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小细胞肺癌PGRP基因的克隆及疫苗构建 被引量:2
1
作者 周小林 蘧艳峰 +2 位作者 薛振伟 谷娟娟 崔梅萍 《免疫学杂志》 CAS CSCD 北大核心 2010年第9期799-803,共5页
目的构建重组质粒pcDNA3.1/PGRP,肌肉注射免疫Balb/c小鼠,探讨PGRP的基因免疫效果。方法胶回收纯化的PGRP基因片段及pcDNA3.1质粒经HindⅢ、BamHⅠ双酶切,T4DNA Ligase连接构建成重组质粒pcDNA3.1/PGRP,用PCR方法对其进行鉴定,质粒抽提... 目的构建重组质粒pcDNA3.1/PGRP,肌肉注射免疫Balb/c小鼠,探讨PGRP的基因免疫效果。方法胶回收纯化的PGRP基因片段及pcDNA3.1质粒经HindⅢ、BamHⅠ双酶切,T4DNA Ligase连接构建成重组质粒pcDNA3.1/PGRP,用PCR方法对其进行鉴定,质粒抽提后进行序列分析;于小鼠后腿双侧肌注免疫,检测各项免疫指标。结果构建的重组质粒经PCR鉴定和测序证明PGRP插入方向正确,免疫检测结果显示重组质粒激活了PGRP特异的CTL和Th1细胞,同时PGRP特异性抗体效价小幅升高。结论构建的重组质粒pcDNA3.1/PGRP具有诱导特异性体液免疫应答和细胞免疫应答的能力,可作为潜在的小细胞肺癌新型疫苗,有进一步研究的意义。 展开更多
关键词 小细胞肺癌 前胃泌素释放肽 DNA疫苗 肿瘤免疫
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合成肽抗原在戊型肝炎病毒感染诊断中的应用 被引量:1
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作者 周小林 刘云霞 +3 位作者 崔梅萍 谷娟娟 张伟 孙兰英 《病毒学报》 CAS CSCD 北大核心 2001年第2期169-171,共3页
An ELISA for the detection of anti HEV using synthetic peptide antigens was developed. The synthetic antigens were encoded by OFR2 and OFR3 genes of HEV. The purpose of this study was to determine the applicability of... An ELISA for the detection of anti HEV using synthetic peptide antigens was developed. The synthetic antigens were encoded by OFR2 and OFR3 genes of HEV. The purpose of this study was to determine the applicability of the synthetic antigens in the serodiagnosis of hepatitis E. The anti HEV detection using synthetic antigens was carried out in 47 healthy subjects and 89 patients with acute or chronic viral hepatitis. The results showed that the positive rate of anti HEV IgG in healthy subjects was 4.2%(2/47), and no IgM antibody to HEV was found. The positive rates of IgG and IgM antibodies to HEV in the hepatitis patients were 8.9% and 10% respectively. In