5-HMF高效液相色谱检测方法的建立及功能糖与不同产地党参、何首乌和熟地中5-HMF含量分析

本试验旨在建立5-羟甲基糠醛(5-hydroxymethylfurfural,5-HMF)的高效液相色谱检测方法,检测不同产地党参、制首乌、熟地黄以及5个不同批次功能糖中5-HMF含量。采用C_(18)(4.6 mm×250.0 mm,5μm)色谱柱分离,流动相为甲醇-水(8∶92),流速为1.0 mL/min,柱温为30℃,进样量为10μL,紫外检测器,检测波长为280 nm。经方法学考察,显示该方法线性关系良好;精密度试验测定峰面积RSD平均值为1.438%;重复性试验显示HPLC重复性良好;稳定性试验峰面积RSD范围为1.338%~7.307%;加标回收率显示良好。中药及功能糖5-HMF含量检测结果显示,党参、制首乌和熟地黄相比,熟地黄中5-HMF含量较高,党参中5-HMF含量较低,其中又以河北产熟地黄中5-HMF含量最高。不同批次功能糖中5-HMF含量无显著性差异,但其含量是河北产熟地黄的90~100倍。通过现代化技术,用功能糖成功复制了中药中的活性成分5-HMF,降低了其生产成本,具有良好的发展前景。

不同粒径石膏煎液对大鼠的退热作用研究

本试验旨在探究不同粒径石膏水煎液对发热大鼠的退热效果。选取体质量约200 g的SPF雄性SD大鼠63只,适养结束后,除空白对照组(C组)外,其余大鼠均按照10 mL/kg体质量注射20%酵母悬液,注射后2 h测定肛温,将造模成功大鼠54只随机分为9组,即模型组(M组)、普通石膏煎液混悬液组(PH组)、普通石膏煎液上清液组(PQ组)、微米级石膏煎液混悬液组(WH组)、微米级石膏煎液上清液组(WQ组)、纳米级石膏煎液高剂量组(NG组)、纳米级石膏煎液中剂量组(NZ组)、纳米级石膏煎液低剂量组(ND组)、布洛芬口服混悬液阳性对照组(YD组)。给予相应药物后连续6 h观测肛温。采用ELISA方法检测大鼠血清中发热相关激素与细胞因子水平以及大鼠下丘脑中发热相关激素水平。结果显示,给药后1 h,YD组大鼠体温显著低于M组(P<0.05),给药后1~6 h YD组显示出良好退热作用,给药后5~6 h,退热效果减弱;PQ组和WQ组无明显退热作用;PH组、WH组、NG组、NZ组和ND组发热大鼠有不同程度退热,其退热作用发挥于给药后5 h;给药后6 h,NG组退热作用优于布洛芬混悬液;相较于C组,M组和各治疗组大鼠内生性致热原水平显著提高(P<0.05),发热中枢调节介质水平出现显著性变化(P<0.05);相较于M组,各治疗组大鼠发热均有不同程度的改善。结果提示,各粒径石膏煎液对大鼠发热均有不同程度的改善作用,其中以PH组和NG组效果最佳,其机制为降低发热的内生性致热原水平和调节中枢调节介质水平,从而降低体温。

