WIF-1基因启动子区甲基化在胃癌组织中的检测

目的检测胃癌组织及正常胃黏膜组织中WIF-1基因启动子区甲基化情况，并结合临床病理资料，探讨WIF-1基因甲基化状态与胃癌发生、发展的相关性。方法应用甲基化特异性聚合酶链反应（methylation—specinc PCR，MSP）检测30例胃癌组织、30例癌旁组织及10例正常胃黏膜组织中WIF-1基因启动子区甲基化情况。结果胃癌组织、癌旁组织及正常对照组WIF-1基因启动子甲基化阳性率分别为76．6％（23／30）、13．3％（4／30）和0．0％（0／10），胃癌组织甲基化率明显高于后两组，差异有统计学意义（均P〈0．05）。胃癌组织中不同年龄、性别、分化程度的WIF-1基因甲基化阳性率差异均无统计学意义；有淋巴结转移组甲基化率（90％）高于无淋巴结转移组甲基化率（50％），差异有统计学意义（P〈0．05）；而Ⅲ～Ⅳ期和Ⅰ～Ⅱ期胃癌组织中WIF-1基因甲基化阳性率分别为90．5％与44．4％，差异有统计学意义（P〈0．05）。结论WIF-1基因启动子区发生高甲基化导致其表达下调或缺失与胃癌的发生、发展以及临床病理特征有着密切的关系，通过MSP法检测胃癌组织及正常组织的甲基化率，为胃癌的早期诊断及综合治疗寻找新的靶点。

阻塞性睡眠呼吸暂停低通气综合征患者呼出气冷凝液中TNF-α、IL-6的研究

目的探讨OSAHS与呼出气冷凝液中肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-6(IL-6)的关系。方法收集25例OSAHS患者(观察组)和10例健康对照者(健康对照组)晨起即可和睡前的EBC,用酶联免疫吸附法检测EBC中TNF-α及IL-6的水平,并进行统计学分析。结果 (1)睡前及晨起TNF-α水平OSAHS组分别高于健康对照组,差异有统计学意义(P<0.05);睡前IL-6水平OSAHS组与健康对照组比较差异无统计学意义(P>0.05),晨起IL-6水平OSAHS组与健康对照组比较差异有统计学意义(P<0.05)。(2)晨起TNF-α水平OSAHS组较睡前增高(P<0.05),而健康对照组晨起TNF-α水平与睡前比较差异无统计学意义(P>0.05);晨起IL-6水平OSAHS组较睡前增高(P<0.05),健康对照组晨起IL-6水平与睡前比较差异无统计学意义(P>0.05)。结论 EBC中TNF-α、IL-6水平可作为监测OSAHS患者气道炎症反应的一项重要指标。

Tim-1及Tim-3mRNA在胃癌患者外周血单个核细胞中的表达及临床意义

目的研究T细胞免疫球蛋白黏蛋白1（Tim-1）及T细胞免疫球蛋白黏蛋白3（Tim-3）mRNA在胃癌患者体内的表达与其临床意义。方法采用RT—PCR法分别检测22例胃癌患者及8例正常人外周血单个核细胞中Tim-1及Tim-3mRNA的表达情况，并分析它们与临床各病理参数之间的关系。结果Tim-1mRNA在胃癌中的表达高于正常对照组[（11．38±1．85）比（9．64±1．53）]，差异有统计学意义（P〈0．05），且与肿瘤浸润深度、分化程度，淋巴结转移、临床分期有关（P〈0．05），Tim～3mRNA在胃癌中的表达高于正常对照组[（11．74±1．71）比（9．81±1．69）]，差异有统计学意义（P〈0．05），但Tim-3mRNA在胃癌中的表达与各病理参数无关（P〉0．05）。结论Tim-1及Tim-3mRNA在胃癌患者中的表达均高于正常对照组，Tim-1mRNA在胃癌患者中的表达还与肿瘤的侵袭转移密切相关，Tim-1及Tim-3有可能成为胃癌基因治疗的新靶点。

胃癌组织中Notch1和DLL4蛋白的表达及其临床意义

目的探讨Notch1及其配体DLIA在胃癌中的表达及其与各临床病理特征之间的关系。方法采用免疫组化SP法检测45例胃癌及25例正常胃组织中Notch1和DLIA的表达情况，并分析它们与各临床病理参数的关系。结果Notch1和DLIA蛋白在胃癌中表达的阳性率均明显高于正常胃黏膜组织，差异具有统计学意义（P〈0．01）；Notch1蛋白在胃癌中表达与肿瘤浸润深度（P〈0．01）、淋巴结转移（P〈0．05）以及远处转移（P〈0．05）有关，DLIA蛋白在胃癌中表达与肿瘤浸润深度（P〈0．01）、淋巴结转移（P〈0．05）以及临床分期有关（P〈0．05）；Notch1和DLIA蛋白的表达呈正相关（r=0．355，P〈0．05）。结论Notch1和DLIA蛋白在胃癌组织中的表达上调与肿瘤侵袭转移密切相关，可能在胃癌的发生、发展中起重要作用。

