华支睾吸虫重组蛋白应用于ABC-ELISA检测特异性循环抗体的研究

目的评价重组蛋白在华支睾吸虫病诊断上的价值,探索以重组蛋白替代天然抗原用于ELISA等血清学方法诊断华支睾吸虫感染的可能性。方法分别使用重组华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶(CysB)与华支睾吸虫成虫可溶性抗原(CAA),以ABC-ELISA检测华支睾吸虫病、其它寄生虫感染及健康人血清特异性IgG,比较两种抗原用于检测的敏感性与特异性。结果共检测了112份华支睾吸虫感染血清,使用重组抗原CysB与成虫粗抗原CAA的阳性检出率分别为92.9%(104/112)及94.6%(106/112);分别检测健康人血清56例、日本血吸虫病血清20例及肺吸虫病血清10例,对于两种抗原,华支睾吸虫特异性IgG检测阴性率均相同,上述三类血清的阴性率分别为96.5%(54/56)、95%(19/20)及90%(9/10)。结论华支睾吸虫重组蛋白CysB用于血清特异性抗体检测具有较高的敏感性及特异性,与成虫可溶性抗原(CAA)的诊断应用价值相近,有望成为应用于华支睾吸虫病诊断的替代抗原之一。

华支睾吸虫病快速诊断试剂盒质量控制10年分析

目的 建立华支睾吸虫病快速诊断试剂盒的质量控制体系,并以此对试剂盒进行质量监控。方法 建立了由200份确诊病人血清混合而成的阳性质控品和由200份非流行区健康人血清混合而成的阴性质控品,确定了包括对阳性质控品和阴性质控品的检测标准。结果 对10年104批次共101万人份的诊断试剂盒进行了监测,阳性质控品和阴性质控品的平均吸光度值分别为0.444和0.066,总阳性质控品和总阴性质控品变异系数分别为7.60％和10.72％。结论 华支睾吸虫病快速诊断试剂盒具有高度的敏感性、特异性和稳定性,质量监测体系也是一种性能可靠、行之有效的质量控制方案。

新型的华支睾吸虫病快速—ELISA诊断试剂盒现场应用评价

为对新型的华支睾吸虫病快速－ＥＬＩＳＡ诊断试剂盒首次现场应用进行评价．在本病流行区选２５９名职工．以双盲法用粪便清水沉淀法进行对照检测，抗体阳性率５０．２％（１３０／２５９）．虫卵阳性率４７．５％（１２３／２５９）．两者无显著性差异。其中两法均阳性１０６例．阳性符合率８６．２％．两法均阴性１１２例．阴性符合率８２．４％．总符合率８１．２％．与我省常规ＥＬＩＳＡ法结果相近．显示试剂盒有良好的应用价值．特别适用于乡、镇卫生院。

华支睾吸虫病间接荧光抗体试验(IFAT)纸片法的应用研究

采用滤纸干血代替血清作间接荧光抗体试验(IFAT)诊断华支睾吸虫病,血清与滤纸干血两者测定效果无显著性差异。滤纸干血在现场应用作流行病学调查,观察1612例,与粪检比较检出率无显著性差异。阳性符合率88.2％,阴性符台率92.9％。感染度与阳性符合率、反应强度有一定关系。

两个华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶的基因克隆、表达与定性(英文)

目的 寻找对华支睾吸虫病诊断有效的抗原基因,以便生物合成并研究其应用价值。方法 选取两个Genbank已报告的基因序列AF271091(CysA)及AF093242(CysB)分别克隆与表达融合蛋白,亲和层析纯化后进行免疫定性。结果 CysA与CysB均获得成功克隆与表达,Western blot分析显示CysA与华支睾吸虫病阳性血清有强反应,与日本血吸虫病阳性血清只有很弱的交叉反应,而CysA与华支睾吸虫感染血清无反应。免疫组化显示,被表达的两个半胱氨酸蛋白酶在华支睾吸虫体内的免疫定位无显著不同,主要在成虫肠道及虫卵。结论 成功表达的两个半胱氨酸蛋白酶中,CysB针对华支睾吸虫病血清有良好的抗原活性,值得视为诊断抗原候选做进一步的研究。