中药复合小肽对肉鸡免疫功能的影响

旨在探索中药复合小肽(CMCSP)对于肉鸡免疫功能的影响。选取1日龄爱拔益佳(AA)肉鸡450只,随机分为6,组C组(饲喂基础日粮)、D组(每1 t饲料添加250 g CMCSP)、Z组(每1 t饲料添加500 g CMCSP)、G组(每1 t饲料添加750 g CMCSP)、S组(每1 t饲料添加100 g微生态制剂)、M组(每1 t饲料添加100 g酶制剂),每组肉鸡分为5笼饲养,每笼15只。于1、7、14、21、28、35、42日龄检测血清中禽流感病毒、新城疫病毒抗体水平。于21、42日龄测定肉鸡的器官指数、血清中免疫球蛋白和细胞因子含量。结果显示,D组法氏囊指数、7、28日龄禽流感病毒抗体滴度、7、28、35日龄新城疫病毒抗体滴度、21日龄IgA、IFN-γ、IL-2含量显著升高(P<0.05或P<0.01);每1 t饲料添加500 g CMCSP能显著提高雏鸡法氏囊指数、28日龄禽流感病毒抗体滴度、42日龄新城疫病毒抗体滴度、21日龄IgA、IgM、IFN-γ、IL-2和42日龄IL-2含量(P<0.05或P<0.01);每1 t饲料添加750 g CMCSP能显著提高雏鸡法氏囊指数、7、21、28日龄禽流感病毒抗体滴度、14、21、28日龄新城疫病毒抗体滴度、21日龄IgA、IFN-γ和IL-2含量(P<0.05或P<0.01)。研究结果表明中药复合小肽能够增强肉鸡的体液免疫和细胞免疫功能,其中高剂量中药复合小肽上调肉鸡免疫器官指数和抗体水平的效果最好,中剂量中药复合小肽对免疫球蛋白的上调作用最佳,复合小肽低、中剂量组对于IL-2和IFN-γ的提升效果好。

中西药配伍对母猪奶质及哺乳仔猪生产性能影响的试验研究

为验证中西结合药物是否能更好地提升母猪奶质及哺乳仔猪生产性能,选择80头品种相同、胎次、体重、体况、妊娠日龄相近的种母猪,随机分为4组,分别为中药颗粒+包被替米考星组(简称中替组)、中药颗粒组、包被替米考星组、空白对照组。中替组在基础日粮中于妊娠的31-40 d,61-70 d,91-100 d加入中药颗粒和包被替米考星每天各2.5 g,中药颗粒组、包被替米考星组分别于妊娠的31-40 d,61-70 d,91-100 d在基础日粮中加入中药颗粒、包被替米考星,每天2.5 g,空白对照组不喂药,饲养管理一致,全程跟踪每组母猪的奶质情况以及仔猪的生产性能情况。试验证明,中西药配伍能显著提高母猪的奶质及哺乳仔猪的生产性能。

丹参多糖抑制氟苯尼考致肉鸡肝脏损伤的分子机制研究

本试验旨在探究丹参多糖缓解氟苯尼考致肉鸡肝脏损伤的转录组学靶点与通路。将30只1日龄肉鸡随机平均分成3组:空白对照组(LA组)饲喂自来水、氟苯尼考造模组(LB组)给予含0.15 g/L氟苯尼考的自来水、丹参多糖治疗组(LC组)给予含0.15 g/L氟苯尼考和5 g/L丹参多糖的自来水。从1日龄开始,连续给药5 d。于第6天各组分别随机取3只鸡,处死,无菌摘取其肝脏组织。肝脏组织经过RNA抽提、纯化和建库后,采用IlluminaHiSeq测序平台,对这些文库进行双末端测序。然后对原始下机数据进行过滤,将过滤后得到的高质量序列比对到该物种的参考基因组上。根据比对结果,计算每个基因的表达量。分别构建3组肉鸡肝脏的数字化基因表达谱(DGE)文库,比较DGE文库的差异表达基因,寻找基因表达差异最显著的关键基因,并进行GO功能注释、KEGG通路分析。结果显示:LA vs LB、LA vs LC及LB vs LC比较组分别筛选出1989(上调基因495个,下调基因1494个)、1278(上调基因344个,下调基因934个)、380个(上调基因165个,下调基因215个)表达差异显著的基因。LA vs LB、LA vs LC及LB vs LC比较组差异表达基因的GO功能注释主要归类为生物过程和细胞组成两个分支。KEGG通路分析结果表明,LA vs LB的差异表达的基因主要富集到药物代谢-细胞色素P450,细胞外基质(ECM)受体相互作用、细胞因子与细胞因子受体的相互作用、细胞色素P450对异生物的代谢,谷胱甘肽代谢,过氧化物酶体增殖物激活受体(PPAR)信号通路,甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢,丙氨酸、天冬氨酸和谷氨酸代谢等通路。LB vs LC差异表达的基因主要富集到药物代谢-细胞色素P450和甘氨酸、丝氨酸和苏氨酸代谢及PPAR信号通路等。丹参多糖可通过调节与细胞色素P450代谢通路有关的细胞色素P4503A4酶(CYP3A4)、细胞色素P4502C23b酶(CYP2C23b)、谷胱甘肽S-转移酶(GSTA3)、类谷胱甘肽S-转移酶α2(GSTAL2)等mRNA的表达以及与PPAR信号通路有关的脂肪酸结合蛋白1(FABP1)和长链脂肪酸辅酶A连接酶(ACSBG2)等mRNA的表达,从而抑制氟苯尼考产生的有害代谢产物,促进肝脏脂质的正常代谢,进而缓解氟苯尼考引起的肝脏损伤。

