莱芜仔猪肠道菌群组成初步分析

猪的肠道菌群组成与种类及健康状态密切相关,研究健康、品种优良的猪的肠道菌群组成对于养猪业的发展具有积极意义。本研究采用16S rRNA高通量测序方法对10日龄莱芜哺乳仔猪腹泻仔猪的粪便进行测序分析。结果显示,健康仔猪共有优势菌门为厚壁菌门(Firmicutes)、变形菌门(Proteobacteria)和拟杆菌门(Bacteroidetes),共有优势菌属为乳杆菌属(Lactobacillus);腹泻仔猪共有优势菌门为厚壁菌门(Firmicutes)、拟杆菌门(Bacteroidetes),共有优势菌属为乳杆菌属(Lactobacillus)。此外,两组比较,Lactobacillus、Escherichia-Shigella、Prevotella_9、Fusobacterium、Prevotellaceae属在腹泻仔猪组丰度水平高,而Acinetobacter、Jeotgalibaca、Treponema_2、Psychrobacter属在健康仔猪组丰度水平高。本研究结果为莱芜猪肠道菌群多样性研究提供基础数据,并为后期调节肠道菌群、促进猪的健康成长提供参考依据。

地方鸡品种遗传多样性的微卫星标记研究

采用微卫星标记技术检测了山东省3种地方鸡种：汶上芦花鸡、济宁百日鸡和日照鸡的遗传多样性，在40种微卫星引物中筛选出多态性丰富且扩增条带清晰稳定的6个引物。统计分析了各群体的等位基因数（NA）、多态信息含量（PIC）、平均杂合度（H）、群体间的遗传距离（DS）和相似系数（I）。采用UPGMA法构建系统发生树。结果表明：3个地方鸡种在6个微卫星位点上共发现了15个等位基因，每个位点的等位基因数为2—3个；每个群体的平均等位基因数分别为2．5、2．2和2；大小在110～300bp之间，期望杂合度与观测杂合度比较接近。芦花鸡（W）多态信息含量最大，为0．3075；日照鸡（R）中最小，为0．2915。以Nei氏遗传距离进行UPGMA聚类分析，结果表明：百日鸡（J）与日照鸡（R）间的遗传相似系数最大，为0．9832；遗传距离最小，为0．0170。3个品种鸡可聚为2类，百日鸡（J）与日照鸡（R）聚为一类，芦花鸡（W）独立聚为一类。

动物毛囊器官的分化与体外培养研究进展

毛囊是一个由上皮性成分、间质性成分及神经外胚层成分共同构成的器官,由外根鞘、真皮鞘、黑色素和毛乳头等20余种细胞构成。这些细胞在体内经过复杂的相互作用,共同参与了毛囊的分化、发育、生长、分化与周期性调节。近年来,有关毛囊细胞的基础研究取得了很大进展,尤其是关于毛囊的形态发生和发育调控机理的研究成为研究热点之一,并产生了一个崭新的领域——毛囊生物学。本文综述了毛囊器官的分化与发育、毛囊器官的体外培养及功能等方面的研究进展,并对未来毛囊生物学的研究进行了展望。

动物性食品安全现状与分析

当前我国经济飞速发展,人们对动物性食品的要求也不再仅仅是数量上的追求,正在向质量要求进行转变,然而目前国内动物性食品在各个方面仍需要进行完善。因此,如何解决这些问题,使动物性食品安全真正得到保障,已显得尤为重要。本文以肉鸭为例进行分析,剖析动物性食品的现状和解决的对策。

