尿激酶型纤溶酶原激活物对毛囊外根鞘细胞增殖的影响

目的 探讨尿激酶型纤溶酶原激活物 (Urokinase typeplasminogenactivator,uPA)对体外培养的毛囊外根鞘 (Outerrootsheath ,ORS)细胞增殖的作用。方法 体外培养了小鼠ORS细胞 ;用MTT法研究了uPA促进因子肝细胞生长因子 (Hepatocytegrowthfactor ,HGF)和uPA抑制因子Amiloride处理后ORS细胞的增殖变化 ;用RT PCR方法研究了ORS细胞的uPAmRNA的表达情况 ,以及HGF和Amiloride处理ORS细胞后uPA的mRNA表达的变化。结果 体外培养的ORS细胞有uPA表达 ;HGF可促进uPAmRNA的表达并促进ORS细胞的增殖 ;Amiloride抑制uPAmRNA表达并抑制ORS细胞增殖。结论 毛囊ORS细胞表达uPA ,HGF促进uPA的表达并促进ORS细胞增殖 ,Amiloride通过抑制uPA的表达和其活性抑制ORS细胞的增殖。

尿激酶型纤溶酶原激活物在毛囊中的表达

目的 探讨尿激酶型纤溶酶原激活物 (urokinase typeplasminogenactivator,uPA)在毛囊发育过程中的原位表达及在体外培养的毛囊细胞中的表达。方法 用免疫细胞化学 (immunocytochemistry ,ICC)和原位杂交 (insituhybridization ,ISH)技术研究了人及小鼠在毛囊生长周期的不同时期uPA的表达 ;体外培养小鼠毛囊外根鞘 (outerrootsheath ,ORS)细胞并用ICC方法研究了ORS细胞uPA的表达。结果 在毛囊生长期的早期 (即毛囊形成期 ) ,毛囊角质形成细胞 (keratinocyte,Kc)表达uPA ,而其它时期均不表达 ;体外培养的ORS有uPA表达。结论 uPA与Kc的快速增殖和迁移相关 ,在毛囊的发育中起重要作用。

小鼠皮肤器官培养模型的建立及存活状况的研究

目的 检测皮肤器官培养模型中细胞的生长及存活状况 ,建立稳定的小鼠皮肤体外培养模型。方法 将小鼠皮肤培养于transwell的内室 ,培养液加至皮肤的表真皮交界处 ,于培养后的 2 ,4,8d取皮片固定、切片后于光镜、共聚焦显微镜及透射式电镜下进行观察。结果 培养 2 ,4d的皮片与未经培养的皮片在形态结构与细胞的存活数量上没有显著差异 ;培养 8d的皮片光镜下的形态结构没有发生明显改变 ,但共聚焦显微镜下 ,细胞存活数量有所下降 ,透射式电镜下细胞的超微结构显示胞质及线粒体肿胀 ,溶酶体增多等退化性改变。结论 体外培养 4d以下的皮肤与在体生长的皮肤在形态结构及细胞生长方面没有显著差异 。

重庆市江水中有机污染物细胞毒性分析

目的了解重庆市主城区嘉陵江和长江水中有机物污染状况,评价水中有机污染物对人群健康的影响。方法固相萃取法萃取水中有机污染物,将萃取的有机污染物溶于二甲基亚砜(DMSO)中,对H4IIE细胞进行染毒,用四甲基偶氮噻唑蓝(MTT)检测水中有机污染物对H4IIE细胞增殖的抑制作用,并用荧光比色法检测水中有机污染物对H4IIE细胞7-乙氧基-3-异吩嗯唑酮.脱乙基酶(EROD)的诱导作用。结果各水样处理H4IIE细胞后,H4IIE细胞的增殖随染毒时间和剂量的增加而呈下降趋势。48和72h处理组200和250倍浓缩的水样对细胞增殖有显著抑制作用(P<0.05,与溶剂对照组比较);2,3,7,8-四氯二苯并-对-二恶英(TCDD)对EROD诱导的半数有效剂量(EC50)值为4.4pg/ml,各水样相对于2,3,7,8-TCDD的毒性当量值分别为(2004.08)大溪沟:2.2×10-4pg/L;(2004.08)寸滩:0.9×10-4pg/L;(2005.01)大溪沟:13.3×10-4pg/L;(2005.01)寸滩:3.7×10-4pg/L。结论污染物对H4IIE细胞的毒性呈现出时间和剂量依赖性;各水样均可诱导H4IIE细胞EROD活性;同一采样点中,枯水期水样毒性大于丰水期水样。