妊娠期环境雌激素双酚A暴露对子代成年雌鼠的生殖损伤作用

为探究母鼠妊娠期暴露双酚A(BPA)对子代成年雌性小鼠生殖损伤作用及DNA甲基转移酶(DNMT)基因表达量的影响,将120只妊娠母鼠随机分为6组,每组20只。各组分别在母鼠孕0.5~17.5 d内按0、2.5、5、10、20、40 mg·(kg·d)^-1剂量灌胃BPA。每组随机选取10只子代成年(56 d)雌鼠,麻醉后处死,收集血液、子宫和卵巢;统计子鼠成年时子宫和卵巢指数;HE染色观察子代雌鼠卵巢的组织形态学变化;放射性免疫法检测子代雌鼠血清中卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)、雌二醇(E2)和孕酮(P4)水平;酶联免疫吸附法(ELISA)检测子代雌鼠卵巢内雌激素受体α(ERα)、雌激素受体β(ERβ)的含量;实时荧光定量PCR法检测子代雌鼠卵巢内ERα、孕酮受体(PgR)、DNMT1、DNMT3A和DNMT3B mRNA转录水平。结果显示,BPA显著降低子代雌鼠血清FSH、LH、E2和P4水平,显著提高子代雌鼠卵巢ERα和ERβ含量,显著降低子代雌鼠卵巢ERα、PgR和DNMT mRNA的转录水平(P<0.05或P<0.01)。BPA暴露子代小鼠成年时卵巢和子宫指数增大,HE染色观察卵巢实质发生萎缩,初级和次级卵泡数量增加。本研究表明,妊娠期暴露BPA可促进成年子鼠卵巢产生卵泡,显著降低生殖激素的含量及活性,显著增加卵巢激素受体的含量,抑制卵巢激素受体和DNMT的转录,对子代产生生殖损伤。

中药复合小肽对于肉鸡小肠形态、盲肠肠道菌群和生产性能的影响

本试验研究了饲粮中分别添加0(MC),250(MD),500(MZ),750g/t(MG)中药复合小肽(compound small peptide of chinese medicine,CSPCM)对爱拔益佳肉鸡小肠形态和盲肠菌群的影响,并与现有饲料添加剂酶制剂(MM)和微生态制剂(MS)的效果进行对比。结果显示,在饲粮中添加500,750g/t中药复合小肽能够增加十二指肠和空肠绒毛长度和绒毛长度与隐窝深度比值(P<0.05)。在饲粮中添加750g/t中药复合小肽能提高可操作分类单元数(operational taxonomic units,OTUs)(P<0.05)。MD组的盲肠粪杆菌属(Faecalibacterium)含量显著低于MC组(P<0.05);MD、MZ、MG、MS和MM组的盲肠乳酸杆菌属(Lactobacillus)含量高于MC组(P>0.05)。在MG组中具有丰度差异的微生物类群是β-变形菌门(Betaproteobacteria)、黄杆菌纲(Flavobacteriia)、伯克霍尔德菌目(Burkholderiales)、黄杆菌目(Flavobacteriales)和黄杆菌科(Flavobacteriaceae)。在MM组中具有丰度差异的微生物类群是艰难杆菌科(Mogibacteriaceae)。21日龄各组体质量无显著性差异;42日龄MD组的体质量显著高于MC和MS组(P<0.05),MZ和MG组的体质量显著高于MC、MM和MS组(P<0.05)。结果表明,在饲料中添加中、高剂量的CSPCM可提高十二指肠和空肠的绒毛长度、绒毛长度与隐窝深度比值和盲肠内有益菌含量。低剂量的CSPCM可增加盲肠内拟杆菌门菌群丰度。在饲料中添加CSPCM能够改善盲肠菌群。在饲料中添加750g/t CSPCM对促进肉鸡小肠发育从而达到提高生产性能的效果是最好的,并且效果优于微生态制剂和酶制剂。

