基于微生物组学和机器学习构建咽喉反流唾液菌群诊断模型

目的探索使用微生物组学技术和机器学习的方法构建咽喉反流(laryngopharyngeal reflux,LPR)唾液菌群诊断模型的可能性。方法以2022年2~11月就诊的经8周质子泵抑制剂治疗显效的34例LPR患者为病例组,与病例组年龄、性别和体重指数相匹配的47例健康志愿者为对照组,留取用药前的唾液标本,提取DNA,扩增16S片段后进行测序,对测序结果进行生物学信息分析,比较菌属水平物种差异。选择病例组24例、对照组33例作为训练集,其余作为测试集,随机森林法分类数据,进行十折交叉验证,选择最优菌属组合构建诊断模型,计算疾病概率指数(probability of disease,POD),绘制ROC曲线,使用SPSS 18.0软件对数据进行统计学分析。结果病例组和对照组相比,唾液中22个属相对丰度存在统计学差异(P<0.05),构建由6个菌属组成的诊断模型,即乳酸杆菌属、芽孢杆菌属、新鞘氨醇杆菌属、假交替单胞菌属、罗尔斯通菌属和Phocaeicola属,测试集ROC曲线下面积为0.843,诊断模型灵敏度为60.0%,特异度为87.71%,Kappa值为0.470。结论由唾液菌群构建的菌属组合诊断模型可以区分LPR患者与健康人,具有潜在的临床应用价值。

咽喉反流性疾病患者肠道菌群变化的初步研究

目的观察咽喉反流性疾病(laryngopharyngeal reflux disease,LPRD)患者与健康人肠道菌群组成的差异。方法选取LPRD患者30例为LPRD组,健康志愿者30例为对照组,采集两组对象新鲜粪便标本,利用16S rDNA高通量测序技术对两组粪便细菌群落组成结构及多样性进行分析。结果两组间alpha多样性和beta多样性分析均无显著性差异(P>0.05),LEfSe差异分析显示,LPRD组与对照组相比,放线菌门(P=0.030)、红蝽菌纲(P=0.010)、红蝽菌目(P=0.010)、生丝菌科(P=0.022)、红蝽菌科(P=0.010)、海洋杆菌属(P=0.022)、柯林斯氏菌属(P=0.004)、瘤胃球菌属(P=0.008)、普雷沃氏菌种(P=0.019)相对丰度有显著差异,其中放线菌门、红蝽菌纲、红蝽菌目、红蝽菌科、柯林斯氏菌属、瘤胃球菌属、普雷沃氏菌种在LPRD组富集,生丝菌科、海洋杆菌属在对照组富集。结论LPRD患者与健康人肠道菌群多样性和物种组成无明显差异,但在菌群结构上发生了变化,一些特定细菌类群比例有差异,这些结构差异菌可能与LPRD的发生和发展有关。

GJB2基因条件敲除小鼠耳蜗凋亡相关基因表达差异研究

目的研究GJB2基因条件敲除(cCx26Pax2Cre)小鼠耳蜗膜迷路细胞中凋亡相关基因的差异性表达情况,探讨GJB2基因突变导致耳聋的机制。方法由Cx26loxp/loxp和Pax2Cre/+小鼠杂交产生的cCx26Pax2Cre小鼠为实验组,野生型BALB/C小鼠作为正常对照组,两组分别选取P10和P18小鼠各3只,提取耳蜗膜迷路总RNA,反转录成cDNA,用QRT-PCR Array检测两组与凋亡相关的84个功能基因的表达差异。结果与野生型小鼠相比,cCx26Pax2Cre小鼠在P10时,共有16个基因表达有生物学意义(19.05%,16/84),其中14个基因表达下调(87.5%,14/16),包括9个抑制细胞凋亡和促进细胞增殖的基因下调和5个促进细胞凋亡和炎症反应的基因下调,2个基因表达上调(12.5%,2/16),均为促进细胞凋亡的基因,此期促进细胞凋亡的趋势十分明显;在P18时,共有4个基因(4.76%,4/84)表达变化有生物学意义,包括3个基因表达下调(75%),全部为抑制细胞凋亡的基因(100%),1个基因表达上调(25%),为促进细胞凋亡的基因,总体趋势仍为促进细胞凋亡的发生。与P10相比,cCx26Pax2Cre小鼠P18时耳蜗组织中共6个基因表达变化有生物学意义,其中促进细胞凋亡的caspase-8基因和抑制细胞凋亡的No13基因表达上调(33.3%,2/6),4个基因表达下调(66.7%,4/6),包括促进细胞凋亡的Tnfrsf10b、Cideb基因和抑制细胞凋亡的CD40、Bc110基因。结论 GJB2基因敲除后,可能通过上调死亡受体5(death receptor 5,DR5)激活死亡受体途径直接导致细胞凋亡,同时也可能通过caspase-8间接激活线粒体通路使凋亡信号进一步放大,最终引起cCx26Pax2Cre小鼠耳蜗细胞的广泛缺失和听力下降。