addition, we compared the detecting efficacy of the synthetic antigens with that of the market reagent in 57 serum samples, the total coincident rate was 87.7% (50/57). All of the results accorded with the literatures reported. This study suggests that the ELISA based on the synthetic peptide antigens was specific, sensitive and convenient in diagnosis of HEV infection, it can be widely used in both clinical and epidemiological reseaches. 展开更多
关键词 戊型肝炎病毒感染 合成肽抗原 酶联免疫吸附法 诊断
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BEP2D细胞受照前后蛋白质组学研究 被引量:1
3
作者 薛振伟 周小林 +2 位作者 谷娟娟 蘧艳峰 崔梅萍 《辐射防护》 CAS CSCD 北大核心 2009年第4期237-242,共6页
本研究利用蛋白质组学技术对受1.5Gy、3Gy γ射线照射的人支气管上皮(BEP2D)细胞和未经照射的人支气管上皮细胞蛋白差异表达谱进行了分析与鉴定。研究结果表明:2-D电泳后在分子量14.4~94kD,等电点3~10范围内分离出约1000多个不同蛋白... 本研究利用蛋白质组学技术对受1.5Gy、3Gy γ射线照射的人支气管上皮(BEP2D)细胞和未经照射的人支气管上皮细胞蛋白差异表达谱进行了分析与鉴定。研究结果表明:2-D电泳后在分子量14.4~94kD,等电点3~10范围内分离出约1000多个不同蛋白质斑点。凝胶图象显示1.5Gy的γ射线照射后与对照组相比有15个蛋白点上调,104个下调;3Gy的γ射线照射后有26个蛋白点上调,144个下调;二个不同照射剂量共同表达的差异蛋白点有18个,其中上调的有3个,下调的有15个。通过对选取的10个蛋白点进行质谱分析,有2个蛋白点(样品D和样品660)经检索鉴定为肌球蛋白轻链(MLC)。这些蛋白表达量的改变可能与辐射诱发肺部肿瘤的发生有关,为进一步研究肺癌的发病机理提供了一定的基础。 展开更多
关键词 蛋白质组 BEP2D细胞 肌球蛋白轻链 Γ射线
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抗-ProGRP单克隆抗体的筛选及其在小细胞肺癌鉴别诊断中的意义 被引量:2
4
作者 蘧艳峰 周小林 +2 位作者 崔梅萍 薛振伟 谷娟娟 《辐射防护通讯》 2010年第1期40-43,共4页
目的筛选与小细胞肺癌(SCLC)组织胃泌素释放肽前体(ProGRP)抗原具有高亲和力的抗-ProGRP单克隆抗体,探讨抗-ProGRP单克隆抗体在小细胞肺癌临床鉴别诊断中的意义。方法运用免疫组织化学方法筛选高亲和力抗-ProGRP单克隆抗体;利用筛选出... 目的筛选与小细胞肺癌(SCLC)组织胃泌素释放肽前体(ProGRP)抗原具有高亲和力的抗-ProGRP单克隆抗体,探讨抗-ProGRP单克隆抗体在小细胞肺癌临床鉴别诊断中的意义。方法运用免疫组织化学方法筛选高亲和力抗-ProGRP单克隆抗体;利用筛选出的高亲和力抗体分别与SCLC、NSCLC、肺良性肿瘤组织切片进行抗原抗体反应,检测ProGRP抗原的阳性表达率。结果抗-ProGRP单克隆抗体V-B3与SCLC组织ProGRP抗原的亲和力最高。21例SCLC组织,阳性表达率为90.5%;28例NSCLC组织,阳性表达率为28.6%;23例肺良性疾病组织,阳性表达率为8.7%。结论应用免疫组织化学方法检测SCLC组织中ProGRP抗原的表达,可以对SCLC进行临床鉴别诊断。 展开更多