中药复合小肽对肉鸡抗氧化功能、消化酶活力、肉品质及表观代谢率的影响

本试验旨在研究饲粮中添加中药复合小肽(compound small peptide of Chinese medicine,CSPCM)对肉鸡抗氧化功能、消化酶活力、肉品质和表观代谢率的影响。试验选用400只1日龄雄性爱拔益加肉仔鸡,随机分为4组,空白对照组(基础饲粮)、CSPCM组(饲料中添加250,500,750 g/t CSPCM),每组100只。饲养在三层笼网中(110 cm×60 cm×50 cm,每笼5只),在整个42 d试验中可自由取食和饮水。分别于21和42 d测定肝脏氧化指标。在42 d测定消化酶活力、肉品质和表观代谢率。结果显示,饲料中添加CSPCM可改善肝脏抗氧化酶活力,消除体内的脂质过氧化产物。饲料中添加500 g/t CSPCM改善机体抗氧化能力和胃蛋白酶活力效果最好,但也加速鸡胸肉变酸的速度。鸡胸肉的系水力与CSPCM在饲料中添加量成反比。饲粮中添加500 g/t CSPCM提高了粗蛋白、粗脂肪、钙和磷的表观代谢率,从而增加了肉鸡营养物质的沉积。结果表明,饲粮中添加CSPCM可提高肉鸡的表观代谢率、消化酶活力和抗氧化能力。而CSPCM的添加会降低鸡胸肉的系水力。CSPCM可以作为肉鸡饲料添加剂来提高肉鸡体内营养物质消化沉积和抗氧化能力,添加量以500 g/t最佳。

菟丝子水提物对子宫内双酚A暴露小鼠的生殖保护作用

为探究菟丝子水提物对子宫内双酚A(bisphenol A,BPA)暴露小鼠断乳时期的生殖保护作用,将50只妊娠母鼠随机分为5组,每组10只,在孕期制造小鼠子宫内BPA暴露模型,并给予不同剂量的菟丝子治疗,直到孕鼠生产,记录母鼠孕期(d)和孕期增重(g);子代小鼠出生后,记录仔鼠总数(只)、出生窝重(g)、出生均重(g)及死胎数(只);小鼠21日龄(断乳)时,称重后眼球采血,脱颈处死,统计仔鼠雌雄比、卵巢系数;ELISA检测雌仔鼠血清中雌二醇(E2)、孕酮(P4)、BPA含量及卵巢雌激素受体α(ERα)水平;实时定量荧光PCR法(RT-qPCR)对卵巢DNA甲基转移酶3a(Dnmt3a)、DNA甲基转移酶3b(Dnmt3b)、ERα和孕酮受体(PR)mRNA相对转录水平进行检测。结果显示,BPA饮水可显著提高子代小鼠的死胎率及血清中BPA水平(P<0.05),显著降低子代雌鼠血清E2含量及Dnmt3a mRNA水平(P<0.05)。0.7g/kg的菟丝子水提液可提高雌鼠Dnmt3amRNA转录水平(P<0.05),1.4g/kg的菟丝子水提液可降低死胎率、BPA水平以及提高E2、P4含量(P<0.01或P<0.05),2.8g/kg的水提液极显著升高子代雌鼠ERα水平(P<0.01)。结果表明,1.4g/kg菟丝子水提液对子宫内BPA暴露小鼠的生殖保护作用较好。

