肉用乳酸菌发酵剂菌株的分离筛选与鉴定

作者从4种自然发酵肉制品中分离出112株乳酸菌,通过考察菌株的发酵特性和耐受性,最终获得一株性能优良的菌株T1-1。该菌株在添加8 g/dL NaCl和150 mg/kgNaNO2的MRS培养基中生长良好,并且能耐受80℃水浴10 min。通过生理生化鉴定和16S rRNA序列分析,该菌株为植物乳杆菌。

酱油后酵中植物乳杆菌S35产γ-氨基丁酸发酵条件优化

采用响应面法对植物乳杆菌S35在酱油后酵中产γ-氨基丁酸(GABA)的发酵条件进行了优化,选取发酵温度、接种量和发酵时间作为考察因素,以GABA含量为评价指标,在单因素试验基础上选取试验因素与水平,根据Box-Behnken试验设计原理,采用3因素3水平的响应面分析法确定了各影响因素的最佳条件:发酵温度34℃,接种量3.2%及发酵时间7d。此条件下,酱油中GABA的含量达到3.203g/L。

雪莲果对双歧杆菌促生长作用的研究

双歧杆菌（Bifidobacterium）是人体内的正常生理性细菌，定植于肠道内，是目前公认的一类对机体健康有促进作用的代表性益生菌。该菌营养要求高，需要外源性生长因子，即双歧杆菌促生长因子（bifidus factor，BF）。

酶联免疫吸附法测定番茄酱中链霉素和双氢链霉素的含量

应用酶联免疫吸附法(ELISA)测定了番茄酱中链霉素(SMC)和双氢链霉素(DHSMC)的含量,并制备了检测试剂盒。通过戊二醛先后与SMC与牛血清蛋白(BSA)的交联反应制成SMC免疫原(BSA-SMC)。用相同方法,以鸡卵清蛋白(OVA)代替BSA,制得包被原(OVA-SMC)。用免疫原免疫8周龄的雌性BABL/c小鼠制备SMC单克隆抗体(SM-mAb),用OVA-SMC包被酶标板。以百分吸光度(A/A0)为纵坐标,SMC标准溶液的质量浓度为横坐标,得到SMC浓度在0.05～4.05μg.L-1之间呈线性关系。检出限(3s)为1.98μg.kg-1。试验测得回收率在79.4%～92.0%之间,测定值的相对标准偏差(n=6)(批内及批间)均小于10%。DHSMC在此条件也同样反应,故方法测得结果为两者的总量。

胶体金免疫层析法测定牛奶中β-内酰胺类抗生素和三聚氰胺残留

应用胶体金免疫层析法对牛奶中的β-内酰胺类抗生素和三聚氰胺残留进行检测,考察该法的灵敏度、假阳性率、假阴性率、特异性及准确性。结果表明:用胶体金免疫层析法测定牛奶中的β-内酰胺类抗生素和三聚氰胺,检测限分别为青霉素G 2μg/L、氨苄青霉素3μg/L、阿莫西林4μg/L、苯唑青霉素6μg/L、邻氯青霉素6μg/L、双氯青霉素6μg/L、萘夫西林20μg/L、头孢喹肟20μg/L、头孢哌酮40μg/L、头孢曲松50μg/L、头孢噻呋90μg/L、头孢洛宁10μg/L、三聚氰胺50μg/L,假阳性率不大于5%,假阴性率为0;方法特异性较好,与牛奶中常见的其他抗生素无交叉反应;结果准确可靠,对实际样本的检测结果与液相色谱-质谱/质谱法基本一致。该方法简便、快速、准确、稳定,可作为牛奶中β-内酰胺类抗生素和三聚氰胺残留现场快速检测的一种有效手段。