广东省输入性丝虫病病例调查

目的调查广东省输入性丝虫病病例及对周围人群的影响。方法对广东省输入性丝虫病病例及周围人群进行检查,应用常规厚血膜双片法检查微丝蚴,ELISA法检测丝虫IgG4抗体。结果2007年9月在广州南沙、番禺、汕头和中山等4市(区)共调查989人,其中47人来自广西富川县朝东镇长塘行政村的干上和印山自然村。共发现3例微丝蚴血症者,均为疫点长塘村干上、印山自然村人,微丝蚴密度分别为24、20和2条/120μl血,微丝蚴检出率为6.4%(3/47)。对残存疫点在粤人员、周围人群及非流行区对照人群共1501人进行丝虫IgG4检测,丝虫IgG4阳性者15例,其中来自干上和印山村12例,阳性率为25.5%(12/47),高于其他人群(χ2=295.83,P<0.01)。IgG4阳性而非微丝蚴血症者采用快速免疫色谱测试卡(ICT)复查,结果均为阴性。结论广东省来自广西丝虫病疫点务工人群中存在少量传染源。

华支睾吸虫cDNA文库的构建

目的 构建华支睾吸虫cDNA文库。方法 采集华支睾吸虫阳性鱼 ,分离囊蚴 ,感染实验动物兔 ,解剖兔收集华支睾吸虫成虫虫体。应用“一步法”提取华支睾吸虫总RNA ;经过mRNA纯化、cDNA合成 ,以PcDNA3(Amp +)质粒为载体构建文库。挑取 2 0个克隆进行扩增 ,选择 9个克隆进行DNA序列测定。序列结果与GenBank中相关基因进行比对。结果 获得含有 9 7× 10 5个重组子库容量的华支睾吸虫cDNA文库。其中PC6号克隆基因序列与华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶序列具有 93%的同源性。结论 已构建成华支睾吸虫cDNA文库。

华支睾吸虫重组半胱氨酸蛋白酶用于血清学调查的效果评价

目的以华支睾吸虫重组半胱氨酸蛋白酶(CsCp)为ELISA包被抗原检测流行人群血清特异性抗体水平,与成虫粗抗原比较,评价其用于华支睾吸虫病血清学调查的价值。方法以佛山市南海区的1个行政村为调查点,用改良加藤厚涂片法检查粪便华支睾吸虫虫卵。同时采集血清,分别以rCsCP与成虫粗抗原(CsCAA)的ELISA方法检测血清特异性抗体水平,对粪检及两种抗原的ELISA结果进行统计学分析。结果接受血清检测的97人中,华支睾吸虫虫卵阳性率60.8%,CsCAA-ELISA阳性率75.3%,rCsCP-ELISA阳性率76.3%,特异性抗体阳性率高于虫卵阳性率(P<0.05),不同抗原ELISA阳性率差异无统计学意义(P>0.05);CsCAA-ELISA、rCsCP-ELISA结果与粪检结果的符合率分别为56.7%和55.7%,两种抗原ELISA结果的符合率为82.5%。59例粪检阳性者CsCAA-ELISA和rCsCP-ELISA阳性率均为76.3%,38例粪检阴性者CsCAA-ELISA和rCsCP-ELISA阳性率分别为73.7%和76.3%。结论以rCsCP为包被抗原,用ELISA检测华支睾吸虫病流行区人群血清特异性IgG抗体与使用CsCAA的检测结果有较高的符合率,但同样不能区分现症与既往感染。

班氏丝虫病不同防治阶段媒介传播作用的研究

目的了解广东省班氏丝虫病主要传播媒介在丝虫病不同防治时期传播作用的变化。方法在班氏丝虫病流行区对致倦库蚊自然感染情况调查,并对其相关参数进行观察。结果 1956～1969年,全省进行了广泛调查,致倦库蚊是优势品种,占97．76％(731505／748239),在发现幼丝虫感染的蚊种中,致倦库蚊自然感染率最高,为9．94％,且仅在其体内发现L3(感染期幼虫),L3率为0．22％,是班氏丝虫病的主要传播媒介。在防治前、防治阶段、基本消灭阶段和消灭阶段,致倦库蚊的自然感染率分别为9．94％、6．02％、0．04％、和0,随着防治工作的深入,呈下降趋势,1993年未发现感染期幼虫。各阶段传播媒介年传播潜势分别为10486．21、 5131．89、124．30和0。结论防治后期班氏丝虫病的传播已被阻断。

重组抗原应用于SPG-ELISA检测华支睾吸虫循环抗体的效果评价

目的评价重组抗原用于SPG-ELISA诊断华支睾吸虫感染的价值。方法分别使用重组华支睾吸虫半胱氨酸蛋白酶(Cs-CysB)与华支睾吸虫成虫可溶性抗原(CAA),以SPG-ELISA检测华支睾吸虫病患者血清特异性IgG,比较两种抗原包被SPG-ELISA方法的敏感性与特异性。结果检测50份华支睾吸虫感染者血清,重组Cs-CysB与CAA包被的SPG-ELISA阳性率均为94.00%,健康人血清50例均为阴性;检测日本血吸虫病血清20份、并殖吸虫病血清20份、囊虫病血清10份,交叉反应率分别为5.00%、10.00%、20.00%和5.00%、0、20.00%。结论以重组Cs-CysB为包被抗原用SPG-ELISA检测血清华支睾吸虫抗体具有较高的敏感性及特异性,检测效果与CAA包被的SPG-ELISA相当。