某市嘉陵江水中提取物对大鼠肝细胞AHR信号途径的诱导

目的研究某市主城区嘉陵江水中有机污染物对大鼠肝细胞细胞色素P450 1A1(cytochrome P450 1A1,CYP1A1)基因表达和7-乙氧基-3-异吩嗯唑酮.脱乙基酶(7-ethoxyresorufin-O-deethylase,EROD)活力的诱导,比较不同剂量的有机提取物诱导大鼠肝细胞CYP1A1基因表达量和EROD酶活力的变化。方法将大鼠分为2、12和72 L/(kg体重)3个染毒组及1个玉米油溶剂对照组和1个空白对照组,每组20只动物,雌雄各半,灌胃染毒13周。染毒结束,提取大鼠肝细胞总RNA进行CYP1A1基因的RT-PCR扩增,将肝组织匀浆后测定其EROD酶活力。结果各染毒剂量组CYP1A1基因均有表达,空白对照和溶剂对照组CYP1A1基因不表达;中剂量组与高剂量组CYP1A1的相对表达量与低计量组相比,增加非常显著(P<0.01),各染毒组大鼠肝组织均可检出EROD酶活力,EROD酶活力随染毒剂量的增加而增加。结论嘉陵江水中有机污染物可诱导大鼠肝细胞芳烃受体(aryl hydrocarbon receptor,AHR)途径。

重庆市主城区长江和嘉陵江水中有机污染物对H4IIE细胞CYP1A1表达的诱导

目的以重庆市主城区大溪沟(嘉陵江)和寸滩(长江)两个点为代表,研究2004～2005年度重庆市水源水中有机污染物对H4IIE细胞细胞色素P4501A1(CYP1A1)表达的诱导。方法固相萃取法萃取水中有机污染物,将萃取的有机污染物溶于二甲基亚砜(DMSO)中,对H4IIE细胞进行染毒,用逆转录-聚合酶链式反应(RT-PCR)扩增CYP1A1mRNA,比较不同水样诱导H4IIE细胞CYP1A1mRNA表达的差异,用电泳迁移率实验(EMSA)检测CYP1A1启动子的激活情况。结果CYP1A1引物则可以将4个水样12h和24h处理组细胞的cDNA扩增出条带,48h处理组只有2005年1月寸滩样和2005年1月大溪沟样处理的细胞能扩增出CYP1A1基因的条带,所有样品的72h处理组细胞都没有CYP1A1基因的扩增;4个水样处理H4IIE细胞24h后,均可在细胞核内形成可与标记的XRE探针结合的芳烃受体-芳烃受体核转移蛋白(AHR-ARNT)二聚体,从而在AHR-ARNT二聚体蛋白处呈现发光条带。结论各水样均可激活CYP1A1基因的启动子XRE,也均可诱导H4IIE细胞CYP1A1mRNA的表达,CYP1A1mRNA的表达量随处理时间的差异有所不同。