猪PID1基因CDS区的克隆及其mRNA表达与肌内脂肪沉积关系

为了探索PID1(Phosphotyrosine interaction domain containing1)基因的表达与脂肪沉积的关系,文章利用兼并引物进行RT-PCR从猪脂肪和肌肉组织中克隆PID1基因CDS(Coding region)区全序列,并采用荧光定量PCR方法对大白猪、鲁莱黑猪、莱芜猪3个猪品种的肝脏、脂肪和肌肉组织PID1基因mRNA表达进行了相对定量分析。结果表明:经克隆、测序,得到了猪PID1基因654bp全编码区序列,通过Blast比对,与人、大鼠、牛有93.88%、66.94%、88.07%的同源性。PID1基因在同一个品种猪中mRNA表达水平总体表现为:肝脏>脂肪>肌肉。在不同品种3种组织中PID1基因mRNA表达水平总体表现为:莱芜猪>鲁莱黑猪>大白猪,其中肝脏中差异显著(P<0.05),但是在脂肪和肌肉组织中莱芜猪与鲁莱黑猪差异不显著(P>0.05)。对于高肌内脂肪(LWH)、中等肌内脂肪(LWI)和低肌内脂肪(LWL)沉积的3组莱芜猪,PID1基因在肝脏组织中的表达水平是LWH显著高于LWL(P<0.05),在肌肉组织中则是LWH显著高于LWI和LWL(P<0.05)。PID1基因在莱芜猪品种内3个组织中mRNA表达量与IMF含量相关均不显著,而在品种间3个组织中mRNA表达量与IMF含量呈显著正相关(P<0.05)。结果提示:PID1的表达可能与脂肪沉积性状存在一定的关系。

莱芜猪PID1基因的功能分析及表达谱研究

为进一步了解莱芜猪PID1基因的结构和功能,本研究以莱芜猪为试验对象,分析PID1基因的结构和功能,并利用SYBR-Green实时荧光定量PCR方法,分析该基因在莱芜猪10个不同组织(心脏、背最长肌、脾脏、肝脏、肺脏、小肠、大肠、脑、脂肪、脊髓)的表达谱信息。生物信息学分析表明:PID1基因编码含217个氨基酸的蛋白,其定位在细胞质,无跨膜结构,为非分泌蛋白,具有亲水性,分子量为54ku,等电点为5.11,二级结构中α螺旋占很大的比例,PID1的C端有一PTB(磷酸酪氨酸作用位点)结构域,与人和黑猩猩的亲缘关系较近。组织表达谱分析结果显示该基因在大多数组织中均有表达,其在各组织中的mRNA表达丰度表现为:心脏>脑>肝脏>脂肪>背最长肌>肺脏>脊髓>大肠>脾脏,而在小肠中未见明显表达。结果提示:PID1可能与胰岛素信号途径有关,并可能调控GLUT4基因的表达,呈现多组织表达特征,提示其调节目的基因转录具有广泛性。

猪CuZnSOD基因的克隆、表达及功能分析

为了进一步了解和认识CuZnSOD基因的结构和功能,揭示CuZnSOD对猪抗氧化机能的影响,寻找与肉质性状相关联的分子标记,文章采用RACE(Rapid amplification of cDNA end)方法,对莱芜猪CuZnSOD基因cDNA进行克隆测序,分析其结构和功能,并用Real-time PCR检测CuZnSOD基因的表达。结果表明,CuZnSOD基因cDNA序列全长658bp(GenBank登录号:GU944822),包含76bp的5′UTR和120bp的3′UTR序列。全部CDS序列462bp,编码153个氨基酸,分子量为15.9kDa,等电点为6.03。CuZnSOD基因编码的氨基酸序列中,第3氨基酸残基处存在1个O-糖基化位点,第86氨基酸残基处存在1个N-糖基化位点。二级结构中α螺旋仅占1.31%。在进化过程中高度保守,与人、牛、小鼠和褐鼠的编码区同源性分别为87.74%、87.66%、83.44%和83.23%;氨基酸序列同源性分别为90.26%、94.12%、92.21%和91.50%。CuZnSOD存在典型的金属结合配体结构域(GFHVHQFGDNT)。基于蛋白序列所构建的分子进化树表明猪与牛的亲缘关系最近。在mRNA水平上,CuZnSOD是一个广谱表达基因,在大脑、心脏、脾脏、肝脏、肾脏、肺、大肠、小肠、脊髓、肌肉、背膘和胃中都能检测到,其在肾脏、小肠和肺中表达量较高,在心脏和肌肉组织中表达量较低。

