培养条件,但在ALP的分化活性方面弱于BMP-2组。

合成胸腺素α_1的生物活性研究

利用固相多肽合成中的 Boc和 Fmoc途径分别合成了胸腺素α1 (S- Tα1 )。后者的合成产率 (去保护基后粗肽量 /理论量 )为 80 % ,大于前者的 64.2 %。在 Fmoc方法合成中 ,用 Fmoc- Asn(Trt)上羟基树脂 (HMP树脂 )提高了合成产率。经 FPLC纯化后 ,Tα1 用 HPLC、毛细管电泳、等电聚焦电泳鉴定纯度均一 ;质谱和 N端序列分析证明其符合理论值。Tα1 活性测定 ,表明 S- Tα1 能提高淋巴细胞对丝裂原刺激的增殖反应 ,增强 NK细胞杀伤活性 ,具有增加淋巴细胞产生 IFN- γ的作用 ,我们的合成产物与国外对照品 Z- Tα1 呈现相仿的活性。此工作为进一步研究 Tα1

人修饰型降钙素和鼠酰胺化酶基因在昆虫细胞中的偶联表达

人降钙素 (hCT)是 32氨基酸的多肽激素 ,C 端为α脯氨酰胺结构 ,具有调节体内钙、磷代谢等许多重要生理功能。用重组昆虫杆状病毒表达系统 ,偶联表达合成的人修饰型降钙素 (hmCT)基因与GST融合基因和大鼠酰胺化酶 (PAM)基因 ,再用抗hmCT或抗PAM抗体 ,既检测到由昆虫细胞表达的GSThmCT产物也检测到PAM产物。经GSH 琼脂糖凝胶亲和层析 ,分离纯化GSThmCT融合蛋白。

抗丙型肝炎病毒核心抗原单克隆抗体杂交瘤细胞株的建立及初步鉴定

用丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）核心区合成肽作抗原免疫ＢＡＬＢ／ｃ小鼠，取其脾细节与骨髓瘤细胞ＳＰ＾２／０进行融合。经有限稀释法克隆３代后获得一株抗ＨＣＶ核心抗原ＣＰ１０的单克隆抗体（ＭｃＡｂ）杂交瘤细胞株３Ｅ７，并对其分泌抗体进行初步鉴定。杂交瘤细胞培养上清的抗体滴度为１：３２０，诱生同系小鼠腹水的滴度为１：１２８００，该ＭｃＡｂ能与ＣＰ１０特异性结合，杂交瘤细胞染色体数目为１０６条。

人抑制素α亚基片段的合成及抗体的制备

本文报道通过逐个递增固相法化学合成人抑制素α亚基片段 hiα(1-26)TYr·Gly,并经葡聚糖凝胶纯化及高压液相精制。以此α亚基片段与甲状腺球蛋白偶联后免疫家兔产生抗血清,采用 Iodogen 法碘标抗原,建立简便易行的抑制素放射免疫测定法。对方法的可信性进行了考核,并初步试用于测定多种组织及体液的抑制素含量。

成骨生长肽促进实验性再生障碍性贫血小鼠造血的恢复

目的 研究人工合成成骨生长肽(sOGP)对实验性再生障碍性贫血(EAA)小鼠造血功能恢复的促进作 用。方法BALB／C小鼠辐射5Gy后,尾静脉输注DBA／2小鼠混合淋巴细胞1×105个／鼠,建立EAA动物模 型。造模次日始腹腔注射sOGP共12d,每天分别为0.05、0.5、5.0 nmol／鼠,共3个剂量组,第14天杀鼠检测体 重、脾重、血常规、骨髓有核细胞数(BMNCs)、骨髓涂片及胸骨切片等,并作粒细胞-巨噬细胞集落形成单位(CFU -GM)培养。结果 骨髓涂片与胸骨切片中均可见随着sOGP治疗剂量的增高,骨髓增生逐渐有所恢复;各组 CFU-GM增殖能力则表现出显著差别,治疗效果与剂量有明显的正相关线性关系。结论 sOGP可有效促进 EAA小鼠造血功能的恢复,其作用环节可能位于干细胞或其上游水平,提示sOGP在促进造血恢复方面的潜在 前景。