重庆市主城区长江和嘉陵江水中有机污染物对斑马鱼胚胎仔鱼的毒性研究

目的 以重庆市主城区大溪沟（嘉陵江）和寸滩（长江）两个点为代表，研究2004～2005年度重庆市水源水中有机污染物的组成和对斑马鱼胚胎仔鱼的毒性。方法 固相萃取法萃取水中有机污染物，GC／MS检测有机污染物的种类；将萃取的有机污染物溶于DMSO中，并用斑马鱼胚胎仔鱼实验研究水中有机污染物对斑马鱼胚胎孵化率和仔鱼畸形率的影响。结果 四个水样中均可检出有机污染物，污染物的种类以酞酸酯类和多环芳烃类为主；污染物可导致斑马鱼胚胎孵化率降低及仔鱼畸形率增加，其毒性呈现出时间和剂量依赖性；同一采样点中，枯水期水样毒性大于丰水期水样。结论 重庆市主城区嘉陵江和长江水中有机污染物对斑马鱼具有降低胚胎孵化率及增加仔鱼畸形率的毒性作用。

以实验为中心的毒理学教学方法探索

通过针对毒理学实验性强这一特点,展开了以实验为中心的毒理学教学新方法的探索。在教学过程中以自主性实验为先导,首先进行实验课的操作,实验课后要求学生对实验进行总结和思考。理论课是由感性认识到理性认识的升华,教师根据实验引导出讲授章节的概念、理论等内容。整个教学活动以学生为主体,充分调动学生的主动性和积极性,同时对教师把握课堂教学的能力也有新的要求。

尿激酶型纤溶酶原激活物的表达与毛囊细胞增殖关系的研究

为了研究毛囊外根鞘(outer root sheath,ORS)细胞尿激酶型纤溶酶原激活物(urokinase plasmino-gen activator,uPA)的表达与其细胞周期的关系,并探讨uPA对毛囊生长的调控作用,本文应用流式细胞仪对不同代龄的ORS细胞的细胞周期进行了 检测,并用免疫细胞化学和RT-PCR手段对相应代龄ORS细胞的uPA mRNA及蛋白质的表达进行了检测。结果显示,原代ORS细胞增殖旺盛,而3代ORS细胞增殖水平显著下降,增殖旺盛的ORS细胞uPA mRNA及蛋白表达较强,而增殖缓慢的ORS细胞uPA mRNA及蛋白的表达明显下降或不表达。说明ORS细胞的增殖水平与其uPA mRNA及蛋白的表达密切相关,uPA在毛囊生长早期的表达可以促进毛囊细胞增殖,利于毛囊发育。

重庆市男性PAHs和PAEs暴露与男性精液质量的相关性分析

多环芳烃(polycyclic aromatic hydrocarbons,PAHs)和邻苯二甲酸酯(phthalate esters,PAEs)是三峡库区水中主要有机污染物。为探讨这2类化学物对三峡库区男性精液质量的影响,课题组于2007年在三峡库区6个区县进行了男性生殖健康的流行病学调查。调查中共收集到有效样本1 346例,对所有样本进行了精液常规检测,选取了冬季采样的232例标本进行了尿液中4种PAHs代谢产物和5种PAEs代谢产物含量的检测,并对这些样本的精子细胞凋亡(Annexin V/PI双标法)和精子脱氧核醣核酸(DNA)损伤(彗星电泳法)进行了检测。运用Spearman等级相关,多元线性回归和logisitic回归分析等方法分析了PAHs和PAEs代谢产物与精液常规指标、精子细胞凋亡、精子DNA损伤的相关关系。结果显示,1 346名三峡库区健康男性精液常规5项指标全部达到世界卫生组织(WHO)标准的比率仅为38.9%。PAHs代谢产物的含量与男性精液常规指标间未发现相关关系,但某些PAHs代谢产物水平与精子凋亡参数及精子DNA损伤指标有一定的关联性,随着尿中PAHs代谢产物浓度的增加,正常未发生凋亡的精子减少,精子DNA的损伤增加。未发现PAEs代谢产物与精液各项参数间的相关关系。本研究结果表明,在重庆市健康育龄男性中PAHs与PAEs的暴露与精液常规指标间没有明确的相关关系,但PAHs暴露与精子DNA损伤显著相关。为明确PAHs的暴露对精子DNA的损伤作用,有必要进行较大规模的队列研究以进行验证。