莱芜猪GPx4基因在不同组织中的表达规律研究

为研究GPx4基因mRNA在莱芜猪不同组织中的差异表达规律,探讨该基因与地方猪种抗氧化性能的关系。本研究以5头莱芜猪为实验材料,提取10种组织的总RNA,应用实时荧光定量PCR技术,检测GPx4基因在莱芜猪不同组织的mRNA相对表达量。实时荧光定量PCR研究结果显示:GPx4基因在莱芜猪各组织中均有表达,组织之间的相对表达量存在显著差异(P<0.05);GPx4基因在莱芜猪脑、心、肝、脾等组织高丰度表达,并且极显著地高于其他组织中的表达量(P<0.01)。GPx4基因在不同组织中的表达水平由高到低依次为:肌肉>脊髓、大肠、背膘、小肠>肺,差异显著(P<0.05)。

小肽氨基酸组成对体外培养的奶牛乳腺组织乳蛋白合成的影响

为研究不同二肽对奶牛乳腺组织中乳蛋白合成的影响,在体外培养的奶牛乳腺组织培养液中分别添加不同的赖氨酸二肽:赖氨酸-赖氨酸(Lys-Lys)、赖氨酸-组氨酸(Lys-His)、赖氨酸-苯丙氨酸(Lys-Phe)、赖氨酸-亮氨酸(Lys-Leu)和赖氨酸-苏氨酸(Lys-Thr),等量取代培养液中10%游离赖氨酸(赖氨酸总浓度为210μg/m L)进行培养,试验结束后收集乳腺组织和培养液分别检测基因表达和乳蛋白合成。结果表明,同游离Lys和Lys-Thr、Lys-Lys、Lys-His二肽相比,Lys-Leu和Lys-Phe显著提高了乳腺组织中αs1酪蛋白基因的表达(P<0.05);5种肽结合Lys均显著提高了小肽转运载体2(Pep T2)的mRNA丰度(P<0.05),Lys-Phe和Lys-Leu比等量的Lys-Thr、Lys-Lys和Lys-His更能促进Pep T2基因的表达(P<0.05)。说明小肽不同的氨基酸组成可影响奶牛小肽的摄取和乳蛋白的合成,同亲水性氨基酸组成的小肽相比,疏水性氨基酸组成的小肽更能促进乳腺αs1酪蛋白基因的表达。

水分含量和发酵时间对花椰菜茎叶青贮效果的影响

试验对不同水分含量(50.0%、60.0%、70.0%、80.0%及88.3%)和时间(30、45及60 d)对花椰菜茎叶青贮发酵品质和营养成分的影响进行研究。结果表明,不同的水分含量和不同的发酵时间对青贮品质有明显影响。感官评定中,降低水分含量可改善青贮效果,发酵时间对青贮效果影响差异不大。p H随发酵时间延长逐渐降低,以60.0%水分组发酵60 d的数值最低。乳酸(LA)含量随发酵时间延长而逐渐增多,以60.0%水分组发酵60 d的含量最高。青贮发酵后粗蛋白(CP)含量随发酵时间的延长而升高,以60.0%和70.0%水分组发酵60 d的含量最高。中性洗涤纤维(NDF)、酸性洗涤纤维(ADF)和粗灰分(Ash)含量随青贮原料水分含量的降低和发酵时间的延长而降低。综合分析,60.0%和70.0%水分含量组发酵60 d的花椰菜茎叶青贮品质最好。