妊娠期母鼠暴露BPA对子代断乳雌鼠生殖激素水平与受体含量以及卵巢DNA甲基化的影响

为探究母鼠妊娠期暴露双酚A(bisphenol A,BPA)对子代雌鼠生殖激素的影响及BPA与机体发生作用的分子机制。通过灌服不同剂量的BPA制造孕鼠BPA暴露模型,然后计算子代小鼠断乳时的死亡率、卵巢与子宫系数;放射免疫法检测血清中雌二醇(E2)、孕酮(P4)、卵泡刺激素(FSH)、黄体生成素(LH)水平;酶联免疫吸附试验(ELISA)检测血清雌激素受体α(ERα)、雌激素受体β(ERβ)含量;qPCR法检测卵巢DNA甲基转移酶1(Dnmt1),DNA甲基转移酶3A(Dnmt3A),DNA甲基转移酶3B(Dnmt3B),孕酮受体(PgR)及雌激素受体α(EsR1)mRNA表达。结果显示,子代雌鼠的相关指标与母鼠妊娠期BPA暴露存在非单调性剂量-反应关系;卵巢系数、E2含量与BPA剂量呈现“U”型关系;子宫系数,血清P4、FSH、LH水平,卵巢ERβ含量,卵巢Dnmt1、Dnmt3A、Dnmt3BmRNA相对转录水平与BPA剂量呈现“波浪式”关系;卵巢PgR、EsR1mRNA相对转录水平与BPA剂量呈现“倒U”型关系;且BPA暴露组与空白组相比有极显著差异(P<0.01)。这表明BPA可能通过增强子代雌鼠DNA甲基化酶的转录活性使生殖激素分泌紊乱,造成子代生殖损伤。

氟苯尼考诱导氧化应激和细胞凋亡引起的肉鸡肾损伤

为了探究氟苯尼考对肉鸡肾的损伤作用及其可能机制,将180只肉鸡随机分为空白对照组和不同剂量的氟苯尼考组(0.15,0.3,0.6,1.2和1.8 g/L)。从1日龄开始,连续饮水给药5 d。于试验第42天,翅下静脉收集血液并尽快摘取完整的鸡肾。记录和分析各组肉鸡的平均增重和肾指数;用HE染色法观测肉鸡肾组织病理学变化;检测肉鸡血清中肾功能指标尿酸(UA)、尿素氮(BUN)和肌酐(CRE)的含量以及肾组织中过氧化指标丙二醛(MDA)、还原型谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD)和过氧化氢酶(CAT)的水平;采用Western-blot法检测肾组织中p53,Caspase-3和Caspase-6的蛋白表达水平。结果显示,与空白对照组相比,较高剂量的氟苯尼考均能显著降低肉鸡的平均增重(P<0.01)和升高肾指数(P<0.05或P<0.01)。各剂量氟苯尼考组中的肾组织细胞均显示出明显的损伤、变形、细胞萎缩和细胞间隙增大的现象。此外,所有剂量氟苯尼考均显著提高了试验肉鸡血清中BUN含量(P<0.05或P<0.01),1.8 g/L氟苯尼考显著提高了UA和CRE含量(P<0.05或P<0.01),1.2 g/L氟苯尼考组UA含量也显著升高(P<0.05)。所有剂量的氟苯尼考均能显著提高试验肉鸡肾组织中MDA含量(P<0.01)却显著降低了CAT的水平(P<0.05或P<0.01);除0.15 g/L氟苯尼考组外(P>0.05),其余剂量的氟苯尼考组GSH和SOD水平均显著降低(P<0.01)。除0.3 g/L氟苯尼考组外(P>0.05),其余剂量氟苯尼考组试验肉鸡肾组织中Caspase-3蛋白表达水平显著升高(P<0.01)。结果提示,1日龄给予氟苯尼考对肉鸡具有显著的肾毒性,这种毒害作用会持续到肉鸡出栏,并且具有剂量依赖性。这种损伤可能与氟苯尼考促进肉鸡肾内氧化应激反应,上调促凋亡因子的表达有关。