241例重庆地区急性呼吸道感染患儿肺炎链球菌耐药性分析

目的：了解重庆地区儿童急性呼吸道感染肺炎链球菌（Streptococcus pneumoniae,SP）的耐药情况。方法：采集重庆医科大学附属儿童医院2014年1~3月、9~11月急性呼吸道感染患儿呼吸道标本（痰、支气管肺泡灌洗液）,分离培养,得到SP进行药敏检测。结果：共收集241株SP,红霉素耐药率最高,达97.10%,四环素91.70%、克林霉素89.63%,未检出万古霉素耐药株;利奈唑胺、氯霉素、泰利霉素、左旋氧氟沙星、莫西沙星敏感率较高,达90%以上;青霉素、美洛培南、头孢吡肟的不敏感率分别为47.3%、81.74%、67.22%;主要耐药模式为美洛培南＋红霉素＋克林霉素＋复方新诺明＋四环素（21.16%）;青霉素敏感菌株和青霉素不敏感菌株相比,红霉素、阿莫西林、头孢吡肟、头孢噻肟、美洛培南、复方新诺明、克林霉素不敏感率差异有统计学意义（P〈0.05）。结论：重庆地区红霉素、四环素、克林霉素耐药率较高,不宜用于儿童SP感染的治疗;青霉素和头孢类抗生素不敏感率较高,应慎重用于经验治疗。临床应根据药敏试验结果合理用药,防止耐药菌株流行播散。

C6胶质瘤微环境中大鼠BMSCs恶性转变与NF-κB高表达的相关性

目的探讨大鼠骨髓间充质干细胞(BMSCs)在C6胶质瘤微环境中是否存在NF-κB和STAT3的激活及高表达以及其与BMSCs恶性转变的关系。方法本实验共分4组:实验组(C6与BMSCs间接共培养空白)、空白对照组(BMSCs单独培养)、阴性对照组(大鼠星形胶质细胞与BMSCs间接共培养)、阳性对照组(C6单独培养)。采用流式细胞术鉴定BMSCs;ELISA检测细胞上清液中IL-6水平;RT-QPCR检测细胞中NF-κB P65、STAT3、c-Myc的mRNA的表达;Western blot及免疫荧光法检测细胞中NF-κB P65、STAT3、P-STAT3、c-Myc蛋白表达及定位。结果第三代骨髓间充质干细胞CD29、CD90均呈阳性表达,CD45呈阴性表达;实验组BMSCs与对照组相比细胞形态发生显著改变,核质比增大;实验组细胞上清液IL-6水平高于阴性对照组(P<0.05);实验组NF-κB P65、c-Myc在mRNA及蛋白水平显著高于阴性对照组,且STAT3磷酸化水平显著高于阴性对照组(P<0.05)。结论 BMSCs处在C6胶质瘤微环境中存在NF-κB和STAT3的激活和高表达,且NF-κB的激活及高表达是BMSCs恶性转变的重要因素之一。

骨髓间充质干细胞在C6脑胶质瘤细胞微环境中瘤性转化的生物学分析

目的:探讨骨髓间充质干细胞(bone marrow-derived mesenchymal stem cells,BMSCs)在C6脑胶质瘤细胞微环境中是否发生了生物学特性的改变。方法:全骨髓贴壁筛选法分离培养SD大鼠BMSCs,免疫荧光(immunofluorescence,IF)法检测BMSCs表面标志分子CD90+、CD105+、CD45-;活细胞荧光染料CM-Dil标记BMSCs(CM-Dil+BMSCs),流式细胞术(flow cytometry,FCM)检测标记效率,台盼蓝染色法连续监测BMSCs死亡率;CM-Dil+BMSCs与C6脑胶质瘤细胞直接接触共培养为直接共培养组,BMSCs与C6脑胶质瘤细胞非接触共培养为间接共培养组,阳性对照组为C6脑胶质瘤细胞单独培养,阴性对照组为BMSCs单独培养,培养7 d后,IF法检测各组酸性胶质纤维蛋白(glial fibrillary acidic protein,GFAP)、CD90、CD105表达情况;FCM分选实验组CM-dil+BMSCs和C6脑胶质瘤细胞,实时荧光定量聚合酶链反应(real time quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)检测各组GFAP、PTEN、Bcl-xl、CyclinD1、CD90、CD105基因的表达。结果:①培养至第3代的BMSCs 90%以上表达CD90、CD105且不表达CD45;②IF结果显示直接共培养组、间接共培养组BMSCs细胞表达GFAP水平较阴性对照组BMSCs均增高。③RT-qPCR结果显示直接共培养组、间接共培养组BMSCs细胞GFAP、PTEN、Bcl-xl、CyclinD1基因表达水平较阴性对照组BMSCs明显增高(P<0.05),且直接共培养组与间接共培养组比较无明显差异(P>0.05);同时,直接共培养组、间接共培养组BMSCs的CD90、CD105基因表达水平较阴性对照组BMSCs显著降低(P<0.05)。结论:BMSCs在C6脑胶质瘤细胞微环境中存在潜在瘤性转化的倾向。

