重铬酸钾对雏鸡的毒性试验

为探讨鸡球虫疫苗保存液重铬酸钾对雏鸡的安全性,采用灌胃途径,分别进行急性毒性试验和低剂量毒性试验,观察攻毒雏鸡的临床症状、剖检病变和病理组织学变化,判断重铬酸钾对雏鸡的损害程度。结果表明,重铬酸钾对雏鸡的半数致死量(LD50)为0.501g/kg体重,是临床推荐用量(约3.125mg/kg体重)的160倍以上;0.464g/kg体重以上的重铬酸钾对雏鸡的心脏、肝脏、肺脏、腺胃和肾脏均有不同程度的损伤;常规免疫用量的5、20倍时对雏鸡无害。

柔嫩艾美耳球虫MIF基因克隆及生物信息学分析

【目的】克隆柔嫩艾美耳球虫巨噬细胞迁移抑制因子(macrophage migration inhibitory factor,MIF)基因CDS区,探究其生物信息学特征,为后续抗原表位筛选提供理论依据。【方法】采集晋中地区疑似柔嫩艾美耳球虫感染的阳性样本进行PCR鉴定,根据GenBank中公布的柔嫩艾美耳球虫MIF基因序列,利用RT-PCR技术扩增MIF基因CDS区,构建pET28a-EtMIF重组质粒,经PCR和双酶切鉴定后测序并进行序列分析;利用生物信息学软件对其编码蛋白的理化性质、结构和功能等进行预测。【结果】成功克隆了柔嫩艾美耳球虫MIF基因CDS区序列,全长348 bp,共编码115个氨基酸,相对分子质量为1.203×104。系统进化树结果表明,柔嫩艾美耳球虫MIF基因氨基酸序列与毒害艾美耳球虫的亲缘关系最近,相似性为98.3%。MIF蛋白为非跨膜、可溶性、非分泌型蛋白,亚细胞定位主要在细胞质中,共有10个磷酸化位点;含有1个保守结构域,二级结构由无规则卷曲(35.65%)、延伸链(30.43%)、α-螺旋(27.83%)和β-转角(6.09%)组成,三级结构预测结果与二级结构一致。存在3个最佳潜在抗原表位。【结论】本试验成功克隆出柔嫩艾美耳球虫MIF基因,并对其进行了生物信息学分析,为今后MIF基因的功能研究及基因工程疫苗候选分子的筛选提供参考。

死亡受体接头蛋白在细胞凋亡中的作用研究进展

死亡受体凋亡通路是细胞凋亡的主要途径之一,其中接头蛋白发挥着重要作用.主要综述了死亡受体接头蛋白FADD、TRADD、DAXX、RIP1、ASK1及TRAF2在细胞凋亡中作用效果的研究现状.