含赖氨酸二肽对奶牛乳蛋白合成和乳腺氨基酸转运相关基因表达的影响

试验旨在研究含赖氨酸二肽对奶牛乳腺组织中乳蛋白合成和氨基酸转运的影响。在体外培养的奶牛乳腺组织培养液中添加不同含赖氨酸二肽(赖氨酸-赖氨酸(KK)、赖氨酸—组氨酸(KH)、赖氨酸—苯丙氨酸(KF)、赖氨酸—亮氨酸(KL)和赖氨酸—苏氨酸(KT)),分别等量取代培养液中0、5%、10%、15%和20%的游离赖氨酸(赖氨酸总浓度为210μg/mL)进行培养,试验结束后收集乳腺组织用于基因表达检测。结果显示,同游离氨基酸替代量为0组相比,KH替代Lys比例为15%,KF替代比例为10%,KK、KL和KT替代比例为5%时,αs1酪蛋白(CSN1S1)mRNA丰度最高(P<0.05);KK替代Lys比例为5%、10%、15%和20%,KH替代比例为10%和15%,KF替代比例为15%,KL替代比例为5%、20%及KT替代比例为5%、10%和15%时,均显著促进了奶牛乳腺组织中小肽转运载体2(SLC15A2)的基因表达(P<0.05);KH替代Lys比例为15%,KK、KL替代比例分别为10%,KF、KT替代比例分别为5%时,赖氨酸转运载体B0+(SLC6A14)的mRNA丰度最高(P<0.05);KH替代Lys的15%、20%,KK替代比例为5%、10%和15%,KL替代比例为5%和10%时,显著促进了雷帕霉素靶蛋白(mTOR)基因的表达(P<0.05)。结果提示,奶牛乳腺摄取赖氨酸二肽能促进氨基酸的吸收和乳蛋白的合成。

泌乳激素及苏氨酸和苯丙氨酸比例对乳蛋白合成的影响

研究泌乳素、氢化可的松和胰岛素3种泌乳激素及其组合以及苏氨酸和苯丙氨酸比例对体外培养的奶牛乳腺组织中乳蛋白合成的影响。结果表明,催乳素、氢化可的松和胰岛素的质量浓度分别为500、1 000和5 000、10 000和50 000μg/L时,显著增加α_(s1)酪蛋白的mRNA丰度。质量浓度为500μg/L的催乳素和5 000μg/L的胰岛素则显著提高乳蛋白的合成。而当3种泌乳激素质量浓度分别为催乳素500μg/L、氢化可的松1 000μg/L和胰岛素5 000μg/L时,最能促进乳腺组织中α_(s1)酪蛋白基因表达和乳蛋白合成;当Thr/Phe为1.05∶1时,α_(s1)酪蛋白mRNA丰度达到最高。Thr/Phe比例为1.02∶1时,最利于乳蛋白的合成。说明:培养液中催乳素、氢化可的松和胰岛素的质量浓度分别为500、1 000和5 000μg/L,Thr/Phe比例为1∶1时最利于体外培养的奶牛乳腺组织中乳蛋白合成。

蔬菜茎叶混合青贮技术及其应用研究进展

蔬菜茎叶青绿多汁,适口性好,含有丰富的粗蛋白、粗脂肪和粗纤维,是牲畜的优质饲料。然而,除了小部分作为青绿饲料直接饲喂动物外,大部分蔬菜茎叶下脚料被遗弃或抛弃,这不仅造成资源浪费,而且造成环境污染。通过青贮等方式将蔬菜茎叶加工成动物饲料,既可以提高其利用价值,又可以取得良好的社会效益。对蔬菜茎叶混合青贮技术、影响青贮效果的因素及其在养殖业中的应用进行了综述。

莱芜猪和鲁莱黑猪肌纤维发育规律及其对肉质特性的影响

本研究以40～90kg6个体重阶段的莱芜猪和鲁莱黑猪为试验对象,每个阶段每组各6头猪,采用组织化学切片染色技术进行组织学观察,探讨猪肌纤维的发育规律及其对肉质特性的影响。结果表明:①随着体重的增加,莱芜猪与鲁莱黑猪肌纤维的发育较为明显,但发育特点明显不同,莱芜猪40～70kg体重时肌纤维生长较慢,直径和面积变化不明显,70kg后肌纤维生长发育明显加快(P<0.05);而鲁莱黑猪则是40～60kg体重时肌纤维生长较快,60kg后肌纤维生长发育变慢(P<0.05)。②琥珀酸脱氢酶(SDH)组织化学处理显示,肌肉肌纤维是由红肌纤维、中间型肌纤维和白肌纤维这3种类型肌纤维构成,并以白肌纤维占优势。莱芜猪与鲁莱黑猪在肌纤维类型的组成和不同类型肌纤维直径上具有不同的发育性变化模式,总体上莱芜猪红肌纤维含量有高于鲁莱黑猪的变化趋势。在不同类型肌纤维直径方面,莱芜猪与鲁莱黑猪具有基本相同的发育性变化模式。③相关性分析表明,肌肉的肌纤维尤其是红肌纤维的生长发育,对肌肉的干物质、肌内脂肪及系水力等肉质性状具有有利的影响,但白肌纤维的生长发育对肌肉的系水力具有不利的影响。研究结果提示:在肌肉组织中肌纤维的发育方面,莱芜猪比鲁莱黑猪较为晚熟;在肌纤维类型的组成方面,红肌纤维更有利于优良肉质特性的形成。

