双歧杆菌表达载体及启动子的筛选验证

双歧杆菌作为食品级益生菌,其基因工程具有广阔的应用前景和商业价值,但是双歧杆菌的遗传操作系统还不完备,尚处于探索阶段.利用两种载体pLC-nick和pLH01,六种启动子para、pnis、pPRPL、pgap、phup和pHU,采用红色荧光蛋白(red fluorescent protein,RFP)作为报告基因,共构建了12个表达质粒.将重组质粒电转至双歧杆菌中,对于诱导型启动子para加入0.2%(质量分数)L-阿拉伯糖,启动子pnis加入10 mmol/L乳链菌肽诱导RFP蛋白表达,启动子pPRPL则在42℃诱导8 h后表达RFP蛋白.通过检测RFP蛋白的荧光强度,证明在双歧杆菌中利用pLH01载体,phup和pPRPL启动子更有利于RFP蛋白的高效表达.本研究为后续重组双歧杆菌的构建及应用奠定了基础.