何首乌中大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷的分离纯化与体外抗癌活性研究

目的：分离提取何首乌R50组分中的抗癌活性成分并进一步研究其抗癌作用机制。方法：利用Sephadex LH-20、TLC色谱法、反向硅胶色谱分离系统对何首乌R50组分进行分离纯化，获得大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷，利用TLC和高效液相色谱法（HPLC）鉴定其纯度；MTT法检测大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷对人肝癌细胞HepG2、永生化人肝实质细胞L02、人结直肠癌细胞HT29和HCT116、人神经母细胞瘤细胞SH-SY5Y和人肺癌细胞A549的细胞毒作用；Giemsa染色观察药物作用后HepG2细胞和L02细胞的形态变化；流式细胞术检测大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷对HepG2细胞和L02细胞周期和凋亡的影响。结果：从何首乌R50组分获得大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷，纯度为96%；大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷对HepG2、HT29和SH-SY5Y细胞均有较显著的细胞毒活性（P〈0.05），且对HepG2、HT29细胞的作用表现出剂量效应（r=0.987，=0.002；=0.992，=0.008），而对L02、HCT116、A549细胞无明显的细胞毒作用；200μg/mL大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷作用HepG2细胞72 h，细胞生长受到抑制，并出现细胞核碎裂等凋亡细胞特征，L02细胞形态正常；大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷可诱导HepG2细胞发生G2-M期阻滞及凋亡。结论：大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷是何首乌R50组分中具抗癌活性的成分之一，其对永生化人肝实质细胞低毒，对人肝癌细胞有显著抑制作用，其作用机制与阻滞癌细胞周期和诱导细胞凋亡有关。

去甲斑蝥素作用早期对人肝癌细胞活性氧及NF-E2相关因子2/抗氧化反应元件信号通路的激活

目的探究去甲斑螯素(NCTD)诱导人肝癌Hep G2细胞凋亡及G2/M期阻滞的早期事件,分析NCTD作用早期Hep G2细胞内活性氧自由基(ROS)的变化规律及NCTD对NF-E2相关因子/抗氧化反应元件(Nrf2/ARE)信号通路的影响。方法 NCTD30,60和120μmol·L^(-1)分别作用于体外培养的人肝癌Hep G2细胞3,6,12,24,48和72 h,MTT法检测NCTD对细胞存活的影响;流式细胞术检测NCTD60μmol·L^(-1)作用细胞12,24和48 h对细胞周期和细胞凋亡的影响;DCFH-DA探针结合流式细胞术检测NCTD 30,60和120μmol·L^(-1)作用于3,6和12 h对Hep G2细胞内ROS的影响;荧光素酶法测定NCTD同时转染ARE和荧光素酶报告基因的Hep G2C8细胞的荧光强度;实时荧光定量PCR检测对血红素氧合酶-1(HO-1)和醌氧化还原酶-1(NQO1)m RNA表达的影响。结果 NCTD 30,60和120μmol·L^(-1)作用3和6 h对Hep G2细胞存活无明显影响,而作用24,48和72 h对Hep G2细胞有明显生长抑制作用(P<0.01);NCTD 60μmol·L^(-1)作用12 h后可诱导Hep G2细胞发生凋亡及G2/M期阻滞,12,24和48 h凋亡细胞比例分别由12 h细胞对照组(4.00±1.98)%增加到(12.10±1.70)%,24 h对照组(4.05±0.21)%增加到(31.80±6.50)%,48 h对照组(3.90±0.85)%增加到(33.30±1.41)%;12,24和48 h G2/M期细胞比例分别由12 h对照组的(16.51±1.58)%增加到(40.89±0.18)%,24 h对照组的(16.99±1.32)%增加到(55.29±3.99)%,48 h对照组的(14.45±0.59)%增加到(50.66±5.88)%,相应各时相NCTD处理组G1期细胞比例明显下降(P<0.01);NCTD 30,60和120μmol·L^(-1)作用Hep G2细胞3,6和12 h,ROS无明显变化,作用Hep G2C8细胞6和12 h可明显激活Nrf2/ARE信号通路,下游基因HO-1和NQO1 m RNA表达显著上调(P<0.05)。结论NCTD作用Hep G2细胞早期可明显激活Nrf2/ARE信号通路;ROS激活可能不是NCTD诱导人肝癌Hep G2细胞凋亡及G2/M期阻滞的主要原因。

去甲斑蝥素对人肺腺癌A549细胞的抑制作用

目的：研究去甲斑蝥素（NCTD）对人肺腺癌A549细胞的细胞毒作用,并初步探讨其作用机制。方法：采用四甲基噻唑蓝（MTT）试验检测0~240μmol/L NCTD在0~72 h内对A549细胞活力的影响;NCTD处理A549细胞24 h后换正常培养基,用MTT方法检测细胞恢复与增殖的情况;采用倒置显微镜观察A549细胞经40、50和60μmol/L NCTD处理0~72 h后细胞形态学的改变;通过流式细胞术检测40~60μmol/L NCTD对细胞周期和凋亡的影响。结果：30~240μmol/L NCTD对A549细胞有明显的生长抑制作用（P〈0.05）;在30~120μmol/L浓度范围内,NCTD对A549细胞的生长抑制作用在NCTD撤除24 h后逐渐消失,30~60μmol/L NCTD作用A549细胞24 h后,A549细胞的活力在恢复培养的第5天完全恢复;40、50和60μmol/L NCTD作用A549细胞0~72 h,细胞表现为明显的G2~M期阻滞,与对照组相比,NCTD诱导A549细胞凋亡作用不明显（P〉0.05）。结论：40~60μmol/L NCTD主要通过诱导A549细胞G2~M期阻滞而抑制细胞生长。