细胞凋亡与耳聋研究进展

凋亡是一种主动性程序性细胞死亡（programmed cell death，PCD），在这个过程中凋亡蛋白酶（caspase）（细胞自杀性半胱氨酸蛋白酶家族）被激活，并在凋亡过程中起核心作用。细胞凋亡形态学上表现为细胞骨架塌缩、细胞固缩、细胞膜泡形成、染色体集聚、DNA片段化、磷脂酰丝氨酸在细胞膜上不对称性消失、有吞噬作用的细胞吞噬活性缺失等。目前研究发现细胞凋亡主要有3种途径，即死亡受体途径、线粒体途径、内质网途径。许多凋亡相关基因在这些过程中起作用，最终引起细胞凋亡。

DR5在GJB2基因条件敲除小鼠耳蜗表达分布及年龄相关性变化

目的研究GJB2基因条件敲除（cCx26Pax2Cre）小鼠耳蜗DR5表达情况，探讨GJB2基因突变导致耳聋的机制。方法 cCx26Pax2Cre小鼠为实验组，BALB/C小鼠为对照组，分别取P8、P12和P21时小鼠耳蜗行冰冻切片，利用荧光标记免疫组织化学方法和激光共聚焦显微镜技术观察死亡受体5（death receptor，DR5）蛋白在耳蜗的表达情况，用Image Pro Plus 6.0计算平均光密度值，SPSS 18.0进行统计分析。结果 P8时DR5主要表达在柯蒂氏器外侧的支持细胞、耳蜗外侧壁Ⅱ型纤维细胞、盖膜，随着日龄的增加，表达逐渐向内侧延伸到内侧支持细胞，P12和P21时还出现了螺旋缘、毛细胞、螺旋神经节细胞、螺旋凸DR5表达阳性，而且表达强度随日龄增加而逐渐变强。在野生小鼠DR5也有表达但较弱。与野生型小鼠相比， cCx26Pax2Cre小鼠耳蜗蜗轴螺旋管内神经纤维DR5表达的光密度值明显增大，经统计学分析两者具有显著性差异（P＆lt;0.05）。结论 cCx26Pax2Cre小鼠缝隙连接功能异常，可能导致耳蜗细胞出现葡萄糖短缺，导致三磷酸腺苷（adenosine-triphosphate， ATP）不足，引起DR5的表达上调，直接激活凋亡的死亡受体途径，或间接激活线粒体通路使凋亡信号进一步放大，导致耳蜗细胞凋亡的发生，最终引起cCx26Pax2Cre小鼠听力下降。

审丑视角下的网络红人丑态现象解读

当今网络红人横空出世,红人丑态现象层出不穷,而以传统审丑文化为基点,当今网络红人露丑和大众审丑均因感性愉悦和功利至上而缺乏深刻内涵,并以此走向畸形。可以说,丑的畸形是现实流行文化孕育的结果,也是大众被媒介利用有意引导的结果。丑的异化和畸形给人们带来了精神危机——价值的虚无。因此,认识这种畸形并且对它的矫正已迫在眉睫。

上呼吸消化道菌群研究进展

上呼吸消化道内存在大量菌群,这些菌群在维持局部微生态平衡中起作用,当出现菌群失调,局部稳态被打破可能导致疾病的发生。为了解上呼吸消化道的菌群特点及与疾病的关系,本文对上呼吸消化道不同分区菌群特点与疾病关系以及菌群在疾病诊断中价值的研究现状做一综述。