胶体金免疫层析法快速检测水产品中呋喃妥因代谢物残留

采用胶体金免疫层析技术(GICA)测定水产品中的呋喃妥因代谢物残留,并用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)对实验结果进行确证。结果显示,胶体金免疫层析法的检测限为1.0μg/kg,假阳性率不大于5%,假阴性率为0;对实际样本的检测结果与LC-MS/MS法一致。研究表明,胶体金试纸条法操作简便、快速,成本低,为水产品中呋喃妥因代谢物的残留检测提供了快速筛选方法,而LC-MS/MS法灵敏度高,结果准确,适用于阳性样本的确证和精确定量。

金刚烷胺残留化学发光酶免疫法的建立

建立金刚烷胺残留的化学发光酶免疫方法。对酶标抗原与磁标抗体的最佳稀释倍数、反应时间、底物发光时间进行优化,建立标准曲线,同时对方法的检测限、准确度和精密度进行评价。结果表明:50%抑制浓度(IC50)为0.481μg/L,线性范围是0.085~2.729μg/L;在动物组织、兽药、饲料中的检测限为0.1μg/kg,样本添加回收率为80.2%~94.5%,批内、批间相对标准偏差均<10%。该方法灵敏度高、操作简便,可广泛用于动物组织、兽药、饲料中金刚烷胺残留量的测定。

动物源性食品中红霉素残留的ELISA检测

本试验采用间接竞争酶联免疫分析法（ELISA法）测定了动物源性食品中红霉素的残留,结果显示：猪肉、猪肝、牛肉、鱼肉、虾肉、蜂蜜和牛奶中的红霉素检测限分别为4.13、8.23、0.78、3.75、7.94、3.09μg/kg和1.87μg/L,样品添加回收率范围为69.0%-107.5%,批内变异系数为5.7%-11.4%,批间变异系数为8.7%-14.0%;与硫氰酸红霉素的交叉反应率为114%,与琥乙红霉素的交叉反应率为67.4%,与其他药物的交叉反应率均小于0.1%。试验表明,采用ELISA法测定红霉素准确灵敏、重复性好、特异性高,适用于检测动物源性食品中的红霉素残留。

三唑酮及其代谢物残留检测的酶联免疫方法的建立

通过对三唑酮分子结构进行改造,制备得到三唑酮半抗原及人工抗原、免疫动物、制备特异性单克隆抗体。在筛选三唑酮单克隆抗体的基础上,建立了三唑酮及其代谢物三唑醇残留检测的酶联免疫方法。结果表明,Logit/Log拟合标准曲线方程为Y=-2.175X+1.086,相关系数R^(2)为0.9950,半数抑制浓度(IC50)为3.0μg·L^(-1),样本检测限为0.5mg·kg^(-1),阳性样本的加标回收率为73.6%~102.5%,样本重复检测结果的变异系数为5.8%~9.2%。建立的酶联免疫吸附方法具有较好的特异性、回收率和重复稳定性,可用于烟草及蔬菜水果中三唑酮及其代谢物三唑醇的残留检测。

应用酶联免疫法测定环境水样中雌三醇的残留量

通过对雌三醇分子结构的改造,制备了雌三醇半抗原和人工抗原,通过对动物进行免疫得到雌三醇的单克隆抗体,该抗体灵敏度为0.05μg/L,对雌二醇和雌酮的交叉反应率小于10.00%。基于该抗体建立了雌三醇间接竞争酶联免疫检测方法,该方法检测环境水样品中雌三醇的检测限为0.25μg/L,回收率为72.00%~108.00%,变异系数小于15.00%。

动物组织中β-兴奋剂类药物多残留酶联免疫检测方法的建立

应用直接竞争酶联免疫吸附技术,建立了一种快速检测动物组织中β-兴奋剂类药物多残留的方法,并对其技术性能进行了评价。结果表明,该方法的IC50浮动范围为0.4～0.7μg/L,对组织样本的检测限为0.5μg/kg;样本添加回收率为72.9%～103.5%,变异系数为5.8%～14.1%;可用于检测克仑特罗、沙丁胺醇、塞布特罗、妥布特罗、克仑潘特、溴布特罗、溴氯布特罗、马喷特罗。