去甲斑蝥素抑制大鼠心肌细胞缺血再灌注损伤的研究

目的：探讨去甲斑蝥素（NCTD）抗大鼠心肌缺血再灌注损伤（IRI）的作用及其机制。方法：以大鼠乳鼠原代心肌细胞和大鼠心肌细胞系H9c2为研究对象，采用MTT法检测不同浓度（0.01、0.05、0.1、0.5、1和5μg/mL）NCTD预处理对IRI的心肌细胞活力的影响；流式细胞术检测NCTD预处理对IRI的心肌细胞凋亡的影响；Giemsa染色及台盼蓝染色观察NCTD预处理对IRI的心肌细胞形态的影响；Western blot检测NCTD预处理对IRI心肌细胞中程序性细胞死亡因子4（Pdcd4）表达情况；RT-qPCR检测NCTD预处理对IRI心肌细胞microRNA-21（miR-21）的表达情况。结果：NCTD对原代心肌细胞和H9c2心肌细胞IRI具有抑制作用（P〈0.01）；通过NCTD预处理可以抑制IRI造成的细胞死亡并抑制IRI导致的Pdcd4蛋白表达上调及miR-21下调。结论：NCTD在0.1-0.5μg/mL浓度下可以抑制心肌细胞IRI，miR-21-Pdcd4信号通路参与心肌细胞IRI及NCTD抑制IRI的作用。

制何首乌提取物及主要单体成分对细胞酪氨酸酶及抗氧化保护作用研究

为了探究制何首乌发挥乌发功效的机制,我们利用多巴速率氧化法、多巴染色法评价制何首乌水提物(PWE)、粗多糖及二苯乙烯苷、大黄素对B16F10中酪氨酸酶活性的影响,并利用实时荧光定量PCR法检测其对细胞酪氨酸酶mRNA表达量的影响。结果显示,受试药物对B16F10内酪氨酸酶活性无明显激活作用,但500μg/m L的PWE可显著激活酪氨酸酶mRNA表达;另一方面,利用DPPH自由基清除法测定PWE及大黄素、二苯乙烯苷的体外抗氧化能力,并利用Hep G2C8细胞模型考察其在细胞水平上的抗氧化能力,结果发现,PWE及二苯乙烯苷体外可浓度依赖地清除DPPH自由基,且能激活模型细胞Hep G2C8中ARE的表达,表明二者具有显著的抗氧化活性,或为制何首乌乌发作用要因。

制何首乌提取物及主要单体成分体外对酪氨酸酶活性的影响

采用蘑菇酪氨酸酶多巴速率氧化法,体外评价制何首乌水提取物、乙醇提取物各分离组分及大黄素,大黄素甲醚,大黄素-8-O-β-D-葡萄糖苷,2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷等制何首乌主要单体成分对体外酪氨酸酶活性的影响。结果未在制何首乌中发现能够体外有效激活酪氨酸酶活性的成分,制何首乌水提物,制何首乌乙醇提取物的50%乙醇洗脱物及95%乙醇洗脱物,2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷皆有浓度依赖的酪氨酸酶抑制活性,其中2,3,5,4'-四羟基二苯乙烯-2-O-β-D-葡萄糖苷在48μg/mL的浓度下即可达到46.72%的抑制率,具有美白产品研发价值。

201例急腹症B型超声检查分析

目的:探讨B超检查在急腹症诊断中的应用与临床诊断价值。方法:对2007年1月～2008年12月201例经手术及临床确诊的病例进行回顾性分析。结果:超声诊断与最后诊断符合者174例,占86.6%,不符合者19例,占9.5%,超声未发现阳性结果8例,占3.9%。结论:B超检查对急腹症的诊断,准确率高、无创伤、快捷简单,为临床诊断和鉴别诊断提供可靠的诊断依据。

严禁擅自使用奥运标志

2002年9月28日，工商宝山分局接到上海市工商局转来的中国第二十九届奥运会组委会法律事务部《关于商请上海市工商行政管理局查处上海某纪念章公司侵犯奥林匹克标志专有权行为的函》并委托调查处理。

多样性护理方案干预对老年2型糖尿病患者血糖的影响分析

研究老年人在确诊患有2型糖尿病之后使用多样性护理方案干预的效果。方法 选择50例老年2型糖尿病患者,依据一定的方式(随机数字表法)分组后,每组的患者例数是25例,在患者的护理过程中共计运用到两种方式,研究组、对照组分别使用多样性护理方案干预、常规护理。结果 研究组对比对照组发现,干预后,前者血压以及血糖均明显更低,P<0.05;对比两组血压以及血糖在干预前的数据得出P>0.05。在干预后,研究组的生活质量均明显更高,而自我管理行为得分、糖尿病知识问卷得分均明显更高,P<0.05,干预前,对比两组自我管理行为得分以及糖尿病知识问卷得分得出P>0.05。结论 年人在确诊患有2型糖尿病之后使用多样性护理方案干预的效果较为理想,有助于改善患者血压、血糖以及生活质量、自我管理行为、糖尿病知识掌握度。