淫羊藿甙抑制肿瘤细胞端粒酶活性及其调节机制的研究

目的 :探讨中药单体淫羊藿甙 (ICA)抑制肿瘤HL 6 0细胞端粒酶活性及作用机制。方法 :采用MTT法 ,NBT染色法 ,TRAP PCR ,RT PCR法和流式细胞术。结果 :ICA显著抑制HL 6 0细胞端粒酶活性 ,且端粒酶活性下降与细胞表面粒细胞分化抗原CD11b表达率呈负相关 ;诱导HL 6 0细胞向粒细胞方向分化 ;改变HL 6 0细胞周期各时相的分布 ,表现为G0 /G1期细胞逐渐增多 ,S期细胞逐渐减少 ;上调分化相关基因p2 1、下调增殖相关基因c mycmRNA和蛋白表达水平。结论 :阐明了ICA显著抑制HL 6 0细胞端粒酶活性 ,并从基因 蛋白 细胞效应水平揭示了其调节端粒酶活性的可能机制。

淫羊藿甙逆转转化生长因子β_2免疫抑制作用的抗肿瘤研究

目的：研究淫羊藿甙（ＩＣＡ）对ＰＧ细胞分泌转化生长因子β２（ｔｒａｎｓｆｏｒｍｉｎｇ ｇｒｏｗｔｈ ｆａｃｔｏｒβ２，ＴＧＦβ２）的影响、ＩＣＡ逆转ＴＧＦβ２介导的免疫抑制作用及其机制。方法：ＭＴＦ法检测细胞增殖、杀伤活性，ＲＴ－ＰＣＲ检测ＴＧＦβ２、穿孔素，流式细胞术检测ＴＧＦβ２、ＩＬ－２Ｒα水平。结果：ＩＣＡ可抑制ＰＧ细胞中ＴＧＦβ２的蛋白和ｍＲＮＡ表达，能够逆转受ＴＧＦβ２抑制的ＬＡＫ和ＣＤ３ＡＫ细胞的杀伤活性，并能部分恢复受ＴＧＦβ２抑制的ＬＡＫ细胞表面ＩＬ－２Ｒα表达和ＣＤ３ＡＫ细胞内穿孔素ｍＲＮＡ水平，以及ＣＤ３ＡＫ细胞的增殖活性。结论：淫羊藿甙通过抑制肿瘤细胞免疫抑制因子ＴＧＦβ２的产生，增强免疫效应细胞的杀伤活性等机制而发挥抗肿瘤作用。

淫羊藿甙对人高转移肺癌细胞膜的影响

本研究采用流式细胞术及荧光探针标记技术检测了淫羊藿甙对人高转移肺癌细胞膜的影响。结果表明,淫羊藿甙可提高PG细胞膜流动性,增加膜表面HLA-ABC抗原的表达,增强肿瘤细胞的抗原性,这可能是淫羊藿甙的抗瘤作用机制之一。

ICA、PJA逆转人高转移肺癌细胞FasFasL途径免疫逃逸机制的研究

目的 :研究ICA、PJA对人高转移肺癌细胞PG细胞免疫逃逸的逆转作用。方法 :MTT法检测ICA、PJA对PG细胞增殖的影响以及对CD3AK杀伤敏感性的影响。流式细胞仪检测细胞表面分子Fas、FasL表达水平和细胞凋亡。应用PG细胞与JurkatT细胞其培养的方法体外研究FasL诱导T淋巴细胞凋亡的作用。结果 :PG细胞高表达FasL ,低表达Fas ,对CD3AK细胞杀伤敏感性较低 ,并在与JurkatT细胞共培养中诱导高表达Fas的JurkatT细胞凋亡。ICA、PJA对PG细胞有明显的增殖抑制作用。ICA可明显提高PG细胞Fas的表达率。ICA、PJA可明显降低PG细胞FasL的表达率。ICA、PJA可使PG细胞与JurkatT细胞共培养中 ,降低JurkatT细胞的凋亡率。ICA、PJA可提高CD3AK细胞对PG细胞的杀伤活性。结论 :ICA、PJA可逆转人高转移肺癌细胞PG通过Fas FasL途径逃避机体免疫活性细胞的攻击。