鸡球虫感染与宿主细胞凋亡的研究进展

鸡球虫感染引起的细胞凋亡是球虫与宿主细胞之间的相互作用,球虫感染宿主细胞后,可引发局部炎症进而诱发宿主细胞凋亡,也可抑制宿主细胞凋亡,维持细胞完整性。

松针多糖对鸡巨噬细胞HD11的天然免疫调节

【目的】探讨松针多糖对鸡巨噬细胞HD11的天然免疫功能的影响,以期为松针多糖在肉鸡疾病防治方面应用提供科学依据。【方法】试验采用不同浓度的的松针多糖作用于巨噬细胞HD11,试验分为空白对照组、阳性对照组(终浓度为1μg·mL-1的LPS)和松针多糖组(终浓度分别为25、50、100、200、400μg·mL-1的松针多糖)。噻唑蓝(MTT)检测巨噬细胞HD11细胞活性、Griess法检测巨噬细胞HD11细胞上清液中一氧化氮(NO)分泌量、中性红吞噬试验检测巨噬细胞HD11吞噬活性,酶联免疫(ELISA)检测巨噬细胞HD11细胞上清液中干扰素-α(IFN-α)、一氧化氮合酶(iNOS)、白介素-10(IL-10)、白介素-6(IL-6)和肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的含量,荧光定量PCR技术检测HD11细胞中iNOS mRNA表达。【结果】MTT试验结果表明:与空白对照组相比,不同浓度的松针多糖(25、50、100、200、400μg·mL-1)对细胞活性没有影响,说明在25-400μg·mL-1范围内对巨噬细胞没有毒性,可以进行免疫调节作用实验。免疫调节作用试验结果表明:与空白对照组相比,不同浓度的松针多糖极显著(P<0.01)增加了NO释放量和细胞吞噬活性,极显著(P<0.01)或显著(P<0.05)提高了细胞因子IFN-α的含量和iNOS的含量及mRNA的表达量,极显著(P<0.01)或显著(P<0.05)降低了细胞因子IL-10的分泌量。当松针多糖浓度在50、100、200、400μg·mL-1浓度时,细胞因子IL-6和TNF-α的含量极显著(P<0.01)高于空白对照组。与阳性对照组相比,不同浓度的松针多糖极显著(P<0.01)降低NO释放量,极显著(P<0.01)或显著(P<0.05)降低了细胞因子IFN-α的含量、iNOS的含量及mRNA表达量和IL-10含量。当松针多糖浓度在25、50、100μg·mL-1浓度时,细胞吞噬活性极显著(P<0.01)低于阳性对照组,细胞因子IL-6的含量极显著(P<0.01)低于阳性对照组。当松针多糖浓度在25、50、100、200μg·mL-1浓度时,细胞因子TFN-α的含量极显著(P<0.01)低于阳性对照组。【结论】松针多糖能显著提高巨噬细胞HD11的天然免疫调节能力,且存在剂量依赖效应。

不同浓度胰岛素对鸡胚盲肠上皮细胞生长的影响

为了探讨不同浓度的胰岛素对体外培养的鸡胚盲肠上皮细胞生长和增殖的影响,试验选用16日龄SPF鸡胚,采用嗜热菌蛋白酶消化法无菌分离鸡胚盲肠组织,以含不同质量浓度胰岛素(0、5、10、15、20μg/mL)的培养基对盲肠上皮进行体外培养,对细胞克隆形成率、生长曲线和上皮细胞角蛋白18进行测定。结果表明,培养基中添加10μg/mL胰岛素时,鸡胚盲肠上皮细胞的增殖差异极显著,胰岛素质量浓度为15、20μg/mL时,鸡胚盲肠上皮细胞增殖略有升高,但与胰岛素10μg/mL组相比,细胞增殖差异不显著;角蛋白18鉴定结果为阳性。表明在体外鸡胚盲肠上皮细胞培养中,10μg/mL胰岛素能促进鸡胚盲肠上皮细胞分裂、生长和增殖。胰岛素作为一个体外细胞生长的关键因子,可促进鸡胚盲肠上皮细胞的生长和增殖。

发酵苹果渣对獭兔生长性能、屠宰性能、肉品质和免疫指标的影响

为研究发酵苹果渣对獭兔生长性能、屠宰性能、肉品质和免疫指标的影响,选择45日龄健康生长獭兔96只(公母各半),采用单因素试验设计,随机分成4个处理组,每组4个重复,每个重复6只獭兔。分别饲喂基础日粮(CK)、10%发酵苹果渣(试验Ⅰ组)、20%发酵苹果渣(试验Ⅱ组)、30%发酵苹果渣(试验Ⅲ组)。预试期5 d,正式期50 d。结果表明:(1)与对照组相比,添加30%发酵苹果渣饲喂獭兔后能够显著提高平均日增重和耗料增重比(P<0.05);(2)30%发酵苹果渣组能够显著提高被毛重量、全净膛重、半净膛重和肉中蛋白质含量,分别提高14.3%、9.6%、8.9%和5.25%(P<0.05);(3)与对照组相比,20%和30%发酵苹果渣组能够显著提高血液免疫指标Ig G含量(P<0.05),分别提高7.94%和7.52%。综上,添加发酵苹果渣饲喂獭兔具有提高獭兔生产性能、屠宰性能,改善其肉品质和提高血液免疫的作用,在本试验条件下以添加30%的效果最佳。