赖氨酸二肽对奶牛乳腺mTOR信号通路元件基因表达的影响

为研究赖氨酸二肽对奶牛乳腺组织中哺乳动物雷帕霉素靶蛋白(mTOR)信号通路的影响,在体外培养的奶牛乳腺组织培养液中分别添加赖氨酸—赖氨酸、赖氨酸—亮氨酸和赖氨酸—组氨酸二肽,等量取代培养液中φ=5%、5%和15%的游离赖氨酸(赖氨酸总质量浓度为210 mg/L);在此基础上,在赖氨酸组和赖氨酸—赖氨酸二肽5%取代组分别添加终浓度为0和100 nmol/L的mTOR抑制剂雷帕霉素。试验结束后收集乳腺组织用于αs1酪蛋白、mTOR、4E-BP1和S6K1的基因表达检测。结果发现,与游离氨基酸相比,添加3种赖氨酸二肽显著增加αs1酪蛋白、mTOR、4E-BP1和S6K1基因的表达;添加雷帕霉素抑制上述基因的表达,赖氨酸—赖氨酸二肽可以降低雷帕霉素的抑制作用。结果表明,除作为合成底物外,赖氨酸二肽还可能通过调控mTOR信号通路促进乳蛋白的合成。

牛乳蛋白合成调控研究进展

乳蛋白的氨基酸(AA)含量和比例比较理想,是一种营养价值很高的蛋白质。除小部分来源于血液外,乳中绝大部分的蛋白质由乳腺上皮细胞利用血液中的氨基酸或小肽从头合成。乳中的蛋白质含量和组成直接影响乳蛋白的营养和生理特性以及乳制品的产量。只有清楚地了解乳蛋白合成的调控机制,才能更好地通过营养策略来提高乳蛋白含量。因此,对奶牛乳腺细胞内乳蛋白的合成调控进行了简要综述。

奶牛乳腺体外培养模型应用研究进展

奶牛乳腺上皮细胞(BMEC)具有分泌乳汁的特殊功能,体外培养的奶牛乳腺细胞是研究乳成分合成调控和乳腺生理代谢的良好模型。近年来,奶牛乳腺体外培养模型受到越来越多的关注,其应用也更广泛。本文主要从奶牛乳腺体外培养模型在乳成分合成调控和乳腺生理代谢机制领域的应用两个方面进行简要综述。

猪Nrf2基因克隆、生物信息学分析及启动子区转录活性分析

旨在了解猪Nrf2基因的结构和功能,研究Nrf2基因的转录调控机制。本研究选取6头90 kg左右的健康大蒲莲猪为试验动物,采用cDNA末端快速克隆技术(RACE)和染色体步移技术获得大蒲莲猪Nrf2基因完整的cDNA序列和启动子区域,利用生物信息学软件分析Nrf2基因及其启动子区域的生物学特征。结果,Nrf2基因cDNA全长2 358 bp,包括87 bp的5′UTR,495 bp的3′UTR序列,CDS区大小为1 776 bp,编码591个氨基酸。对预测蛋白质序列进行生物信息学分析,蛋白分子量为66.402 7 ku,理论等电点(pI)为4.66,大部分二级结构为α-螺旋。采用染色体步移技术扩增得到5′侧翼序列2 091 bp的片段。Nrf2基因5′侧翼区经预测含有典型的TATA-box,不含CpG岛。构建不同长度启动子片段的pGL3-Basic表达载体,转染293T细胞后经双荧光素酶活性检测,提示在-903^-710 bp区域内可能存在正调控区或增强子,生物信息学预测其中含有多个转录因子结合位点,可能参与Nrf2基因转录调控。本研究成功获得了Nrf2基因完整的cDNA序列和启动子区域,并且发现-903^-710 bp为核心启动子,本研究为猪抗氧化应激的遗传改良提供一定理论基础。