C肽对12周STZ大鼠糖尿病肾病的干预作用

目的 应用STZ大鼠模型探讨单独应用C肽对糖尿病肾病的干预作用。方法 大鼠分 4组 :(1)血糖控制接近正常的糖尿病胰岛素强化组 (DM I组 ) ;(2 )维持高血糖状态的糖尿病C肽 (130nmol/kg每天两次皮下注射 )组 (DM C组 ) ;(3)血糖水平与DM C组一致的糖尿病组 (DM组 ) ;(4)同龄正常大鼠为对照组 (N组 )。12周后测定肾重 /体重比值、肾小球体积、细胞外基质 /肾小球截面积比值、肾小球基底膜厚度和尿白蛋白排泄率。结果 DM C组的肾小球体积与细胞外基质 /肾小球截面积比值达到DM I组和N组水平 ,约为DM组相应参数的 5 1%与 74 % (P <0 .0 0 1)。DM C组的肾重 /体重比值与尿白蛋白排泄率接近DM组 (P >0 .0 5 ) ,高于DM I组 (分别为P =0 .0 3与P =0 .0 5 )。各组肾小球基底膜厚度无统计学差异。结论 单独应用C肽 12周可以预防STZ大鼠肾小球细胞外基质积聚导致的系膜扩张和肾小球肥大 ,且不依赖糖代谢紊乱的纠正 ,但对整个肾脏肥大和尿白蛋白漏出没有预防作用。

成骨生长肽对红系造血祖细胞的体外促增殖作用

目的 :通过研究人工合成成骨生长肽 (sOGP)对红系造血祖细胞的体外促增殖作用 ,初步探索sOGP促造血活性的作用环节。方法 :将正常小鼠和人骨髓有核细胞在标准红系祖细胞基础培养基中进行培养 ,设定sOGP的不同浓度梯度 ,于培养 4 8h后计数小鼠CFU -E集落数 ,培养第 4天与第 14天计数人CFU -E、BFU -E集落数 ,将数据与空白对照组及EPO阳性对照组进行比较。结果 :sOGP能够有效促进小鼠CFU -E及人CFU -E、BFU -E的体外增殖 ,量效关系明显 ,其有效作用浓度范围为 10 -16～ 10 -10 mol/L ,高峰浓度约为 10 -14 ～ 10 -12 mol/L ,呈低浓度、广范围及双相作用的特点。但是 ,sOGP对红系造血祖细胞的体外促增殖效果要弱于阳性对照药EPO。结论 :sOGP能够在体外有效地促进红系造血祖细胞的增殖 ,可能是通过对骨髓基质细胞的作用而促进造血和造骨。

OGP对NIH3T3细胞作用机理的研究

目的:研究成骨生长肽(OGP)对NIH3T3细胞的作用机理。方法:细胞计数法测定不同浓度的OGP14肽及5肽对NIH3T3细胞的促增殖作用,以流式细胞仪测定细胞膜上OGP的表达。观察OGP抗体对OGP促增殖作用的影响。结果:OGP14肽及5肽在10-11mol/L时对NIH3T3细胞有促增殖作用,同时细胞膜上OGP表达增加;OGP抗体可抑制OGP的促增殖作用,同时使细胞膜上OGF,表达下降。结论:0GP14肽及5肽可以通过对OGP的正反馈来调节NIH3T3细胞的增殖。

人抑胃肽溶液构象的荧光光谱学研究

运用荧光光谱方法研究了用固相合成法得到的人抑胃肽 (GIP- 4 2 )及其类似物的内源荧光特性、I-动态荧光淬灭以及与 bis- ANS结合的荧光。结果表明 :GIP- 4 2在溶液中具有一定的构象 ,其 Trp残基荧光被 I-淬灭的结果表现为双相 ,淬灭常数分别为 11.5L/ mol和 1.2 L/ mol;GIP-4 2肽中有一疏水区能与探针 bis- ANS结合 ;在 N-端 17个残基除去后所得到的 2 5肽 (GIP- 2 5)分子中 ,Trp残基更多地暴露在水溶液中 ,更易被 I-淬灭。同时其分子中 bis- ANS结合区的疏水性很弱 ,提示 N-端 17肽对于维持人 GIP- 4 2具有活力必需的构象十分重要。此外 ,人 GIP- 4 2中的 His残基被修饰后并不改变肽中色氨酸残基的微环境的极性 ,但降低