全株玉米青贮及构树青贮饲料对肉牛增质量效果的影响

选择60头13~16月龄、体质量在400 kg左右(±15%)西杂肉牛为试验对象,随机分为3组,分别为玉米全株青贮组、构树青贮组和玉米秸黄干贮组(对照),在基础日粮(精料)、饲养管理水平完全相同的条件下,研究全株玉米青贮及构树青贮饲料对肉牛增质量效果的影响。结果表明,30 d饲喂后,全株玉米青贮饲料组和构树青贮组(各20头肉牛)的总增质量分别为1 092.6,992.4 kg,分别比黄干贮组20头肉牛总增质量多249,148.8 kg,差异显著;而全株玉米青贮饲料和构树青贮2组相比,虽然全株玉米青贮饲料组的增质量优于构树青贮组,但差异不显著。全株玉米青贮组增质量耗草耗料比分别为1∶6.48和1∶3.22,构树青贮组增质量耗草耗料比分别为1∶7.07和1∶3.54,玉米秸黄干贮组增质量耗草耗料比分别为1∶8.11和1∶4.16。全株玉米青贮组、构树青贮组和玉米秸黄干贮组(各20头肉牛)的总收入分别为24 037.2,21 832.8,18 559.2元,扣除总成本后的纯收入分别为11 495.2,10 179.8,7 085.2元;全株玉米青贮比构树青贮组多增收1 315.4元,比黄干贮组多增收4 410元。综合增质量耗草耗料比及经济效益分析,全株玉米青贮饲料组优于构树青贮组和黄干贮组,构树青贮组优于黄干贮组。

关于国有大中型企业与国际市场接轨工作的思考

随着社会主义市场经济体制的建立,中国关贸总协定地位的恢复,企业在追求资源配置最优、经营利益最大的目标时,会自然而然打破国家界限参与世界经济一体化体系。但我国现阶段经济运行机制与国际通行作法差异还很大。旨在提出对国有大中型企业与国际市场拉轨方面的工作如何认识,如何展开的看法。

巨型艾美耳球虫山西早熟株诱导及生物学特性研究

本研究采用早熟选育技术,诱导选育出1株与已获得的山东株免疫原性差异较大的巨型艾美耳球虫(Eimeria maxima)山西株的早熟弱毒株,并对其进行生物学特性研究。结果表明:早熟诱导获得的巨型艾美耳球虫山西早熟株卵囊略小于亲本株,潜隐期为109 h;早熟株各组小肠病变记分差异显著低于(P<0.05)亲本株组,且临床症状较亲本株组弱;等剂量下,早熟株组的卵囊产量及卵囊繁殖力低于亲本株组;早熟株单次免疫剂量≥400个卵囊/只、2次免疫的一免剂量≥100个卵囊/只、二免剂量≥200个卵囊/只时可达到良好免疫效果。本研究结果为制备高效广谱、免疫原性良好的鸡球虫疫苗提供虫株和理论依据。

联合使用抗球虫药与抗损伤药对鸡球虫病的效果评价

为研究联合使用抗球虫和抗损伤药对鸡球虫病的疗效,本试验选取11日龄SPF鸡90只,分为C组(空白对照)、T0组(感染不给药)、T1~T4组(感染给药组)6个组,感染组感染柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)5.0×10^(4)个/只鸡,并于72 h后用药,T1组(妥曲珠利+磺胺氯吡嗪钠+硝苯地平+VE+Se+Zn+止血敏)、T2组(妥曲珠利)、T3组(磺胺氯吡嗪钠)、T4组(妥曲珠利+磺胺氯吡嗪钠),通过检测血便记分、OPG、盲肠病变记分、死亡率、相对增重率和抗球虫指数,测定其药效。试验结果:感染加药组的相对增重率均高于T0组,其中T1组最高;感染加药组的平均血便率和病变值均低于T0组,其中T1组鸡平均血便率最低,病变值极显著(P<0.01)低于T0组;感染加药组OPG均极显著(P<0.01)低于T0组;T1组ACI值最高,为181.04,达高效;感染加药组的成活率均高于T0组,且T1、T3、T4组成活率为100%。本试验结果表明,联合使用抗球虫和抗损伤药对鸡球虫病的疗效达高效,并优于使用单一抗球虫药或两种抗球虫药的联合使用。