关键词 胃泌素释放肽前体 小细胞肺癌 铀矿工 免疫组化
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γ射线辐照对BEP2D细胞蛋白质组的影响
5
作者 薛振伟 周小林 崔梅萍 《癌变.畸变.突变》 CAS CSCD 2011年第6期425-428,433,共5页
目的:利用蛋白质组学方法,研究与人永生化支气管上皮细胞(BEP2D细胞)辐照相关的差异蛋白质,寻找辐射致肺癌早期诊断和治疗的新指标。方法:分别培养并收集了0、1.5和3.0 Gyγ射线辐照24 h后的BEP2D细胞样品,用双向凝胶电泳技术分离照射... 目的:利用蛋白质组学方法,研究与人永生化支气管上皮细胞(BEP2D细胞)辐照相关的差异蛋白质,寻找辐射致肺癌早期诊断和治疗的新指标。方法:分别培养并收集了0、1.5和3.0 Gyγ射线辐照24 h后的BEP2D细胞样品,用双向凝胶电泳技术分离照射组与对照组细胞样品中的总蛋白质,应用基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)得到相应的肽质量指纹图,并最终鉴定差异蛋白质。结果:质谱鉴定获得10张肽质量指纹图,经数据库搜索后8个蛋白点被初步鉴定(2个蛋白点无结果),其中1个蛋白点重复。用Mascot软件查询NCBInr数据库初步鉴定出7种差异表达的蛋白质,即亲环素A、肌球蛋白轻链2、细胞角蛋白9、α-烯醇酶、磷酸丙糖异构酶1、Makorin环指蛋白1、c-myc启动子结合蛋白1。结论:所鉴定的7种蛋白与辐射诱导肺癌的发生、发展过程密切相关,为寻找辐射致肺癌早期诊断和治疗的新靶点提供了理论依据。 展开更多
关键词 蛋白质组 BEP2D细胞 γ射线 亲环素A 肌球蛋白轻链2
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^(60)Coγ射线诱导BEP2D细胞蛋白质表达的改变
6
作者 薛振伟 周小林 +1 位作者 崔梅萍 杨甲桥 《辐射防护通讯》 2010年第4期7-9,40,共4页
利用双向凝胶电泳和质谱技术,研究人支气管上皮细胞(BEP2D细胞)经60Coγ射线照射后细胞蛋白质表达的改变。结果表明:受照BEP2D细胞蛋白质表达发生了改变,共同差异表达的蛋白质点上调的有3个,下调的有1个;通过质谱分析和数据库检索,有2... 利用双向凝胶电泳和质谱技术,研究人支气管上皮细胞(BEP2D细胞)经60Coγ射线照射后细胞蛋白质表达的改变。结果表明:受照BEP2D细胞蛋白质表达发生了改变,共同差异表达的蛋白质点上调的有3个,下调的有1个;通过质谱分析和数据库检索,有2个蛋白质点(样品D和样品660)经检索鉴定为肌球蛋白质轻链(MLC2和MLC3),其中MLC2蛋白质的表达量随着剂量的升高而增高。这些蛋白质的高表达可能与辐射诱发肺部肿瘤有关。 展开更多
关键词 人肺永生化支气管上皮细胞 蛋白质组学 差异表达 凝胶电泳 质谱分析
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辐射诱导BEP2D细胞蛋白质表达的改变
7
作者 薛振伟 周小林 崔梅萍 《辐射防护通讯》 2012年第1期13-17,共5页
利用双向凝胶电泳和基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术,研究与人肺永生化支气管上皮细胞(BEP2D细胞)辐照相关的差异蛋白质,寻找辐射致肺癌早期诊断和治疗的新指标。结果表明,提取样品蛋白进行二维凝胶电泳,找到差异... 利用双向凝胶电泳和基质辅助激光解析电离飞行时间质谱(MALDI-TOF-MS)技术,研究与人肺永生化支气管上皮细胞(BEP2D细胞)辐照相关的差异蛋白质,寻找辐射致肺癌早期诊断和治疗的新指标。结果表明,提取样品蛋白进行二维凝胶电泳,找到差异表达蛋白质点约18个,质谱鉴定获得10张肽质指纹图,经数据库搜索后初步鉴定差异表达的蛋白质有7种,即亲环素A、肌球蛋白轻链2、细胞角蛋白9、α-烯醇酶、磷酸丙糖异构酶1、MKRN1、c-myc启动子结合蛋白1。该7种蛋白质与辐射诱导肺癌的发生、发展过程密切相关。 展开更多