戊肝病毒活性肽的选择、合成与应用

对戊型肝炎病毒（ＨＥＶ）编码蛋白序列进行了亲水性分析及二级结构预测，选择亲水性强、具有β－转角与β－折叠的区段，采用多肽固相合成法合成了ＨＥＶ基因组３个开读框架（ＯＲＦ１，ＯＲＦ２和ＯＲＦ３）中可能的抗原表位，以免疫学方法进行鉴定并选出了分别来自ＨＥＶ３个ＯＲＦ的、具有重要生物活性与应用前景的３段肽（ＥＨ１７４、ＥＨ２６５、ＥＨ３６２）。在此基础上，进行了抗ＨＥＶＥＬＩＳＡ新型检测试剂盒的实验室研究及临床试用。结果表明，所研究的戊肝抗体检测试剂盒特异性高、临床符合性好、具有可重复性，在戊肝辅助诊断及流行病学调查中具有重要意义。

人工合成成骨生长肽对辐射损伤小鼠造血功能的保护作用

目的 探讨人工合成成骨生长肽 (sOGP)对辐射损伤小鼠造血功能的保护作用 ,阐明其剂量 效应关系。方法 以 4 .0和 7.5Gy13 7Csγ射线照射小鼠为模型 ,采用皮下注射和肌肉注射 2种给药途径连续 8d给予sOGP ,剂量范围为 0 .0 39～ 6 4 0nmol/(kg·d) ,观察外周血象、骨髓有核细胞数、骨髓粒系造血祖细胞集落形成(CFU G)、骨髓细胞分类和骨髓切片组织学等的变化。结果 sOGP能加快受照小鼠外周血白细胞、骨髓有核细胞数的恢复 ,在一定的剂量范围内呈明显的剂量依赖性 ,并能刺激髓外造血 ;促进 (CFU G)形成作用显著高于重组人粒系集落刺激因子 (rhG CSF)约 2倍 ;骨髓病理学观察显示sOGP能加快受照小鼠骨髓造血组织损伤的恢复 ,刺激骨髓粒系增生。结论 sOGP可明显促进受照射小鼠造血功能的恢复 ,其机制可能是通过作用于早期造血阶段或 (及 )改善微环境进而促进造血。

戊型肝炎病毒合成肽决定簇检测抗HEV的研究

利用３段分别代表ＨＥＶ３个基因区的合成多肽，研制成ＥＬＩＳＡ抗ＨＥＶ检测试剂。此试剂对ＩｇＧ及ＩｇＭ检出阳性率在急性ＮＡＮＢＮＣ肝炎患者中分别为５４．１％（５３／９８）和３３．７％（３３／９８），在其他疾病患者及正常献血员中则分别为２．７％～６．３％和０％～２．６％。与Ｇｅｎｅｌａｂｓ重组抗原生产的检测试剂比较，两者有很好的一致性，其阳性符合率为９０．０％，阴性符合率为９８．５％，总符合率为９７．４％。对于急性戊型肝炎患者动态监测，７～２０ｄ内大部分患者能检出抗ＨＥＶＩｇＧ或ＩｇＭ。这些结果表明，利用ＨＥＶ合成肽能特异地检测戊肝病毒感染者的抗ＨＥＶＩｇＧ及ＩｇＭ，有助于临床诊断及流行病学调查。

人工合成丁型肝炎病毒抗原片段及其诊断应用

本文选择、设计并合成了含天然HDAg上的部分片段的27肽,用于建立检测抗HD的ELISA方法。试验结果表明,包被的合成肽抗原与已知抗HD阳性冻存血清呈抗HD阳性反应;它能与天然HDAg竞争抗HD,具天然HDAg上相应片段的抗原活性;该合成肽抗原专一性强,与正常人血清,正常小鼠血清,单纯甲型、乙型、丙型肝炎抗体阳性血清无免疫交叉反应。用建立的ELISA法,检测1992年1～5月的部分献血员及住本科各型肝炎患者血清标本的抗HD。300例献血员中1例抗HD阳性(0.33％),其ALT增高2倍以上。非乙型肝炎41例,甲型肝炎52例,抗HD均阴性。各型乙型肝炎211例,抗HD阳性21例(9.95％)。其中,携带者2/82例(2.5％);急黄肝6/43例(13.95％);慢活肝6/60例(10.00％);重肝4/18例(22.20％);肝炎肝硬化3/8例(37.50％),结果与本科已往报告基本一致。

[B10,22-Asp,B25-Tyr-NH2]-去β链C端五肽胰岛素的合成和性质

本文报道了[B10,22-Asp,B25-Tyr-NH2]-去B链羧端五肽胰岛素的制备及其生物活性。结果表明,这一类似物的生物活力比去五肽胰岛素(DPI)的活力高一倍,但却比Gerald所报道的[B10-Asp,B25-Tyr-NH_2]-DPI的活力低很多,说明后者的高活性可能依赖于分子中B22-Arg的存在。