高粱替代不同水平玉米对育肥猪生长性能、胴体性状及肉品质的影响

本试验旨在研究高粱替代不同水平玉米对育肥猪生长性能、胴体性状及肉品质的影响。选择160头体重[(48.93±3.01)kg]相近的健康杜×长×大三元育肥猪,随机分为4组,即对照组(基础饲粮)、30%替代组(用高粱替代基础饲粮中30%的玉米)、65%替代组(用高粱替代基础饲粮中65%的玉米)和100%替代组(用高粱替代基础饲粮中100%的玉米),每组4个重复,每个重复10头猪(5头去势公猪、5头母猪)。试验期60d。结果显示:1)高粱替代不同水平玉米对育肥猪的料重比、平均日采食量无显著影响(P>0.05);与对照组相比,100%替代组平均日增重降低3.4%(P<0.05)。2)与对照组相比,30%替代组、65%替代组和100%替代组背膘厚度分别提高3.0%、5.2%和4.3%(P<0.05)。3)与对照组相比,30%替代组、65%替代组和100%替代组背最长肌pH45min分别提高0.5%、1.0%和0.4%(P<0.05);65%替代组和100%替代组背最长肌中粗脂肪含量分别提高8.7%和11.3%(P<0.05)。4)与对照组相比,100%替代组背最长肌中谷氨酸和苏氨酸含量分别降低2.5%和11.7%(P<0.05)。5)与对照组相比,100%替代组背最长肌中油酸、反式油酸、花生酸和花生四烯酸含量分别提高15.3%、39.6%、56.8%和52.4%(P<0.05);65%替代组背最长肌中反式油酸、花生酸、二十碳三烯酸和花生四烯酸分别提高37.9%、77.15%、72.2%和53.2%(P<0.05)。综上所述,本试验条件下,用高粱替代饲粮中部分玉米不仅对育肥猪的生长性能无负面影响,还能够通过提高肌肉中部分不饱脂肪酸含量而改善肉品质。

EGF和FGF-2对猪皮下脂肪神经嵴干细胞增殖和分化的影响

【目的】探究表皮生长因子(epidermal growth factor, EGF)和成纤维细胞生长因子2(fibroblast growth factor 2,FGF-2)对猪皮下脂肪神经嵴干细胞(neural crest stem cells, NCSCs)增殖及分化的影响,以优化猪皮下脂肪神经嵴干细胞的培养条件。【方法】通过体外分离培养原代猪皮下脂肪NCSCs,免疫荧光染色鉴定NCSCs标志物p75 NTR,并用不同浓度的EGF和FGF-2(0和0、10和10、10和20、20和10、20和20、30和30 ng/mL)作用于传代猪皮下脂肪NCSCs,用CCK-8试剂盒测定细胞增殖率,确定细胞生长的最适EGF和FGF-2浓度,将试验分为空白组和最适浓度组,测定两组细胞的生长曲线,成脂化诱导后油红O染色,对比两组细胞的脂滴生成量。【结果】免疫荧光染色结果显示,原代猪皮下脂肪NCSCs经p75 NTR鉴定呈阳性。CCK-8细胞增殖试验结果显示,EGF和FGF-2的浓度均为20 ng/mL时对传代猪皮下脂肪NCSCs的促增殖作用最佳。生长曲线显示,两组细胞均在第5~9天处于对数生长期,第10~15天细胞增殖减缓,逐渐到达停滞期。油红O染色结果显示,最适浓度组胞质内的脂滴生成量远多于对照组。【结论】在培养液中添加20 ng/mL EGF和20 ng/mL FGF-2对猪皮下脂肪NCSCs的增殖和分化有促进作用。