酶联免疫吸附法检测动物源性食品中氨苯砜残留

应用间接竞争酶联免疫吸附技术,建立了一种快速检测动物源性食品中氨苯砜残留的方法,并对其各项技术参数进行了评价。结果显示,该方法的半数抑制浓度IC50为0.369μg/L,对鸡肉、猪肉样本的检测限为0.2μg/kg,对鸡蛋、蜂蜜样本的检测限为2μg/kg,对牛奶样本的检测限为0.6μg/L;样本添加回收率为78.2%~104.0%,变异系数为5.2%~13.5%;对实际样本的检测结果与液相色谱-串联质谱法基本一致。该方法操灵敏度高、快速准确,适用于动物源性食品中氨苯砜残留的快速检测。

基于单克隆抗体的胶体金免疫层析法快速检测丙溴磷

为实现蔬菜中丙溴磷的现场快速检测,采用免疫层析技术对丙溴磷残留的胶体金快速检测试纸条的制备开展研究。用胶体金颗粒标记丙溴磷单克隆抗体作为检测探针,以硝酸纤维素膜为固相载体,包被丙溴磷半抗原-卵清蛋白偶联物为检测线、羊抗鼠IgG为质控线,建立丙溴磷的胶体金快速检测试纸条。结果表明,该试纸条的检出限为0.10 mg/kg、灵敏度96%、特异性93%、假阴性率4%、假阳性率7%、相对准确度94.5%,重复性较好。胶体金试纸条操作简便、检测速度快、成本低,适用于蔬菜中丙溴磷残留的现场筛查和检测。

牛奶中泰乐菌素和替米考星的胶体金免疫层析法测定

建立一种快速、简便、同时针对牛奶中泰乐菌素和替米考星残留的检测方法。应用竞争抑制免疫层析原理,研制出泰乐菌素和替米考星胶体金试纸条,并对其性能进行了鉴定。结果表明,该试纸条对牛奶中泰乐菌素和替米考星的检测限分别为25μg/L和50μg/L。假阳性率低于5%,假阴性率为0,检测时间10 min,与其他大环内酯类抗生素无交叉反应。该方法操作简便、灵敏度高、特异性强,适用于乳品流通环节中泰乐菌素和替米考星残留的快速检测。

动物组织中赛庚啶竞争酶联免疫法的建立

建立快速检测动物组织中赛庚啶的竞争酶联免疫法。制备赛庚啶人工抗原作为包被原,使用辣根过氧化物酶标记的单克隆抗体,构建快速检测动物组织中赛庚啶的竞争酶联免疫法。结果表明,Logit/Log拟合标准曲线方程为Y=-2.051 8X-1.353 4,相关系数R为0.995 7,半数抑制浓度（IC50）为0.23μg/L,动物组织样本的检测限为0.3μg/kg,赛庚啶阳性样本的加标回收率为85.1%-114.5%,样本重复检测结果的变异系数为5.2%-9.6%。建立的竞争酶联免疫吸附方法具有较好的特异性、回收率和重复稳定性,可用于动物组织中赛庚啶残留的检测。