从学生需求出发开展暑期实践项目——克利夫兰医学中心暑期实习生项目的经验

美国的医学教育十分注重实践培训[1]。美国医学院入学竞争非常激烈,目前全美共有医学院校120多所,年招生总规模控制在16 000名左右。医学院的报考者必须已经完成普通高等教育的4年本科学习,经过严格考试（Medical College Admission Test,MCAT）并有很好的推荐信等背景资料才可能被高水平医学院录取[2]。

医学院校研究生细胞培养课的组织与实施

医学院校研究生在课题研究阶段普遍要用到细胞培养技术,所以在基础学习阶段有必要针对性地开展细胞培养实验课.通过七年来的探索,建立了一套行之有效的培训方法,经过此课程的学习,学员基本掌握了细胞培养的基础知识和基本操作,为今后的研究打下良好基础.

坦克行驶训练时舱室内主要有害因素的测量与分析

目的了解我军某型坦克训练时舱室内的主要有害因素的特点和规律。方法选择3辆某型坦克在沙土起伏的路面上以20 km/h的速度行进60 min。实时监测坦克行驶过程中主要气体的浓度,如氧气(O2)、硫化氢(H2S)、一氧化碳(CO)、氰化氢(HCN)、氯气(Cl2)、二氧化碳(CO2)、二氧化硫(SO2)、氨气(NH3)、二氧化氮(NO2)、可燃性气体(以CH4表示)以及总挥发性有机化合物(TVOC);采集坦克行驶0、20、40、60 min 4个时间点时舱室内的空气样本,采用GC/MS对空气样本中挥发性有机气体进行定性和定量分析;实时监测坦克内粉尘浓度、噪声强度,检测不同状态下坦克舱室内的电磁辐射强度。结果坦克行驶时舱室内被检出CO2、NH3、NO2和TVOC,且其浓度随着坦克行驶时间的延长而显著增加(P<0.05,P<0.01)。坦克行驶过程中4个时间点检测出的挥发性有机气体分别有122、122、155、154种,同时检出的气体有66种,主要为烷烃类及苯系物,其中苯系物的浓度随着坦克行驶时间的延长而增加(P<0.05,P<0.01)。坦克行驶60 min时的甲苯浓度[(23.6±4.3)μg/m3]显著高于0 min[(11.1±2.0)μg/m3]的甲苯浓度(P<0.01);坦克行驶40[(28.1±14.3)μg/m3]、60 min[(31.7±2.1)μg/m3]时的乙苯浓度显著高0 min[(12.2±0.5)μg/m3]时的乙苯浓度(P<0.05)。粉尘的浓度随着训练时间的延长而增加,最高浓度达到194.28 mg/m3;坦克行驶20[(105.4±4.8)dB]、40[(104.9±5.6)dB]、60 min[(105.4±5.2)dB]的等效A声级噪声强度均显著高于原地发动未行驶时[(91.4±7.1)dB]的等效A声级噪声强度(P<0.05)。坦克内部各状态电磁辐射强度均较低,其中当通信设备和发动机全部打开时电磁辐射强度最大。结论我军某型主战坦克在行驶条件下舱室内存在着多种职业有害因素,其中有害气体、噪声及粉尘的污染较为严重,且主要有害气体及总粉尘的浓度随着坦克行驶时间的延长而增加,其联合作用可能影响坦克乘员的作业效能及身体健康。