复合陶粒防砂技术研究与实践

复合陶粒防砂技术的胶结主体是由胶结主材料、水溶性的辅助材料及外加剂所组成。此材料在水浴环境中胶结固化，产生一定胶结强度及连通孔隙的胶结整体。这种胶结体形成于实体亏空较大的油层中，对松散的流砂起到相对固定作用，进而达到防砂目的。在对高含水期严重出砂油田有了重新认识以后，确定了人造岩层深部封堵、近井地带防砂的工艺思想。该技术对出砂严重，有注水能量补充的生产井具有较好的防砂效果，尤其对注水受益明显、底水大孔道、出砂严重的生产层更为适宜。现场施工８０口井、１１０多井次，累计增产原油 ９．６４万 ｔ，创直接经济效益 ３２００多万元。

Islet-1促C3H10T1/2细胞向心肌样细胞分化过程中的电生理特性

目的:研究Islet-1体外诱导C3H10T1/2细胞分化为心肌样细胞过程中,钠、钙离子通道电流的表达情况。方法:Islet-1慢病毒载体感染C3H10T1/2细胞,观察细胞形态变化。差速贴壁法分离培养新生小鼠心肌细胞,以免疫荧光法进行鉴定。RT-PCR检测相应钠、钙离子通道基因mRNA表达水平。全细胞膜片钳技术检测细胞钠、钙离子通道电流表达情况。结果:实验组细胞形态呈心肌样改变;实验组钠、钙离子通道基因SCN5A(INa离子通道基因)、CACNA1C(IL-Ca离子通道基因)和CACNA1H(IT-Ca离子通道基因)表达量均明显高于空白组和阴性对照组(均P<0.05);膜片钳检测空白组和阴性对照组无内向离子通道电流表达,实验组检测到与心肌细胞相似的钠电流(INa)和T型钙电流(IT-Ca),峰值电流呈现不均一性,总体水平低于小鼠心肌细胞;IL-Ca的离子通道基因虽表达增高,但未测得电流表达。结论:实验组钠、钙离子通道基因表达增高,可产生与心肌细胞相似的钠、钙离子通道电流,说明Islet-1可诱导C3H10T1/2细胞分化为有电生理功能的心肌样细胞。

Islet-1促MSCs心肌特化过程中Nkx2.5启动子区域DNA甲基化水平变化

目的:研究Islet-1诱导C3H10T1/2细胞定向分化为心肌样细胞过程中表达增加的心肌早期发育相关基因Nkx2.5启动子区域DNA甲基化水平的变化情况。方法:高表达Islet-1基因的慢病毒载体转染间充质干细胞C3H10T1/2,免疫荧光检测Islet-1表达情况,在Nkx2.5表达达高峰的时间点,通过甲基化特异性PCR技术检测其启动子区域DNA甲基化水平,比较C3H10组(空白对照组)、阴性对照组(转染慢病毒空载体)和实验组(转染高表达Islet-1基因的慢病毒载体)上述基因启动子区域的DNA甲基化水平。结果:实验组Nkx2.5基因启动子区域DNA甲基化水平低于其他两组(均P<0.05)。结论:高表达Islet-1促C3H10T1/2细胞特异性向心肌细胞方向分化过程中,心肌早期发育相关基因启动子区域DNA甲基化水平降低,促进其表达增加。