甘草查尔酮A对副猪嗜血杆菌感染猪肺泡巨噬细胞氧化应激的影响

【目的】探究甘草查尔酮A对副猪嗜血杆菌感染猪肺泡巨噬细胞引发的氧化应激的影响,为开发治疗副猪嗜血杆菌感染的新型药物提供参考。【方法】利用支气管肺泡灌洗法分离猪肺泡巨噬细胞,分为6组:阴性对照组,未感染副猪嗜血杆菌的猪肺泡巨噬细胞;阳性对照组,感染副猪嗜血杆菌的猪肺泡巨噬细胞;DMSO组,猪肺泡巨噬细胞感染副猪嗜血杆菌后给予0.1%DMSO;5、10和20μg/mL甘草查尔酮A组,猪肺泡巨噬细胞感染副猪嗜血杆菌后给予相应浓度的甘草查尔酮A。各组细胞培养24 h后,用CCK-8法检测细胞活力,用酶标仪或可见光分光光度计检测各组细胞上清中乳酸脱氢酶(lactate dehydrogenase,LDH)、谷胱甘肽过氧化物酶(glutathione peroxidase,GSH-Px)和超氧化物歧化酶(superoxide dismutase,SOD)活性及丙二醛(malondialdehyde,MDA)、一氧化氮(nitric oxide,NO)和总抗氧化能力(total antioxidant capacity,T-AOC)水平,用活性氧(reactive oxygen species,ROS)荧光探针(DCFH-DA)检测ROS水平。【结果】与阴性对照组相比,副猪嗜血杆菌感染组猪肺泡巨噬细胞活力均显著降低(P<0.05),上清液中LDH活性均显著提高(P<0.05),MDA、NO、ROS水平及SOD活性均显著增加(P<0.05);与阳性对照组相比,5、10和20μg/mL甘草查尔酮A组猪肺泡巨噬细胞活力均显著提高(P<0.05),上清液LDH活性均显著降低(P<0.05),10和20μg/mL甘草查尔酮A组MDA、NO和ROS水平均显著降低(P<0.05);5、10和20μg/mL甘草查尔酮A处理组GSH-Px、SOD和T-AOC活性均呈剂量依赖性显著升高(P<0.05)。【结论】副猪嗜血杆菌感染猪肺泡巨噬细胞导致氧化和抗氧化平衡失调,5~20μg/mL甘草查尔酮A可以降低细胞氧化应激反应。

甘草查尔酮A对副猪嗜血杆菌的体内外抑制作用

探讨甘草查尔酮A对副猪嗜血杆菌体内外生长的影响。将副猪嗜血杆菌于分别含10、20、50、100、200μg/mL甘草查尔酮A的TSA液体培养基中培养,采用分光光度法分析副猪嗜血杆菌生长和生物被膜形成的变化;以1、10、100mg/kg甘草查尔酮A经口灌胃小鼠,分别在3d、5d和7d称重,并计算脏器指数,Hiseq高通量测序技术分析肠道菌群等生长性能,Bliss法测定副猪嗜血杆菌对小鼠半数致死量(LD50);检测甘草查尔酮A对小鼠清除0.01×LD50副猪嗜血杆菌感染和抵抗100×LD50副猪嗜血杆菌感染的影响。结果表明,各浓度甘草查尔酮A对副猪嗜血杆菌的生长速率和生物被膜形成的影响差异均无显著差异。所有剂量组小鼠给予甘草查尔酮A处理后,一般临床症状、体重和脏器指数无统计学意义。灌喂甘草查尔酮A有增加小鼠肠道菌群丰富度的趋势,但降低拟杆菌门丰度而增加厚壁菌门丰度。小鼠清除0.01×LD50副猪嗜血杆菌感染的能力呈剂量依赖性,而100×LD50的副猪嗜血杆菌感染小鼠后随着甘草查尔酮A浓度增加可呈剂量依赖延迟小鼠死亡时间。表明甘草查尔酮A对副猪嗜血杆菌体外生长无显著的抑制作用,同时对小鼠生长性能亦无明显影响,但可增加肠道菌群丰富度而提高小鼠抵抗副猪嗜血杆菌感染的能力。

创新机制重塑山西饲料行业健康发展新局面

党的十八大以来,科技对农业发展的支撑作用不断增强,饲料行业也是如此。然而,山西省饲料行业的发展却一直受到科技创新成果"三品"现象与生产需要的技术成果供给不足问题的困扰。一方面,山西省重点饲料企业普遍存在研发经费投入不足、技术研发能力弱的问题。在企业技术需求调查问卷分析时发现,当前既有对减排、减抗、畜禽排放污染物利用的行业共性问题需求,也有解决禽类规模养殖精准饲喂、草食动物特色养殖、幼畜营养调控等区域个性技术的迫切要求。另一方面,与饲料企业相比,山西省的省属高校、科研单位拥有健全的组织机构、完整的技术队伍和先进的设施设备,有能力也有责任为饲料企业提供技术支持。但是,由于缺乏有效的引导机制和渠道平台,科研人员普遍缺乏创新动力,相当部分的研究课题和成果与市场脱节或难以转化。为改变科研方向与企业生产"两张皮",提高资源配置效率,促进科研与市场的深度融合,最终形成合力,共同提升山西饲料产业的核心竞争力,笔者提出以下3点建议:(1)完善立项机制,保证有应用前景的研究在立项之初就与市场紧密结合;(2)完善共享机制、大力开展协同创新,依托产业联盟完善设备、队伍共享资源平台,通过资源共享使企业与科研单位逐步深入开展协同研究;(3)健全成果评价机制、建立汇交系统,通过科学评价机制和信息公开打通成果转化的最后"一公里"。