广东省消灭淋巴丝虫病的监测与审评

目的消灭传染源,阻断传播,达到全省消灭淋巴丝虫病。方法按消灭丝虫病的监测方案进行病原学和媒介学监测。结果至2001年,全省血检1575905人,发现和治疗微丝蚴血症者4074例。原丝虫病流行区各流行县(市)于无微丝蚴血症者次年起,按达到基本消灭丝虫病标准后10年内和10年后分别统计,共病原学监测178个乡镇316544人和341个乡镇520120人;每县(市)均在3个以上的病原学监测点进行蚊媒监测,在429个点共解剖雌性致倦库蚊250377只和中华按蚊(含嗜人按蚊)2297只。人群和蚊媒均未发现人体丝虫感染,结果显示这些地区丝虫病的传播已被阻断。结论2001年9月,全省按照卫生部消灭丝虫病审评方案的要求,通过省级审评达到卫生部消灭淋巴丝虫病的标准。

广东省首次广州管圆线虫感染局部暴发的流行病学调查

目的了解一起外来民工集体感染广州管圆线虫疫情的流行因素。方法对广宁县文坑村疑似广州管圆线虫感染的云南白族民工、其他民工和当地居民进行现场流行病学调查;采集疑似病人和部分民工血清检测广州管圆线虫抗体;在疫点及周围捕捉老鼠,采集福寿螺、东风螺和新鲜鼠粪进行病原学检查。结果2007年3月24日17名云南白族民工共同进食在居住地附近的田地里采集的福寿螺,其中先后有6人发病,罹患率为35.29%(6/17),全部患者均进食过生螺肉。仅捕获黄胸鼠1只,未发现广州管圆线虫感染;采集新鲜鼠粪8份,其广州管圆线虫感染率为75%(6/8)。检查福寿螺189只,平均感染率为2.12%(4/189),感染度为平均每只螺含37条广州管圆线虫幼虫,其中大福寿螺的感染率较高,为21.43%(3/14);未采集到东风螺。采集5份患者和2份无症状民工的血清,其中2份患者血清的广州管圆线虫抗体呈弱阳性。结论广宁县横山镇文坑村是广州管圆线虫病的重要自然疫源地。外来民工同吃生福寿螺是引起广州管圆线虫感染局部暴发的主要因素。

华支睾吸虫病快速ELISA诊断试剂盒的建立

本文报告一种华支睾吸虫病快速诊断试剂盒。全程操作１５ｍｉｎ，内容完善，使用简便，可肉眼判断结果及用自来水洗涤。敏感性９２．１０％（４１７／４５３），假阳性率２．２５％（１１／４８８），优于常规ＥＬＩＳＡ。试剂盒重复性好，稳定性高，４℃存放有效期达６个月。初步现场使用，效果良好。

广东省丝虫病的流行与防治

目的 评价广东省淋巴丝虫病的防治效果 ,为后期监测提供依据。 方法 对广东省丝虫病流行和防治资料进行系统的分析。 结果 广东省 67个县 (市、区 )有丝虫病流行 ,仅平远县为马来丝虫病流行区 ,其余为班氏丝虫病流行区。防治前人群平均微丝蚴率为 3 .0 5 % ,微丝蚴血症者 2 0 0万人。班氏丝虫病传播媒介为致倦库蚊 ,马来丝虫病的传播媒介为中华按蚊和嗜人按蚊。 195 3～ 1986年 ,全省共血检调查 63 3 84912人 ,治疗患者 13 0 7892人 ,全民服药44 75 889人 ,海群生药盐防治 2 5 99795人。 1987年 67个县 (市、区 )进行防治效果考核 ,平均微丝蚴率为 0 .12 % ,以行政村为单位均降至 1%以下 ,全省基本消除丝虫病。防治后期监测 ,1988、1990和 1992年全省 9个纵向观察点人群平均微丝蚴率分别为 0 .19%、0 .14 %和 0 .0 5 % ;5年致倦库蚊自然感染率分别为 0 .11%、0 .0 3 %、0 .0 3 %、0 .0 1%和 0 .0 1% ,1991和 1992年未发现感染期幼虫 ;中华按蚊均未发现幼丝虫感染。 1980～ 2 0 0 0年 ,横向监测共血检 15 75 90 5人次 ,检出微丝蚴血症者 40 74例 ,并给予海群生正规治疗 ;1986年后未发现自然感染的蚊媒 ,1997年后已无微丝蚴血症者。人群血清抗体从 1993年的 9.86%降至 1999年的 1.69%。 结论 在流?

