非洲猪瘟病毒结构蛋白p54的功能研究进展

非洲猪瘟是由非洲猪瘟病毒引起的一种急性出血性猪传染病,自2018年传入我国以来,使我国生猪养殖业规模急剧减少,并对社会经济造成了巨大影响。由于非洲猪瘟病毒过于复杂,使疫病防治成为难点,目前尚无有效防控疫苗及治疗药物,其中由E183L基因编码的p54蛋白参与病毒组装、诱导细胞凋亡及中和抗体等过程,并且是血清学检测诊断技术与疫苗免疫研究方面的重要靶点之一,此外,p54基因型可作为辅助指标,对追踪病毒演变过程有着重要意义。因此,通过分析p54蛋白在非洲猪瘟病毒感染过程中的作用,为阐明非洲猪瘟病毒致病机制、探索非洲猪瘟疫病防控方法及疫苗研发等方面提供参考。

北京地区猫泛白细胞减少症病毒VP2基因的遗传进化分析

猫泛白细胞减少症病毒(FPV)对猫科动物危害较大,病毒VP2基因在决定其抗原性和宿主范围中起重要作用。为了解FPV的流行状况及其VP2基因遗传变异和进化方向,本研究对北京地区宠物医院疑似感染FPV的猫采样,共采集到16份粪便样品;对FPV VP2基因进行PCR扩增和测序,得到12条长度1755 bp的VP2序列;利用软件将获得的VP2基因序列与国内外报道的流行株进行同源性比对、遗传进化分析,结果显示,12条VP2序列均属于G1基因群,与参考株M38246相比亲缘关系较远。本研究为北京地区猫泛白细胞减少症的有效防控提供理论依据。

基于转录组学研究双酚A对猪睾丸支持细胞炎症和氨基酸代谢通路的影响

旨在研究猪睾丸支持细胞(ST)暴露于环境雌激素双酚A(BPA)不同时间后的基因表达谱变化。本研究将猪ST细胞设为C、B两组,每组设置3个重复,C组为空白对照组,B组细胞暴露于50μmol·L^(-1)浓度的BPA。BPA暴露6、24 h后,收集C6、B6、C24、B24组细胞总RNA样品,构建测序文库,通过双端150 bp测序方法进行高通量转录组测序。对组装数据进行功能注释、差异基因分析以及GO和KEGG富集分析。通过Real-time PCR方法对关键差异基因表达进行验证。BPA暴露24 h后差异基因数量(6928个)较BPA暴露6 h差异基因数量(3940个)明显增加。编码分泌型磷蛋白1的SPP1基因在BPA暴露6 h后表达增加,但在BPA暴露24 h后表达降低。管腔结合蛋白编码基因BIP、泛素B编码基因UBB、泛素C编码基因UBC、鸟氨酸脱羧酶1编码基因ODC1表达量在BPA暴露6和24 h后均显著上调。富集分析结果表明,BPA暴露6 h后,TNF信号通路富集差异倍数最高,p53、IL-17以及MAPK信号通路等也均显著富集,暗示ST细胞表现出明显的促炎反应。在BPA暴露24 h后,氨基酸及糖代谢通路富集差异倍数最高,包括精氨酸和脯氨酸、组氨酸以及糖酵解代谢通路。Real-time PCR验证结果显示,BPA暴露6 h后炎性反应通路相关的PTGS2等以及BPA暴露24 h后氨基酸代谢通路相关ARG1等差异基因表达显著上调。综上可知,BPA对猪睾丸支持细胞的损伤机制呈现明显的时间效应,ST细胞在BPA暴露初期表现出以TNF等信号通路激活为特征的炎性反应,在BPA暴露后期氨基酸及糖代谢显著激活。

肠球菌产enterocin基因的检测

肠球菌属（Enterococci）是乳酸菌中对营养要求不高、兼性厌氧、容易培养、分布广泛的一类革兰阳性球菌。肠球菌广泛应用于乳制品加工、蔬菜及肉制品的发酵工艺中。肠球菌在生长繁殖过程中除产生乳酸、乙酸等有机酸外,还能产生多种具有抑菌或杀菌活性的细菌素在抑制多种动物源病原微生物和食物病原菌、腐败菌等方面具有重要作用。

211菌生长特性的研究

211菌在含糖培养基中能够产生大量乳酸。经 45℃、2 2 0r/min振荡培养 44小时 ,芽孢形成 90 %以上。该菌的芽孢能够耐受 10 0℃ 5 0分钟煮沸 ,能抵抗 8%的氯化钠、6 0 %的猪胆汁 ,在pH值 6 .0～ 7.5的范围内生长良好。该菌对头孢唑啉、四环素、氯霉素等 11种抗菌素敏感 ,故临床应避免与这些抗菌素同时应用。

猪源降胆固醇肠球菌的分离鉴定

为了筛选益生菌并评价其对血清胆固醇的降解作用，从健康猪胃肠道分离鉴定12株肠球菌，进行体外降胆固醇，对酸和胆盐的耐受性试验，结果表明：分离菌均具有体外降解血清胆固醇的作用，降解率为16．67～48．00％，对pH3．0和0．4％的胆盐具有抵抗力，综合评价E1和E7可以作为降胆固醇的备选益生菌株。

产enterocin E5细菌素粪肠球菌发酵条件的优化

采用琼脂扩散法测定粪肠球菌发酵上清液对大肠埃希菌K88的抑菌活性,从而确定产enterocin E5细菌素粪肠球菌的发酵条件。结果表明,粪肠球菌E5产细菌素的发酵培养基为MRS培养基,最适温度为37℃,最适起始pH值6.5,最佳接种量2%,种龄14 h,发酵时间16 h,最佳培养基组分氮源为1%胰蛋白胨、0.5%酵母浸粉,最佳碳源为1%葡萄糖、0.5%蔗糖,0.1%Tween-80有利于enterocin E5的产生。这是分离自北京优良商品猪黑六产enterocin E5粪肠球菌的首次报道。