Notch1/DLL4信号通路与VEGF在胃癌浸润和转移中的作用及其相关性

目的探讨Notch1和其配体DLL4蛋白在胃癌组织中的表达及其与肿瘤血管转移之间的关系。方法采用免疫组织化学SP法检测45例胃癌及25例癌旁正常组织中Notch1,DLL4,VEGF的表达情况,并分析它们与各临床病理参数的关系。结果Notch1,DLL4,VEGF蛋白在胃癌中表达的阳性率均明显高于正常胃黏膜组织,差异均有统计学意义(P<0.01)。Notch1蛋白在胃癌中表达与肿瘤浸润深度、淋巴结转移(P<0.01)及远处转移(P<0.05)有关;DLL4蛋白在胃癌中表达与肿瘤浸润深度(P<0.01),淋巴结转移及临床分期(P<0.05)有关;VEGF蛋白在胃癌中表达与浸润深度(P<0.01)、淋巴结转移、远处转移及TNM分期(P<0.05)有关,上述各因素分组间差异有统计学意义。Notch1,DLL4,VEGF蛋白的表达三者两两间均呈正相关关系(rs=0.355,rs=0.367,rs=0.334;均P<0.05)。结论Notch1/DLL4受体通路在胃癌组织中的表达上调与血管内皮生长因子有关,它们可能共同调控肿瘤新生血管形成,参与胃癌的侵袭和转移。

成人肠重复畸形致肠套叠一例

患者男性，41岁，因“下腹隐痛2年，突发剧烈绞痛1d”于2014年4月21日入院。查体：下腹深压痛，其余无异常。实验室检查：粪便常规潜血试验阳性，肿瘤标记物阴性。外院腹部CT提示：下腹部可见明显扩张U形肠袢，见图1。腹腔内肠系膜脂肪及血管呈“旋涡状”改变。内见肠管样组织及肠系膜血管套入肠腔．见图2。入院后给予解痉及营养支持治疗，患者症状缓解后，行全消化道钡餐：局部肠腔扩张，管壁毛糙，黏膜紊乱，显示欠佳，远端肠管稍狭窄，钡剂通过尚顺利，未见明显梗阻。为明确腹痛原因，行腹腔镜检查术。

Survivin—Fk质粒的构建及诱导树突状细胞疫苗抗胃癌研究

目的 观察Survivin-FK（Sur-Fk）基因治疗小鼠胃癌的效果.方法 将FK-cDNA插入pcDNA3.1质粒的多克隆位点,用Survivin基因启动子替代pcDNA3.1质粒的巨细胞病毒（CMV）启动子,构建成Survivin-Fk重组质粒.用脂质体法将Sur-Fk基因转染到胃癌细胞SGC-7901;用逆转录-聚合酶链反应（RT-PCR）和Westem blot检测转染的效果,并进行转基因瘤细胞的成瘤性实验,实验分4组,每组20只小鼠,小鼠生存时间分为小于40、70、100 d 3个阶段,观察肿瘤的生长情况及小鼠的生存时间并测量肿瘤大小;并且切取肿瘤组织,经过处理后,用流式细胞仪分析肿瘤中树突状细胞（DC）细胞表面MHC-Ⅰ/Ⅱ表达.结果 构建得到的重组质粒Sur-Fk质粒,用ApaI和EcoRI酶切鉴定,琼脂糖电泳鉴定,得到相应的特异片段,提示Sur-Fk质粒重组质粒构建成功;转基因瘤细胞的成瘤实验中,SGC-7901-SUR-FK组的肿瘤大小为（0.30±0.13）cm3,小鼠的生存时间40、70、100 d的分别存活2、3、15只小鼠,在肿瘤大小和小鼠的生存时间方面,SGC-7901-SUR-FK组与SGC-7901组和SGC-7901-FK组之间差异有统计学意义;SGC-7901-SUR-FK组肿瘤周围DC上MHC-Ⅰ/Ⅱ类分子的平均表达率分别上调93.6%和91.4%,与SGC-7901组和SGC-7901-FK组及空白组表达率比较差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 Survivin启动子可启动下游FK基因特异性表达于SGC-7901肿瘤细胞,从而对DC有强烈的趋化作用,引起肿瘤周围DC的MHC-Ⅰ/Ⅱ类分子的表达上调,显著提高基因治疗胃癌效果.

