Vinculin促小鼠肝星型细胞活化作用

目的研究Vinculin在小鼠肝纤维化模型中的表达及作用。方法成年雄性昆明小鼠25只,随机分为对照组(n=10)和实验组(n=15)。实验组皮下注射四氯化碳-粟米油混合液(6 mL/kg),2次/周,对照组皮下注射同等剂量的粟米油。造模8周后取小鼠中叶肝组织行HE染色及Masson染色检测小鼠肝脏结构变化,免疫组织化学检测Desmin,Vinculin在肝内的表达及细胞定位。人源性肝星形细胞系LX-2瞬时转染Vinculin siRNA,qPCR及蛋白质印迹检测敲减Vinculin对desmine、α-SMA的表达的影响,ELISA检测敲减Vinculin后Ⅰ型胶原纤维的生成变化。结果 CCl4处理8周后,小鼠肝脏汇管区及肝小叶周围胶原纤维增多,局部有假小叶生成趋势,免疫组化结果显示与对照组相比desmin及Vinculin阳性细胞数量增多(差异有统计学意义,P<0.05),Vinculin特异性表达于活化肝星形细胞胞膜上;qPCR结果显示敲减星形细胞Vinculin表达后,desmine和α-SMA表达量下降(差异有统计学意义,P<0.05),Ⅰ型胶原纤维表达量无明显下降。结论 Vinculin介导肝星形细胞的活化。

miR-6883-3p靶向CHD1L抑制肝癌细胞的恶性表型

目的:寻找可靶向调控恶性肿瘤相关染色质解旋因子CHD1L的miRNAs分子,确证该调控模式对肝癌细胞恶性表型的影响。方法:通过生物信息学分析预测并筛选可靶向结合CHD1L的miRNAs,实时荧光定量PCR(qRT-PCR)及蛋白印迹分析(Western Blot)方法验证所筛选的miRNAs对肝癌细胞CHD1L表达的影响,明确可转录后调控CHD1L表达的关键miRNA分子;qRT-PCR检测肝癌组织中miRNAs和CHD1L的表达,并对其表达进行相关性分析;MTS、细胞划痕、Transwell迁移实验验证目标miRNA分子对肝癌细胞恶性表型的影响。结果:生物信息学分析结果显示miR-6883-3p可显著下调肝癌细胞CHD1L表达。双荧光素酶报告实验检测结果证明miR-6883-3p可直接靶向结合CHD1L 3'UTR端。临床肝癌组织样本qRT-PCR检测及统计学分析结果显示CHD1L高表达于肝癌组织,而miR-6883-3p则高表达于癌旁组织,二者表达呈负相关。miR-6883-3p模拟物(mimic)可明显抑制肝癌细胞增殖、促进细胞凋亡、抑制细胞迁移;而miR-6883-3p抑制剂(inhibitor)可显著促进肝癌细胞增殖、促进细胞迁移。与对照组(Mock)相比,miR-6883-3p mimic组肝癌细胞内ALB表达则随着CHD1L表达的下调而增加,HNF-4α及AFP随着CHD1L表达的下调而减少,反之亦然。结论:miR-6883-3p通过靶向调控CHD1L表达,抑制肝癌细胞的恶性表型。