胶体金免疫层析法检测禽蛋中氯羟吡啶残留

目的建立胶体金免疫层析法检测禽蛋中氯羟吡啶残留的分析方法。方法在用间接竞争酶联免疫吸附法分析氯羟吡啶单克隆抗体灵敏度和交叉反应性的基础上,以胶体金标记单克隆抗体作为示踪标志物,以包被氯羟吡啶半抗原-卵清蛋白偶联物和羊抗鼠IgG的硝酸纤维素膜作为载体,制备了氯羟吡啶胶体金免疫层析试纸条。结果氯羟吡啶单克隆抗体的半抑制浓度(half maximal inhibitory concentration,IC_(50))为1.6μg/L,与地克珠利、二硝托胺、尼卡巴嗪、磺胺喹噁啉、磺胺二甲嘧啶、癸氧喹酯、盐酸氨丙啉和盐酸氯苯胍8种药物均无交叉反应。制备的胶体金免疫层析试纸条肉眼判定禽蛋中氯羟吡啶的检出限为15μg/kg,灵敏度为98%、特异性为93%、假阴性率为2%、假阳性率为7%。结论制备的试纸条具有操作简单、检测快速、成本低等优点,可用于大批量禽蛋样本中氯羟吡啶残留的初步筛选。

6种农药多残留快速检测芯片的研制

目的研制6种农药多残留快速检测芯片试纸条。方法以硝酸纤维素膜为载体,农药抗原为捕获探针,时间分辨荧光微球为标记材料,通过对荧光微球粒径、硝酸纤维素膜、样品垫等反应条件进行优化,制作一种包含6种抗原抗体组合的免疫芯片。结果该免疫芯片可同时检测甲氰菊酯、多菌灵、克百威、吡虫啉、辛硫磷、灭蝇胺6种农药。本方法对6种农药的检测限分别为1、2、0.02、1、10、0.5 mg/kg;假阴性率、假阳性率均为0,准确度较高。结论本研究为农药多残留快速检测分析提供了技术支撑,对保障农产品质量安全具有现实意义。

抗3种β-激动剂双特异性单克隆抗体的建立及鉴定

制备抗克仑特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺双特异性抗体并初步鉴定。将分泌抗克仑特罗、沙丁胺醇抗体的细胞株和分泌抗莱克多巴胺抗体的细胞株分别驯化,使之成为HAT敏感株。将两者融合,筛选分泌双特异性单克隆抗体的杂交-杂交瘤株,然后对其进行初步鉴定。共获得5株杂交-杂交瘤细胞株,将其分泌的双特异性单克隆抗体(BsAb)经过酶联免疫吸附法(ELISA)初步检测,IC50可达1 ng/mL,腹水效价为105以上,用ELISA法证明BsAb只与克仑特罗、沙丁胺醇和莱克多巴胺有特异性反应。该方法制备简单、风险低、灵敏度高、周期短,具有较好的应用前景。

甲基对硫磷残留酶联免疫检测试剂盒的研制

合成了甲基对硫磷的半抗原,并与载体蛋白偶联合成了人工抗原,然后通过免疫的方法制备了其单克隆抗体。在筛选甲基对硫磷单克隆抗体的基础上,建立酶联免疫检测方法,并研制出检测苹果、玉米、蔬菜中甲基对硫磷残留的试剂盒。该试剂盒的灵敏度为0.5μg/L,对苹果、玉米、蔬菜样品的最低检测限分别可达到10、20、50μg/kg;加标回收率为70.3%～102.4%,变异系数为7.4%～13.0%;对实际样品的检测结果与气相色谱法基本一致。该方法快速、灵敏、可靠,为水果、蔬菜、谷物中甲基对硫磷的残留检测提供了便捷、准确的分析手段。

胶体金免疫层析法快速检测T-2毒素的研究

应用胶体金免疫层析技术,建立了一种快速检测谷物和饲料中T-2毒素的方法。采用柠檬酸三钠还原法制备胶体金颗粒,标记抗T-2毒素单克隆抗体并喷涂于玻璃纤维上,T-2毒素偶联抗原和羊抗鼠二抗分别喷涂于硝酸纤维素膜上,作为检测线和质控线,依次将样品垫、胶体金垫、硝酸纤维素膜和吸水垫组装成试纸条并装入检测卡中。测试结果表明,T-2毒素快速检测试纸条的检测限为0.5mg/L,检测时间为10 min,假阳性率和假阴性率均为0。该法使用简单方便,非常适合现场快速检测谷物和饲料中的T-2毒素。