CD44反义寡核苷酸对肿瘤细胞表面抗原和对CD3AK杀伤敏感性的调节作用

目的:观察CD44反义寡核苷酸调节人低分化黏液腺胃癌MGC80-3细胞Fas分子和凋亡抵抗基因bc l-2的表达水平,提高免疫效应细胞杀伤敏感性的作用和机制。方法:RT-PCR法检测CD44、bc l-2 mRNA的表达水平。MTT法检测CD3AK杀伤活性。流式细胞术检测细胞表面CD44及Fas、FasL蛋白表达水平。结果:CD44反义寡核苷酸(1.6μmol/L)处理后,明显地抑制MGC80-3细胞CD44 mRNA和蛋白表达水平,在CD44配体低分子量透明质酸(HA)存在下,使MGC80-3表面下调的Fas分子显著增高,表达率从6.69%提高到16.81%(P<0.01)。CD3AK对反义寡核苷酸处理的MGC80-3细胞杀伤活性显著增高,并呈效靶比依赖效应(P<0.01)。MGC80-3细胞bc l-2 mRNA的相对表达定量值由1.06降至0.32。结论:CD44反义寡核苷酸可通过抑制MGC80-3细胞CD44 mRNA和蛋白表达,上调Fas分子的表达,下调凋亡抵抗基因bc l-2的表达,并提高其对免疫效应细胞的杀伤敏感性。

c-myc反义寡核苷酸对肿瘤细胞表面抗原和对CD_3AK杀伤敏感性的调节作用

目的 :观察c myc反义寡核苷酸上调人高转移性肺巨细胞腺癌PG细胞表面抗原分子的表达水平 ,提高免疫效应细胞杀伤敏感性的作用和机制。方法 :RT PCR方法检测c mycmRNA表达水平的变化。MTT法检测细胞增殖活性和CD3AK杀伤活性的变化。流式细胞术检测细胞表面抗原表达的变化以及c myc蛋白表达水平的变化。结果 :c myc反义寡核苷酸(1 μmol L) 明显地抑制PG细胞c mycmRNA和蛋白表达水平 ,显著提高细胞表面HLA ABC、ICAM 1分子的表达 ,其表达率分别从 68 44%、38 40 %增高到 83 1 6 %和 42 0 9% (P <0 0 1 )。CD3AK对反义寡核苷酸处理的PG细胞的不同效靶比杀伤活性 ,分别从 40 0 %、65 0 %、74 0 %增高到 52 0 %、74 0 %、91 0 % (P <0 0 1 )。结论 :c myc反义寡核苷酸通过抑制PG细胞c mycmR NA和蛋白表达 ,上调PG细胞表面HLA ABC、ICAM 1分子的表达水平 。

Tiam-1反义基因抗肿瘤侵袭转移作用的研究

目的:从基因—蛋白—细胞效应多层次水平,观察Tiam-1反义基因下调肿瘤细胞内转移相关基因Tiam-1 mRNA和调节细胞骨架结构的Rho蛋白表达水平,探讨遏制肿瘤侵袭转移的作用和机制。方法:采用反义核酸技术合成Tiam-1反义寡核苷酸,硫代化修饰与脂质体形成复合物(Tiam-1 ASODNS-Lf),转导入人高转移巨细胞肺腺癌PG细胞。采用RT-PCR技术检测Tiam-1的表达水平,流式细胞术检测Rho蛋白表达水平,Matrigel体外转移模型检测PG细胞的侵袭转移力。结果:Tiam-1 ASODNS-Lf抑制PG细胞Tiam-1 mRNA表达水平,其相对表达值从0.86下降为0.38;显著抑制PG细胞内Tiam-1介导的信号传递相关Rho蛋白表达水平,其表达率从27.96％降至16.86％(P<0.001)。显著抑制穿过人工基底膜的侵袭转移PC细胞数,从945±40下降为649±35(P<0.05)。结论:Tiam-1反义基因下调PG细胞中侵袭诱导基因mRNA表达及其介导的信号传递蛋白Rho的表达,从而遏制其侵袭和转移能力。

泌尿生殖系肿瘤高危HPV感染状况的研究

为探讨高危HPV16、18在泌尿生殖道若干源于上皮性肿瘤中的感染状况及可能的病因学作用。我们选HPV16、18E6／E7的特异引物对，经PCR扩增技术对73例宫颈癌、20例慢性宫颈炎、3例正常膀胱组织进行HPV16、18DNA检测；采用一系列分子生物学手段制备游离HPV16、18DNA片段，经随机引物法标记成简便、