ABC-ELISA法检测华支睾吸虫特异性IgG及其亚类

目的 研究ABC ELISA法检测IgG及IgG亚类用于华支睾吸虫病诊断的价值。 方法 采用ABC ELISA法检测华支睾吸虫感染者 (62例 )和健康人 (3 8例 )血清特异性总IgG及其亚类。 结果 华支睾吸虫感染者血清特异性总IgG及其亚类阳性检出率分别为IgG 10 0 % (62 / 62 ) ,IgG15 4.8% (3 4/ 62 ) ,IgG2 79.0 % (4 9/ 62 ) ,IgG3 40 .3 % (2 5 /62 ) ,IgG498.4% (61/ 62 ) ;其中IgG4平均阳性滴度显著高于总IgG (P <0 .0 1)。健康人血清特异性总IgG假阳性率7.9% (3 / 3 8) ,IgG4假阳性率为 0 ;检测健康对照血清IgG4的A值 (0 .0 0 1)显著低于总IgG检测 (A =0 .0 3 1) (P <0 .0 1)。 结论 ABC ELISA法用于华支睾吸虫病诊断具有较高的敏感性 ;检测特异性IgG4诊断华支睾吸虫病效能与检测总IgG相当 ,同时具有阳性显色强、阴性本底低的优点 ;其余IgG亚类对于华支睾吸虫病诊断价值不大。

华支睾吸虫成虫总RNA的一步法提取与纯化

目的 为华支睾吸虫cDNA文库的构建提供基础。方法 采用硫氰酸胍 -酚 -氯仿一步法提取华支睾吸虫成虫总RNA。结果与结论 3 .5h左右可自华支睾吸虫成虫获得高纯度、完整性好的RNA。其总RNA存在体内缺口现象 ,2 8s电泳主带缺如。

ELISA检测广东省各地鼠形动物SARS特异性抗体的初步研究

目的 了解广东省各地鼠形动物血清SARS冠状病毒特异性IgG抗体水平 ,为探讨鼠形动物尤其是家鼠类媒介生物 ,与SARS流行是否存在相关性提供参考。方法 在广东省各地与SARS相关或被认为可能相关的场所诱捕鼠形动物 ,留取血清 ,用葡萄球菌A蛋白 酶联免疫吸附实验 (SPA ELISA)及常规ELISA检测SARS冠状病毒特异性IgG抗体水平。 结果 在广东省各地共获取鼠形动物 (包括褐家鼠、黄胸鼠、小家鼠及臭 )血清 193份 ,用SPA ELISA检测 ,7份特异性抗体阳性 ,均为褐家鼠或黄胸鼠 ,阳性率 3 .6% ;其中 13 9份褐家鼠、黄胸鼠血清用常规ELISA重复检测 ,检出阳性 18份 ,阳性率 12 .9% ;SPA ELISA检测阳性者中 5份用常规法复检 ,4份仍为阳性 ;所有阳性者均来自广州、佛山、深圳 3地。结论 在广东省各地捕获的鼠形动物中 ,血清SARS冠状病毒特异性IgG抗体阳性者均为褐家鼠或黄胸鼠 ,阳性者的地域分布似乎与广东省SARS流行情况存在一定的相关性 ;SPA ELISA法检测Rats类家鼠血清SARS冠状病毒特异性IgG的敏感性可能低于常规ELISA法 ,而检测阳性者与SARS冠状病毒接触或感染的相关程度还需进一步的研究证明。

鱼体华支睾吸虫囊蚴自然感染状态及保存液中存活情况

目的 了解华支睾吸虫囊蚴在鱼体内自然感染状态及其在保存液中的存活情况。方法 从草鱼和鳙鱼中以常规方法分离出华支睾吸虫囊蚴 ,统计各发育阶段囊蚴的情况。分别以 4℃和 30℃ ,以及 10ml容积和 10 0ml容积等不同条件保存囊蚴 ,观察囊蚴的存活情况。结果 鳙鱼体内囊蚴的成熟率和成活率大于草鱼 ;30℃保存的囊蚴发育成熟的速度较快 ,保存期短 ;4℃保存的囊蚴出现一定程度的滞育 ,2 0天后仍有较高数量的趋于成熟的囊蚴。保存液体体积的不同对囊蚴的发育生存没有明显影响。结论 囊蚴群体在鱼体内及体外环境中的生长保持一定的稳定性 ;囊蚴群体中各发育态的同时存在 ,使其具有持续发育成熟的能力 ,并保持相对稳定的感染力。