鸡传染性支气管炎病毒变异株DB4的分离鉴定

从东北养鸡场分离到DB4鸡传染性支气管炎病毒毒株,对其进行了动物回归、生物学特性、电镜观察与S1基因的序列分析等研究。结果表明:DB4能够凝集鸡的红细胞,形态为典型的冠状病毒粒子,鸡胚半数感染量为10-6.7EID50,动物回归感染死亡鸡肾脏病变明显,表现肾脏肿大、花斑肾,DB4毒株S1基因由1620个核苷酸组成,推导的多肽由540个氨基酸残基组成,氨基酸切割识别位点序列为HRRRR,序列分析发现:DB4与国内疫苗株YM_W93和标准株M41氨基酸同源性分别为77.2%和77.3%,确定该分离毒株为致肾脏病变的变异型IBV。

细菌素的分子生物学研究进展

细菌素作为细菌合成的蛋白质(多肽)类抑菌物质,其广谱的抗菌活性,有望成为食品添加剂以及抗生素的替代品。主要对细菌素的分类及其作用机制、细菌素的生物合成及其调控,以及细菌素产生菌加以阐述。

猪大肠埃希氏菌多价油乳剂灭活苗的研制

用从北京地区几家规模化猪场腹泻仔猪分离鉴定的大肠埃希氏菌O60 、O14 1、O139、O9和O64 制成多价油乳剂灭活苗 ,以 0 .2mL/只剂量免疫小白鼠 ,分别于免疫后 7、14、30和 6 0d攻毒 ,结果免疫 14d后可获得 10 0 %保护 ;用该多价油乳剂灭活苗分别在母猪产前 40d和 15d肌肉注射 2mL ,对免疫母猪所产仔猪的保护率达 95 .0

锦鲤致病性嗜水气单胞菌分离和药敏试验

从北京某渔场发病锦鲤中分离出 8株细菌。经形态学、生化特性鉴定及凝集试验 ,证明其中 3株为嗜水气单胞菌。通过溶血试验、脱脂奶琼脂平板法、Dot_ELISA法及动物试验 ,显示这 3株菌均能产生溶血毒素和胞外蛋白酶 ,并能致死小鼠。

北京地区猪致病性大肠埃希氏菌的分离鉴定

肠道病原性大肠埃希氏菌（Ｅｓｃｈｅｒｉｃｈｉａｃｏｌｉ）是仔猪腹泻的重要病原，对该菌菌体抗原的鉴定，国内亦有报道。由于Ｅ．ｃｏｌｉ血清型多，变异性大，抗原复杂，给猪大肠杆菌病的预防带来很大困难。为了摸清猪Ｅ．ｃｏｌｉ的血清型，我们选择了５个发病较严重...

绿原酸对小鼠脾脏淋巴细胞体外增殖和分泌功能的影响

为分析绿原酸(CHA)对小鼠脾脏淋巴细胞增殖、分泌功能的影响。无菌操作分离小鼠脾脏,制备脾脏淋巴细胞并用含10%胎牛血清的RPMI 1640培养,在培养液中分别加入诱导剂刀豆蛋白(ConA)和脂多糖(LPS)以及0、40、80、160μg/mL不同浓度的CHA,经过不同时间培养后,采用MTT法检测T和B淋巴细胞的增殖,ELISA和Griess法分别检测淋巴细胞分泌TNF-α和NO的水平。结果表明:低浓度和中浓度CHA提高ConA/LPS诱导的T、B淋巴细胞增殖和存活,而高浓度CHA明显抑制其细胞增殖转化;CHA促进小鼠脾脏T、B淋巴细胞分泌NO;CHA对T淋巴细胞分泌TNF-α影响不大,中浓度CHA可显著促进脾脏B淋巴细胞分泌TNF-α,高浓度反而抑制其分泌;CHA促进环磷酰胺处理的小鼠脾脏T和B淋巴细胞体外增殖,但对其NO分泌量影响不明显。结果提示:CHA可能通过影响淋巴细胞增殖和细胞因子分泌而表现免疫调节作用。

绿原酸对小鼠不同组织巨噬细胞增殖、分泌及吞噬功能的影响

为观察绿原酸(CHA)对小鼠不同组织巨噬细胞功能的影响,采用无菌操作制备小鼠腹腔、骨髓和脾脏巨噬细胞,体外培养在含有脂多糖(LPS)和绿原酸的RPMI1640培养液中,用MTT法检测细胞增殖,ELISA和Griess法分别分析细胞分泌TNF-α和NO的水平,瑞氏-吉姆萨染色法测定巨噬细胞吞噬能力。结果与对照组和LPS组相比,腹腔、脾脏和骨髓3种不同组织巨噬细胞CHA组和LPS联合CHA组A值均有所降低,即3种巨噬细胞增殖转化率均有所下降,3种不同组织巨噬细胞CHA组和CHA+LPS组NO分泌量明显增加,且具有剂量依赖性。较之LPS组,不同组织巨噬细胞CHA组TNF-α分泌量降低,而脾脏和骨髓巨噬细胞LPS联合CHA组分泌TNF-α量显著提高,腹腔巨噬细胞组不显著。CHA显著提高LPS刺激的腹腔巨噬细胞吞噬能力。此外,CHA可显著提高环磷酰胺处理小鼠脾脏和骨髓巨噬细胞存活率,但使脾脏和腹腔巨噬细胞分泌NO量显著减少。结果提示绿原酸对小鼠不同组织巨噬细胞增殖、TNF-α和NO分泌以及吞噬能力均有不同程度影响。