膀胱癌人乳头瘤病毒感染与Ha-ras、p53、RB基因变异及其临床意义的研究

采用分子杂交、PCR-SSCP技术检测了39例膀胱癌及7例正常膀胱组织中HPV16、18感染及Ha-ras、p53、RB基因变异,并结合临床分期、病理分级等参数进行了综合分析.结果表明,膀胱癌组织中HPV16、18感染率及Ha-ras、p53、RB基因变异率分别为61.5%、36%、30.8%及15.4%;HPV阳性率与分级分期、p53基因突变与HPV感染呈明显负相关;Ha-ras、p53基因突变率与分级分期正相关,其中Ha-ras基因在复发肿瘤的突变率显著高于原发肿瘤;部分标本同时呈HPV感染与p53基因突变、Ha-ras与p53基因突变.提示高危HPV感染和Ha-ras、p53、RB基因变异及相互作用在很大程度上参与了膀胱癌的发生及演变,并与其生物学行为密切相关,有望成为判断肿瘤恶性程度、自然病程及预后的估价指标.

瞬时转染CD44反义寡核苷酸抑制人胃癌MGC80-3细胞增生并诱导凋亡

目的:研究CD44反义寡核苷酸(CD44ASODN)对人胃癌MGC80-3细胞的增生抑制和诱导凋亡的作用和机制. 方法:设计并合成CD44SODN,脂质体介导转入MGC80-3 胃癌细胞,采用流式细胞术(FACS)检测CD44、Fas的表达及细胞凋亡;RT-PCR法检测CD44mRNA的表达;MTT 法检测细胞增生. 结果:CD44ASODN(1.6μmol/L)明显地抑MGC80-3细胞CD44mRNA和蛋白表达水平.CD44ASODN作用MGC80-3 细胞48 h后,细胞的增生呈现明显的抑制作用,其抑制率为31.0%,72,96 h的抑制率分别为46.3%、49.6% (P<0.01),其增生抑制作用呈时间依赖效应.在CD44配体低分子质量透明质酸存在的环境中,CD44ASODN能显著增高细胞表面Fas分子的表达,表达率从6.7%提高为16.8% (P<0.01),并显著地增加MGC80-3细胞对FasmAb诱导凋亡的敏感性,凋亡率从0增加到26.5%(P<0.01). 结论:CD44反义寡核苷酸通过抑MGC80-3细胞CD44m RNA和蛋白表达,抑制MGC80-3细胞的增生,增高细胞表面Fas的表达及MGC80-3细胞对FasmAb诱导凋亡的敏感性,逆转胃癌细胞的免疫逃逸作用.

宫颈癌细胞细胞核DNA含量及形态的定量分析

宫颈癌细胞细胞核ＤＮＡ含量及形态的定量分析郭鸣，崔正言，赵温利，温培娥，崔树龄山东省医学科学院基础医学研究所免疫室（济南市２５０００１）细胞核ＤＮＡ是细胞增殖的物质基础，其含量与倍性特征直接反映细胞增殖的活跃程度与分化等级。因此，细胞核ＤＮＡ含量的变...

C-Ha-ras-1癌基因在人宫颈癌发生中的作用

Ha-ras癌基因首先在膀胱瘤细胞系中发现,以后相继在许多肿瘤中被鉴定出来。为了探讨C-Ha-ras-1癌基因在宫颈疾患中的激活状况,我们对宫颈疾患病人宫颈活检组织DNA中C-Ha-ras-1癌基因进行了检测,现将结果报告如下。

人乳头瘤病毒感染、p53 基因突变与子宫颈癌的相关性研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）、单链构像多态性（ＳＳＣＰ）分析银染色法检测了６１例子宫颈癌、５例子宫颈间变、１４例慢性子宫颈炎组织中１６、１８型人乳头瘤病毒（ＨＰＶ１６、１８）感染及ｐ５３基因５、６、７、８外显子的变异。结果显示，子宫颈癌、子宫颈间变及慢性子宫颈炎组织中ＨＰＶ１６、１８阳性率分别为８２％、４０％及１４．３％（Ｐ＜０．０５），子宫颈癌组织中ｐ５３基因突变阳性率为２０％，而子宫颈间变及慢性子宫颈炎组织中未见有突变，其中１２例突变阳性的癌组织中９例呈ＨＰＶ阴性，３例呈ＨＰＶ阳性。提示ＨＰＶ１６、１８感染在子宫颈癌发生中起重要的病因学作用；ｐ５３基因变异可能是部分子宫颈癌变的一个重要原因；高危ＨＰＶ除了通过Ｅ６／ｐ５３蛋白复合物形成使ｐ５３蛋白失活的致癌途径外，可能还存在通过ｐ５３基因突变的致癌途径。