一氧化氮在兔球虫感染中作用的研究

通过腹腔注射的途径给予感染斯氏艾美耳球虫(Eimeria stiedai)的家兔不同浓度的NOS底物L-精氨酸(L-Arg)和iNOS抑制剂L-氨基胍(L-AG),对球虫感染家兔诱导型一氧化氮合酶(iNOS)活性、血清中NO的浓度、每克粪便的球虫卵囊数(OPG)及肝的剖检和镜下病变进行了研究。结果表明:感染E.stiedai后,家兔肝匀浆的iNOS活性和血清中NO浓度逐渐升高,感染对照组、添加L-Arg组、L-AG组3组均在感染后第12 d达到最高值,而后逐渐下降,于23 d左右下降到感染前的水平;L-Arg可增强肝的iNOS活性,使其释放大量NO,产生对球虫的抑制或杀伤作用,减轻球虫感染引起的病变;而L-AG则抑制肝的iNOS活性,使生成的NO减少,对球虫的抑制作用减弱甚至消失,从而加重球虫感染引起的病变。结果提示:NO及iNOS确实参与了家兔E.stiedai的感染过程,并且NO具有一定的抑制或杀伤兔球虫的作用。

猪miR-331-3p过表达载体的构建及其对细胞增殖的影响

本研究旨在阐明猪miR-331-3p对细胞增殖的影响,探讨其对细胞增殖的作用机制首先构建了miR-331-3p的过表达载体pcDNA 3.1 (+)-miR-331-3p,并将将PK15细胞分为4组,分别为实验组、实验组对照组、抑制剂组和抑制剂对照组。实验组和对照组分别转染pcDNA 3.1(+)-miR-331-3p和pcDNA 3.1(+)。抑制剂组和抑制剂对照组分别转染miR-331-3p Inhibitor和miR-331-3p阴性对照(miR-331-3p NC)。通过在各组添加CCK-8试剂绘制细胞增殖曲线,并使用PI染色检测细胞所处周期比例。同时,利用实时荧光定量PCR(Quantitative real-time PCR,qPCR)检测生长抑制蛋白家族成员5 (Inhibitor of growth family member 5,ING5)、细胞周期蛋白依赖性激酶2 (Cyclin dependent kinase 2,CDK2)、细胞周期蛋白依赖性激酶3 (Cyclin dependent kinase 3,CDK3)、细胞周期蛋白依赖性激酶4 (Cyclin dependent kinase 4,CDK4)、细胞周期蛋白B (Cyclin B)和细胞周期蛋白依赖性激酶抑制剂1A(Cyclindependentkinaseinhibitor1A,CDKN1A)的表达变化。结果表明,实验组miR-331-3p表达量显著升高,细胞增殖曲线表明48 h和72 h时细胞数目均呈现出实验组>实验对照组和抑制剂对照组>抑制剂组的趋势(P<0.05)。与实验对照组相比,实验组处于G0/G1期的细胞比例下调,S期和G2/M细胞的比例上调,抑制剂对照组趋势与之相反;同时,实验组中与促进增殖的基因CDK2、CDK3、CDK4和CyclinB的mRNA表达水平均显著升高,而抑制增殖的基因ING5和CDKN1A均表现出显著下降的趋势。本研究成功构建了miR-331-3p过表达载体,且发现miR-331-3p具有促进猪肾上皮细胞增殖的能力,研究结果为深入研究miR-331-3p在猪生长发育中的作用机制奠定了基础。