关键词 人肺永生化支气管上皮细胞 蛋白质组 差异表达
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蛋白质组学及其在肺癌研究中的应用
8
作者 薛振伟 周小林 崔梅萍 《辐射防护通讯》 2011年第5期31-35,共5页
蛋白质组学技术在肺癌疾病研究中的广泛应用,为寻找辐射致肺癌早期诊断和治疗的新指标,以及在辐射防护领域采用蛋白质组学技术对辐射致肺癌进行系统的研究分析奠定了基础。本文介绍了蛋白质组学及其技术平台,以及蛋白质组学在肺癌研究... 蛋白质组学技术在肺癌疾病研究中的广泛应用,为寻找辐射致肺癌早期诊断和治疗的新指标,以及在辐射防护领域采用蛋白质组学技术对辐射致肺癌进行系统的研究分析奠定了基础。本文介绍了蛋白质组学及其技术平台,以及蛋白质组学在肺癌研究中的应用现状和展望。 展开更多
关键词 蛋白质组学 肺癌 辐射防护
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人肌红蛋白基因的克隆、表达及其抗体制备 被引量:3
9
作者 崔大伟 王伟 +2 位作者 周小林 谷娟娟 崔梅萍 《中国生物制品学杂志》 CAS CSCD 2007年第3期166-169,共4页
目的克隆、表达人肌红蛋白基因,并制备人肌红蛋白多克隆抗体。方法应用RT-PCR方法从人骨骼肌总RNA中扩增肌红蛋白基因(hMb)编码序列,克隆入原核表达载体pRSETc中,并在大肠杆菌E.coliBL21(DE3)中诱导表达。表达产物经亲和层析和凝胶层析... 目的克隆、表达人肌红蛋白基因,并制备人肌红蛋白多克隆抗体。方法应用RT-PCR方法从人骨骼肌总RNA中扩增肌红蛋白基因(hMb)编码序列,克隆入原核表达载体pRSETc中,并在大肠杆菌E.coliBL21(DE3)中诱导表达。表达产物经亲和层析和凝胶层析纯化。纯化蛋白免疫小鼠,制备多克隆抗体,并用Westernblot检测其特异性。结果测序表明RT-PCR所得的肌红蛋白基因hMb序列与GenBank(NM203377)中报道的序列一致。该基因在大肠杆菌E.coliBL21(DE3)中获得高效可溶性表达,表达产物经纯化,获得电泳纯的蛋白。重组人肌红蛋白的表达水平达12.8%。每升发酵液中可获得纯化的目的蛋白6.438mg。Western blot分析表明该蛋白为融合有6个His的hMb蛋白。ELISA法测得抗体效价为1∶12800,Western blot证实其具有较好的特异性。结论已成功克隆人肌红蛋白基因,在大肠杆菌中获得了可溶性表达,并制备了抗人肌红蛋白的多克隆抗体。 展开更多
关键词 肌红蛋白 基因克隆 原核表达 多克隆抗体
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胃泌素释放肽前体双抗体夹心酶联免疫吸附法的建立及其应用 被引量:4
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作者 楚振宇 周小林 +3 位作者 薛振伟 崔梅萍 蔺苏琴 李瑞华 《医学研究生学报》 CAS 北大核心 2015年第1期70-73,共4页
目的胃泌素释放肽前体(pro-gastrin releasing peptide,PGRP)作为小细胞肺癌肿瘤标志物的应用价值已成为近年来的研究热点,文中建立新型双抗体夹心酶联免疫吸附法(enzyme-linked immune sorbent assay,ELISA)方法检测患者血清PGRP抗原... 目的胃泌素释放肽前体(pro-gastrin releasing peptide,PGRP)作为小细胞肺癌肿瘤标志物的应用价值已成为近年来的研究热点,文中建立新型双抗体夹心酶联免疫吸附法(enzyme-linked immune sorbent assay,ELISA)方法检测患者血清PGRP抗原浓度。方法通过人工合成PGRP抗原决定簇对本实验室自行研制的单克隆抗体进行筛选;采用改良过碘酸钠法对筛选到的单克隆抗体进行辣根过氧化物酶标记,建立PGRP双抗体夹心酶联免疫吸附检测法;并与IBL公司PGRP试剂盒对比检测结果。结果新型ELISA检测标准抗原浓度范围为33~1.7×104pg/m L,检测小细胞肺癌患者血清PGRP浓度灵敏度100%,特异度98.4%,IBL试剂盒检测灵敏度100%,特异度92.2%。结论新型ELISA方法可用于小细胞肺癌患者血清PGRP浓度检测。 展开更多