端粒酶抑制剂与肿瘤生物治疗

肿瘤治疗的理想靶点是寻找肿瘤细胞生长所必需而又不存在于正常细胞的细胞成分。有关研究发现端粒酶特异性地表达于多数肿瘤细胞，为肿瘤细胞无限增殖所必需，是一个广泛的肿瘤标志和较为理想的通用癌靶。

微卫星不稳定性和杂合性丢失与宫颈癌相关性的研究

目的 :探讨染色体微卫星不稳定性 (MSI)及杂合性丢失 (lossofheterozygosity ,LOH)在宫颈癌的发生及发展的相关性。方法 :运用p53(D17S786)、9p2 1(D9S171) 2对微卫星标志 ,结合PCR银染技术 ,分别检测 4 8例宫颈癌组织、癌旁组织及周围静脉血DNA的MSI(microsatelliteinstability)和LOH及其与临床分期和病理分级的关系。结果 :4 8例宫颈癌组织的 2个位点进行了微卫星MSI和LOH多态性分析 ,分别为 56%、2 5% ,临床病理分级 (P <0 0 5) ,不同病理分级的统计学分析差异有显著性。结论 :p53(D17S786)、9p2 1(D9S171) 2个不同的位点 17号。

人胎胰岛冷冻保存的实验研究

报告了一种在无速率冷冻装置条件下获得保持较高成活率和功能的胰岛冻存方法。冻存胰岛复苏后活性测定结果表明，（１）胰岛成活率为８５％～９０％；（２）保持了胰岛素的分泌功能和对葡萄糖的反应力；（３）β细胞可进行旺盛的胰岛素生物合成；（４）仍保持完整的细胞结构和分泌结构。提示人胚胎胰岛在冻存后仍有与新鲜胰岛相似的功能和活性。

ICA,PJM逆转肿瘤细胞恶性表型及其机制的研究

目的:研究ICA,PJM逆转肿瘤细胞恶性表型,提高免疫效应细胞识别和杀伤的作用和机制。方法:MTT法检测ICA,PJM对PG细胞增殖的影响以及对CD3AK杀伤敏感性的影响;RT-PCR法检测ICA,PJM对bcl-2和c-fos基因mRNA表达水平的影响;流式细胞术检测细胞表面HLA-A,B,C抗原表达的变化以及c-fos,bcl-2蛋白表达水平的变化。结果:ICA,PJM对PG细胞有明显的增殖抑制作用,可以提高细胞表面HLA-A,B,C分子的表达和c-fos蛋白的表达,抑制bcl-2基因的表达,提高CD3AK细胞对PG细胞的杀伤活性。结论:ICA,PJM可以逆转肿瘤恶性表型,提高免疫效应细胞对肿瘤细胞的识别和杀伤。

斑点分子杂交检测HPV感染与宫颈癌的关系

采用DNA-DNA分子杂交技术,对经病理组织学确诊的慢性宫颈炎、宫颈癌和正常宫颈的宫颈活检组织中HPV6、HPV11,HPV16、HPV18型DNA进行同源序列检测。结果表明HPV6、HPV11、HPV16、HPV18型DNA的检出率在正常宫颈均为0;在慢性宫颈炎分别为16.09%、12.64%、11.49%、3.45%;在宫颈癌组分别为3.96%、1.98%、46.53%、7.92%。在宫颈癌组HPV16、HPV18型均高于慢性宫颈炎组,HPV16型差异达到显著性(P<0.01)。经线性趋势分析,HPV16型与宫颈疾患存在显著的线性趋势关系(P<0.001),即HPV16型感染率升高,宫颈癌的发病亦升高。在慢性宫颈炎组HPV6、HPV11高于宫颈癌组。本结果进一步提示HPV16、HPV18型主要存在于癌组织,HPV6、HPV11型主要存在于宫颈良性疾病。

应用聚合酶链反应（PCR）技术诊断生育期妇女弓形虫病的研究

应用聚合酶链反应（ＰＣＲ）技术诊断生育期妇女弓形虫病的研究温培娥赵温利崔树龄郭鸣崔正言山东省医学科学院基础医学研究所（济南２５００６２）孕妇在孕期，尤其是妊娠早期感染弓形虫可引起死胎、流产、早产、胎儿先天畸形和新生儿先天性感染等严重后果，因此，弓形虫...