鳙鱼维氏气单胞菌的分离鉴定及其毒力基因检测

从患病鳙鱼中分离纯化得到一株优势菌株AH-YS,通过革兰氏染色、氧化酶试验、生化鉴定以及16S r RNA基因扩增、测序和系统进化分析等操作,结果显示,分离到的细菌为维氏气单胞菌。药敏试验显示,在使用的11种抗菌药物中,该菌株对氧氟沙星、诺氟沙星和恩诺沙星等9种药物敏感,对甲氧苄氨嘧啶和氨苄西林耐药。对9种毒力基因的扩增结果显示,可以检测到气溶素、细胞毒性肠毒素、鞭毛、弹性蛋白酶和酯酶5种。

陕北外婆

她住在佳县峪口已经整整五十年了。

昆仑雪莲

当我再次踏上这个高原哨所．依旧是这方天地．依旧是旗杆下几棵孤单的野草，听说去年两个兵．一个当兵八年复员回了老家．一个巡线碰到饥饿的狼群．就再也没有回来。这是我第二次随文艺队慰问演出到这里。

中华草龟荧光假单胞菌的分子鉴定及分析

从患病草龟病灶分离到几株优势菌,对该菌进行革兰氏染色、镜检,在普通肉汤培养基上进行观察。对分离菌株进行生化鉴定及16S rRNA基因序列的克隆、测定,并对其DNA进行测序,在NCBI上进行比对,构建系统进化树,对该菌的基因序列进行分析比对,基于形态学、生理学、生物化学和基因序列分析,将这些菌株鉴定为荧光假单胞菌。药敏实验结果表明该菌对复方新诺明、氧氟沙星、恩诺沙星、诺氟沙星高度敏感,对卡那霉素、四环素、庆大霉素、新霉素、氟苯尼考、氯霉素中度敏感,对头孢噻吩、甲氧苄啶有耐药性。

三角帆蚌(Hyriopsis cumingii)Hc-Sox9基因的全长克隆及表达分析

三角帆蚌作为中国特有的淡水育珠蚌,在养殖业中占有重要的地位,其雄性个体有着较大的产珠优势,所以在三角帆蚌中对性别决定相关基因的研究至关重要。而在哺乳类、鸟类、爬行类、鱼类等物种中,Sox9基因被认为是性别决定基因。本研究通过RACE法克隆出Hc-Sox9基因的全长cDNA序列,以荧光定量PCR的方法检测Hc-Sox9基因在三角帆蚌各组织中的相对表达量,结果显示:Hc-Sox9基因全长1483 bp,ORF区长为1395 bp,编码464个氨基酸,预测的Hc-Sox9包含两个结构域:1个标准的SOX-N域和1个HMG域;2龄性成熟个体各组织荧光定量结果显示:Hc-Sox9基因在闭壳肌中的表达量最高,雌雄差异极显著,而1~3龄荧光定量PCR结果显示:1~2龄Hc-Sox9基因在雌性性腺中的表达显著高于雄性的,雌雄间表达差异极显著,而3龄性腺中雄性性腺的表达显著高于雌性的,推测在三角帆蚌性成熟过程中,Hc-Sox9可能一定程度地参与了性别分化过程。

三角帆蚌中WNT4基因克隆及表达分析

为进一步了解WNT4在三角帆蚌性别决定过程中的作用,通过RACE(Rapid-amplification of cDNA ends)技术克隆获得了三角帆蚌WNT4基因的全长cDNA,共1560 bp,其中5′-UTR 396 bp、3′-UTR 24 bp,开放阅读框(ORF)为1140 bp,可以编码379个氨基酸,且该序列含有WNT家族特有结构域。对WNT4的氨基酸序列进行同源性分析后,发现该基因在物种间的进化关系和结构功能具保守性。通过实时荧光定量PCR(qRT-PCR)分析发现WNT4基因在三角帆蚌雌雄多个组织(外套膜、闭壳肌、鳃、性腺、斧足和肝)中均有表达,表明其参与了多样的生物学过程,在鳃、斧足和肝中表达量较高,在性腺、闭壳肌和斧足中雌雄间有显著性差异,且雌性三角帆蚌的性腺、闭壳肌表达量显著高于雄性。原位杂交结果显示,WNT4在雌性三角帆蚌的卵母细胞上有明显的杂交信号,推测WNT4基因与性别决定相关。

三角帆蚌KLHL10基因的特征和表达分析

为了探究KLHL10基因在三角帆蚌性别分化中的作用,利用RACE(Rapid-amplification of cDNA ends)克隆了其cDNA全长,使用实时荧光定量分析比较其在6个不同组织(性腺、鳃、肝胰腺、斧足、闭壳肌、外套膜)、早期发育阶段(1~8月龄)性腺及12、24、36月龄雌雄性腺中表达水平的差异,运用RNA干扰(RNAi)对其功能进行初步探究。结果显示KLHL10基因cDNA全长为2361 bp,其中5′非编码区长93 bp,3′非编码区长447 bp,开放阅读框(ORF区)长1821 bp,编码606个氨基酸;qRT-PCR结果显示KLHL10基因在精巢中高表达;早期发育阶段在6月龄时表达量最高;12、24、36月龄的表达结果显示,KLHL10基因在精巢中的表达量均高于同时期在卵巢中的表达量(P<0.05)。同时,设计KLHL10基因的3条dsRNA干扰链,结果显示RNA干扰能有效减少KLHL10基因在性腺组织的表达量。根据以上结果推测KLHL10基因在三角帆蚌中是雄性相关基因,其可能参与三角帆蚌的性别分化与精巢发育。