坦克射击时舱室内有害气体对乘员生理及神经行为能力的影响

目的了解我军某型坦克实弹射击时舱室内主要空气污染物的污染特点及对乘员生理和神经行为的影响。方法 Draeger X-am系列便携式气体检测仪实时监测坦克在匀速行进射击状态时舱室内产生气体的种类和浓度,主要包括:氧气(O2),硫化氢(H2S)、一氧化碳(CO)、氰化氢(HCN)、氯气(Cl2)、二氧化碳(CO2)、二氧化硫(SO2)、氨气(NH3)、二氧化氮(NO2)和总挥发性有机化合物(TVOC);SUMMA罐采集射击不同数量炮弹时舱室内的有机气体,并进行GC/MS定性和定量测试;分别在实弹射击前后测定47名坦克乘员的体温、血压、心率、血氧饱和度以及握力;并选择其中24名坦克乘员,运用B.NES系统对其在射击前后的神经行为能力进行测试。结果实弹射击状态下坦克舱室内检测到6种有害无机气体(CO、CO2、HCN、SO2、NH3、NO2),其中CO最高浓度为(497.50±68.78)cm3/m3,显著高于发射前(P<0.01)。射击过程中共检出挥发性有机气体278种,其中苯系物的污染较严重。与射击前相比,乘员射击后心率显著增加(P<0.01),血氧饱和度显著降低(P<0.05),握力显著增加(P<0.01)。射击后操作乘员的神经行为能力降低,其中系列加减、记忆扫描、听数字广度、听简单反应时和目标追踪能力指数与射击前比较显著降低(P<0.05)。结论我军某新型主战坦克实弹射击时能够产生多种有害气体,部分有害物浓度较高,其联合作用能在一定程度上影响坦克乘员的生理和神经行为能力。

吸烟对重庆主城区成年男性精子凋亡及精液质量的影响

目的:探讨吸烟对重庆市主城区健康成年男性精子凋亡和精液质量的影响。方法:235例健康成年男性根据吸烟习惯分为吸烟组和不吸烟组。不吸烟组89例,吸烟组146例。采用计算机辅助精液分析系统检测精液常规参数;流式细胞术结合Annexin V-FITC/PI荧光染色检测精子凋亡(AN-/PI-、AN+/PI-、AN+/PI+、AN-/PI+精子比率),并对吸烟组和不吸烟组的各项参数进行比较研究。结果:与不吸烟组比较,吸烟组的早期凋亡精子(AN+/PI-)率高于不吸烟组[(8.1±5.1)%vs(6.8±3.8)%,P=0.039],而晚期凋亡精子(AN+/PI+)率两组间差异无显著性[(5.6±5.2)%vs(5.5±5.1)%,P=0.87];两组间精液量、精子密度、精子活动率、活力和正常形态精子率等精液常规指标的差异均无显著性(P=0.30;0.82;0.37;0.81;0.84)。结论:吸烟者早期精子凋亡率较不吸烟者高,提示吸烟可能诱导精子出现早期的细胞损害。精子凋亡可作为较精液常规指标更为敏感的生物标志物反映吸烟对男性精子造成的损伤。

坦克舱室有害因素对乘员神经行为能力的影响

目的探讨坦克舱室有害因素对乘员神经行为的影响。方法采用汉化第3版计算机化神经行为评价系统(NES-C3)对某坦克部队109名坦克乘员(观察组)及112名该部队不接触坦克作业环境的后勤保障分队战士(对照组)的神经行为能力进行测试。结果观察组系列加减能力指数显著低于对照组(P<0.05),视简单反应时耗时最小值、听简单反应时平均值均显著高于对照组(P<0.01),数字筛选正确数显著低于对照组(P<0.05)。除曲线吻合外,其他4项能力指数均有不同程度下降,其中听简单反应时、目标追踪、数字筛选2组比较差异有统计学意义(P<0.05,P<0.01)。结论坦克舱室有害因素长期暴露影响乘员的神经行为功能,降低坦克乘员的智力、学习与记忆能力、感知、心理运动能力。