单味与复方中草药提取物抑制镰刀菌的比较研究

本试验以禾谷镰刀菌(Fusarium graminearum)和串珠镰刀菌(Fusarium verticillioides)为供试菌株,从26种中草药水提物中筛选出6种对两种镰刀菌有抑制效果的药物,通过不同的组方配伍,利用生长速率法检验不同组方对镰刀菌的抑制效果。试验显示:对串珠镰刀菌抑菌效果最强的为肉豆蔻-五味子两药配伍组,抑菌率为70.55%(P <0.05),比单药和三药配伍最优组分别高11%、17%。对禾谷镰刀菌抑菌作用最强的是肉豆蔻-诃子-石榴皮三药配伍组,抑菌率为77.91%(P <0.05),比两药配伍最优组高58%,较单药最优组提高90%;结果表明中草药提取物组方后可显著提高抑菌活性。

添加不同水平复合中草药对蛋鸡生产性能和免疫指标的影响

[目的]本试验旨在研究不同水平复合中草药对蛋鸡生产性能和免疫性能的影响。[方法]选用120日龄健康、体重相近的海兰褐蛋鸡300只,随机分为5组,每组6个重复,每个重复10只鸡。对照组饲喂基础日粮,试验组分别在基础日粮中添加0.4%、0.3%、0.2%、0.1%的复合中草药。试验期40d。[结果]与基础日粮组相比,1)添加复合中草药能够提高平均蛋重和产蛋率(P<0.05);但对料肉比和采食量无显著影响(P>0.05),2)IgA、IgM、IgG、C3和C4无显著影响(P>0.05);但添加4%、3%、2%和1%水平的中草药能够分别降低血清NOS17.8%、18.3%、13.4%和18.3%(P<0.05),添加4%和3%的中草药能够分别降低血清中NO27.3%和32.2%(P<0.05);3)添加复合中草药能够显著提高血液中性粒细胞绝对值和百分比、白细胞数(P<0.05),降低淋巴细胞绝对值(P<0.05),对其它血常规无显著影响(P>0.05)。[结论]饲粮中添加复合中草药能够改善蛋鸡生产性能和免疫功能,以添加4%的复合中草药制剂效果较好。

日粮中添加黄芪复方颗粒对肉鸡免疫器官组织结构及肠道结构的影响

目的:探究黄芪复方颗粒对肉鸡免疫器官组织结构和肠道结构的影响。方法:选用100只1 d龄罗斯308肉仔鸡随机分为4组,对照组饲喂基础日粮,实验组于第21天开始在基础日粮中分别添加0.87%、1.74%、3.48%黄芪复方颗粒,实验周期42 d,测定黄芪复方颗粒对肉鸡法氏囊、脾脏和十二指肠组织结构的影响。结果:与对照组比较,各实验组法氏囊淋巴滤泡的面积增加,脾脏的脾小结面积、动脉周围淋巴鞘直径增加,十二指肠的肠壁厚度及绒毛高度增加,差异具有统计学意义(P<0.01);十二指肠隐窝深度降低,其中0.87%组隐窝深度与对照组比较,差异具有统计学意义(P<0.01)。结论:日粮中添加黄芪复方颗粒可有效促进畜禽生长发育,促进消化功能,促进免疫器官发育。

兽医病理学课程案列库建设的探索与实践

为了提高本科动物医学类专业兽医病理学课程的教学质量,培养兽医领域专业知识宽厚、临床实践能力突出的应用型高素质人才,以更好地适应现代化畜牧产业的需求。该研究首先针对兽医病理学课程实际教学中存在的问题及该课程的内容和特点,构建了教学案例库,并将其运用于教学中。研究成果不仅为提高本科兽医病理学课程教学质量提供了参考,同时也可为改善农业高等院校该课程及本专业其他课程的教学方法提供借鉴,并且该研究有助于解决本科生培养过程中课程教学方法不完善等问题。