下调微小RNA-1表达对人肝癌血管内皮细胞生物学行为的影响

目的 通过构建慢病毒介导的微小RNA（miRNA）-1-小干扰RAN （siRNA）,观察下调miR-1表达对人肝癌血管内皮细胞（TEC）生物学行为的影响.方法 针对目标序列合成特异性siRNA干扰片段并克隆入慢病毒载体,将重组miRNA-1-siRNA-GV159转染TEC,实验分为3组：（1）下调组（miRNA-1-siRNA,MD组）;（2）阴性对照组（NC组）;（3）空白对照组（CON组）.分别用噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞的凋亡及细胞周期,划痕实验检测细胞的迁移能力.结果 MTT结果显示MD组细胞在转染miRNA-1-siRNA-GV159后的第1、2、3、4、5天5个时间点均表现出吸光度值降低,与NC组及CON组比较差异有统计学意义（P＜0.05）;流式细胞仪检测凋亡结果显示CON、NC、MD组凋亡率分别为（2.03±0.30）％、（2.18±0.15）％、（6.32±0.33）％,MD组细胞凋亡率比其他两组明显明显增加,差异有统计学意义（P＜0.05）;而细胞周期检测结果显示3组之间差异无统计学意义（P＞0.05）;划痕实验结果显示划痕12h后CON、NC、MD3组细胞的迁移距离分别为（270.6 ±44.5）、（299.5 ±28.7）、（198.4 ±49.6）μm,MD组和其他两组比较迁移能力明显下降,差异有统计学意义（P＜0.05）.结论 下调miRNA-1表达可抑制TEC的增殖能力,增加TEC的凋亡并降低其迁移能力.

上调微小RNA-1224-5p表达对人肝癌血管内皮细胞生物学行为的影响

目的 观察微小RNA-1224-5p（miR-1224-5p）对人肝癌血管内皮细胞（TEC）生物学行为的影响.方法 将合成的miR-1224-5p模拟物（mimic）通过脂质体2000转入TEC细胞中.实验分为3组：（1）上调组（miR-1224-5p mimic,MU组）;（2）阴性对照组（NC组）;（3）空白对照组（CON组）.转染后通过实时定量反转录聚合酶链反应（RT-qPCR）法检测3组细胞中miR-1224-5p的表达量来验证转染是否成功.分别用噻唑蓝（MTT）法检测细胞增殖,流式细胞仪检测细胞的凋亡及细胞周期,Ttranswell迁移和侵袭实验检测3组细胞迁移侵袭能力的变化、血管形成实验检测3组TEC细胞的血管形成能力.结果 RT-qPCR检测结果显示MU组中miR-1224-5p的表达量（2-△△Ct=3.27±0.15）显著高于NC组（2-△△Ct=1.08±0.11）和CON组（2-△△Ct=1.00）,差异有统计学意义（P＜0.01）.MTT结果显示MU组细胞在转染miRNA-1224-5p mimic后的第24、48、72、96小时4个时间点均表现出吸光度值降低,与NC组及CON组比较差异有统计学意义（P＜0.01）.流式细胞仪检测凋亡结果显示CON、NC、MU组凋亡率分别为（8.73±0.64）％、（9.51±0.56）％、（19.29±0.95）％,MU组细胞凋亡率比其他两组明显增加,差异有统计学意义（P＜0.01）.而细胞周期检测结果显示CON、NC、MU组3组细胞中G1期细胞比例分别为（50.7±1.3）％、（51.7±1.9）％、（73.3±2.0）％;S期细胞的比例为（31.4±2.7）％、（29.1±1.6）％、（23.0±3.0）％;MU组细胞中G1期细胞比其他两组显著增加,S期细胞比其他两组显著减少,差异有统计学意义（P＜0.01或P＜0.05）.Transwell细胞迁移实验结果显示CON、NC、MU 3组细胞中从Ttranswell上室迁移到下室的细胞数分别为（77.7±2.5）、（79.2±3.5）、（51.0±3.6）个,与CON组和NC组比较,MU组迁移的细胞数明显下降,差异有统计学意义（P＜0.01）.Transwell细胞侵袭实验结果显示CON、NC、MU 3组细胞中穿透Matrigel胶形成的基底膜从Ttranswell上室移动到下室的细胞数分别为（15.8±0.8）、（15.4±0.9）、（9.8±1.3）个,与CON组和NC组比较,MU组穿透基底膜的细胞数明显下降,差异有统计学意义（P＜0.01）.血管形成实验结果显示CON组和NC组的TEC细胞,其成管能力不受任何影响,能很好的形成血管网,而MU组的TEC细胞再也不能形成血管样结构.结论 上调miR-1224-5p的表达可抑制TEC的增殖能力,促进TEC的凋亡并降低其迁移、侵袭及血管形成能力.