坦克舱室有害因素对乘员血清脂质过氧化物和抗氧化酶活性的影响

目的探讨坦克舱室有害因素长期暴露对乘员血清过氧化脂质水平及抗氧化能力的影响。方法选取169名职业性坦克乘员为观察组,并以1∶1配对在同一部队选取基本情况相似的169名不接触任何毒物的健康战士作为对照组。以化学比色法测定2组人员血清脂质过氧化产物丙二醛(MDA)含量及超氧化物歧化酶(SOD)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)、过氧化氢酶(CAT)、髓过氧化物酶(MPO)的活性。结果观察组血清SOD、GSH-Px活性显著低于对照组(P<0.05,P<0.01),MPO活性显著高于对照组(P<0.01)。与同年龄段的对照组相比,>20～25岁年龄段组MDA含量及MPO活性显著升高(P<0.05,P<0.01),SOD、GSH-Px活性显著降低(P<0.05)。与同军龄段的对照组相比,观察组≤2年军龄段组SOD活性显著降低(P<0.05),MPO活性显著升高(P<0.01);观察组>2～5年军龄段组MDA含量和MPO活性显著升高(P<0.01)。与对照组相比,观察组不同坦克作业岗位中炮长血清MPO活性显著升高(P<0.01),驾驶员血清SOD及GSH-Px活性显著降低(P<0.05,P<0.01),MPO活性显著升高(P<0.01)。结论长期暴露于舱室有害因素的坦克乘员受到的氧化损伤加重,同时机体的抗氧化能力降低;不同年龄段、军龄段及作业岗位的坦克乘员中,分别以>20～25岁、>2～5年军龄段及坦克驾驶员受到的氧化损伤最严重。

坦克舱室有害因素对乘员肺功能的影响

目的探讨长期暴露于坦克舱室有害因素对乘员肺功能的影响。方法在某坦克部队选取196名职业性坦克乘员作为坦克乘员组,并在同一部队选取基本情况相似的156名非坦克作业战士作为非坦克乘员组,采用CHEST-GRAPH HI-101型肺功能仪对2组人员进行肺功能检查,检测指标包括用力肺活量(FVC),第1秒用力呼气容积(FEV1),1 s用力呼气容积占用力肺活量比值(FEV1/FVC),最大呼气中期流量(MMF),最高呼气流量(PEF),用力呼出25%、50%、75%肺活量的呼气流量(FEF25、FEF50、FEF75)。结果与非坦克乘员组比较,坦克乘员组肺功能指标FEV1、MMF、FEF50显著降低(P<0.05,P<0.01);坦克乘员组FVC、FEV1和FEF25异常率及肺功能损害发生率显著高于非坦克乘员组(P<0.05,P<0.01)。与非坦克乘员组比较,不同军龄段坦克乘员中>2～5年组FEV1显著降低(P<0.01);>5～8年组FEV1、MMF、FEF50显著降低(P<0.05,P<0.01)。不同坦克作业岗位的乘员中,车长组肺功能指标中的FVC、FEV1显著低于非坦克乘员组(P<0.01);炮长组肺功能指标中的FEV1、MMF、FEF75显著低于非坦克乘员组(P<0.05,P<0.01);驾驶员组肺功能指标中FVC、FEV1显著低于非坦克乘员组(P<0.05,P<0.01)。结论坦克乘员肺功能受到一定程度的影响,其中以>5～8年军龄的车长及炮长损伤最为严重。

坦克乘员噪声接触致听力损伤状况分析

目的探讨长期暴露于坦克舱室噪声作业环境对坦克乘员听力的影响。方法选取某部队208名职业性坦克乘员作为观察组,并在同一部队选取80名不接触坦克噪声环境的健康战士作为对照组。采用TES 1352H型声级计检测工作环境噪声强度,并对2组人员进行纯音测听检查。结果观察组作业环境等效A声级噪声强度为(102.2±0.2)dB,显著高于对照组(57.0±0.1)dB(P<0.01);对照组与观察组中观察对象分别占31.2%和41.3%,听力损伤的发生率很低(低于1%),且2组之间无统计学差异(P>0.05);观察组在高频段4 kHz及6 kHz听阈位移显著高于对照组(P<0.05,P<0.01);观察组不同军龄段中,>5～8年军龄乘员在高频段4 kHz及6 kHz听阈位移最大,且显著高于对照组(P<0.01);观察组不同坦克作业岗位中,车长在高频段4 kHz及6 kHz听阈位移最大,且显著高于对照组(P<0.01)。结论坦克作业乘员听力受到一定程度的影响,尤其在高频段4 kHz及6 kHz的听力损伤最严重。