咽喉反流患者唾液菌群初步研究

目的:分析咽喉反流(LPR)患者唾液菌群特征。方法:采用病例对照研究方法分析2020年12月至2021年3月在解放军总医院第八医学中心耳鼻咽喉头颈外科门诊就诊的60例患者及健康志愿者资料,其中男35例,女25例,年龄21~80(33.75±11.10)岁。采用连续入组法选取30例疑似LPR患者为研究组,无咽部症状的志愿者30例为对照组,留取唾液标本,提取DNA,扩增16S片段后进行测序,对测序结果进行生物学信息分析。使用SPSS 18.0软件对数据进行统计学分析。结果:2组唾液菌群多样性分析无明显差异;2组唾液差异菌分析显示,在门水平研究组拟杆菌门相对丰度高于对照组[37.86%(31.15%,41.54%)vs 30.24%(25.51%,34.18%),Z=-3.46,P<0.01]、变形杆菌门低于对照组[15.76%(11.81%,20.17%)vs 20.63%(13.98%,28.82%),Z=-1.98,P<0.05];在属水平研究组普雷沃菌属、乳杆菌属、帕拉斯卡拉多菌属、鞘脂菌属相对丰度高于对照组(Z值分别为-2.92、-2.69、-2.05、-2.31,P值均<0.05);链球菌属、心杆菌属、克雷伯杆菌属、Uruburuella属研究组相对丰度低于对照组(Z值分别为-2.43、-2.32、-2.17、-2.32,P值均<0.05)。LEfSe差异分析提示2组中有明显差异的物种有39个,其中拟杆菌门、普雷沃菌科、普雷沃菌属等在研究组富集,链球菌科、链球菌属等在对照组富集,差异有统计学意义(P<0.05)。结论:LPR患者唾液菌群发生变化,出现菌群失调,可能与LPR的发生发展相关。

耳鼻咽喉科门诊成年患者的睡眠状况与咽喉反流性疾病的相关性

目的通过流行病学研究方法探讨睡眠与咽喉反流性疾病(laryngopharyngeal reflux disease,LPRD)的相关性.方法回顾性分析2017年5月1日至2018年4月30日每周二和周四上午,在解放军总医院第八医学中心耳鼻咽喉科专家门诊就诊且符合入选标准的患者的年龄、性别、身高、体重,吸烟、饮酒、便秘、高脂肪饮食情况,填写反流症状指数(reflux symptom index,RSI)量表、匹兹堡睡眠质量指数(Pittsburgh sleep quality index,PSQI)量表、医院焦虑抑郁量表(hospital anxiety and depression scale,HADS),根据RSI评分将患者分为病例组和对照组,使用Stata12.0软件比较两组之间上述指标的差异,多因素Logistic回归分析LPRD危险因素.结果共有908例患者入选,其中病例组166例,对照组742例,两组BMI、吸烟、饮酒、便秘、高脂肪饮食情况差异均无统计学意义(P值均>0.05),病例组PSQI评分、焦虑评分、抑郁评分均高于对照组;病例组存在睡眠障碍者焦虑和抑郁评分显著高于睡眠正常者,睡眠障碍患者RSI高于睡眠正常患者(9.5[4.0,16.0]分比5.0[1.0,10.0]分,Z=-6.07,P<0.001);以上差异均具有统计学意义(P值均<0.05).多因素分析结果显示睡眠障碍是LPRD的危险因素(OR=2.59,95%CI 1.75~3.84).结论睡眠障碍与LPRD发病存在相关性,睡眠障碍同时也可能与LPRD患者出现焦虑和抑郁有关,关注睡眠障碍可能有助于提高LPRD治疗效果.

改良负压封闭引流装置在难治性咽瘘治疗中的应用

目的探讨改良负压封闭引流(VSD)装置在难治性咽瘘治疗中的应用。方法两例患者诊断分别为下咽癌(环后区,T2N2M0)和喉癌(声门区,T1N0M0),年龄为48岁和62岁,行下咽肿瘤切除术和支撑喉镜下二氧化碳激光声带部分切除术,术后下咽癌患者行放化疗,喉癌患者行放疗,分别于同步放化疗后5 d、放疗后146 d出现难治性咽瘘,应用自制改良VSD装置治疗,对两例患者咽瘘愈合过程进行观察。结果2例患者使用改良VSD装置治疗后分别于第6天、第3天瘘口红肿消退,第58天、第38天创面明显缩小,后行咽瘘修补术,第74天、第63天咽瘘愈合。结论经过改良的VSD装置可以根据创面情况灵活应用,有助于头颈部肿瘤治疗后并发的难治性咽瘘的治疗。