关键词 胃泌素释放肽前体 辣根过氧化物酶 单克隆抗体 酶联免疫吸附试验 肿瘤
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《职业教育专业目录(2021)》背景下专本衔接的高等数学教材建设研究
11
作者 李聪聪 张志斌 +1 位作者 崔梅萍 马玉珍 《武汉职业技术学院学报》 2022年第6期80-84,共5页
在《职业教育专业目录(2021)》(以下简称“新版《目录》)”背景下,从职业本科人才培养目标、生源差异性对职业本科数学教材的不同要求、专本衔接《高等数学》教材对教师和教法的新要求等方面,对高职专科和职业本科的数学教学如何能够有... 在《职业教育专业目录(2021)》(以下简称“新版《目录》)”背景下,从职业本科人才培养目标、生源差异性对职业本科数学教材的不同要求、专本衔接《高等数学》教材对教师和教法的新要求等方面,对高职专科和职业本科的数学教学如何能够有机衔接这一新问题提出若干建议和解决策略。 展开更多
关键词 职业教育专业目录(2021) 专本衔接 职业本科 高等数学 教材建设
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抗前胃泌素释放肽单克隆抗体的纯化及体外对小细胞肺癌的活性 被引量:2
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作者 周小林 薛振伟 +2 位作者 刘增礼 徐巧玲 崔梅萍 《肿瘤研究与临床》 CAS 2011年第7期467-470,共4页
目的探讨亲和层析法纯化抗前胃泌素释放肽(PGRP)单克隆抗体(MAb)的效果,为该法纯化其他抗体提供数据依据。方法采用蛋白A-琼脂糖亲和层析法纯化含有MAb的腹腔积液,并用SDS—PAGE和酶联免疫吸附(ELISA)法分别检测其纯度和效价,... 目的探讨亲和层析法纯化抗前胃泌素释放肽(PGRP)单克隆抗体(MAb)的效果,为该法纯化其他抗体提供数据依据。方法采用蛋白A-琼脂糖亲和层析法纯化含有MAb的腹腔积液,并用SDS—PAGE和酶联免疫吸附(ELISA)法分别检测其纯度和效价,用流式细胞术和免疫组织化学法检测其对小细胞肺癌细胞株NCI—H446的组织切片的生物功能。结果亲和层析法纯化前小鼠腹腔积液蛋白质质量浓度平均为23.62mg/ml;纯化前、后蛋白总量分别为148.79和146.67mg,回收率为98.58%。腹腔积液中MAb质量浓度平均为5.21mg/ml;纯化的MAb纯度达95%以上。纯化后抗体免疫学活性均高于纯化前,提高了6.90~15.40倍。结论蛋白A-琼脂糖亲和层析法可快速、高效地从小鼠腹腔积液中纯化抗PGRPMAb,且抗体具有较高的纯度,免疫学活性明显提高,能够选择性的和小细胞肺癌细胞的PGRP结合。 展开更多
关键词 色谱法 亲和 抗体 单克隆 纯化
原文传递
基础性、实用性和发展性的统一
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作者 崔梅萍 《民主》 2021年第4期62-63,共2页
经济数学课程是高职院校经济管理类专业必修课,对于学生思维能力的培养和后续专业课程的学习有非常重要的意义。随着高职教育的不断发展与人才培养工作改革的不断深化,如何根据经济管理类专业人才培养的需要,整合能反映高职数学课程教... 经济数学课程是高职院校经济管理类专业必修课,对于学生思维能力的培养和后续专业课程的学习有非常重要的意义。随着高职教育的不断发展与人才培养工作改革的不断深化,如何根据经济管理类专业人才培养的需要,整合能反映高职数学课程教学基本要求的知识点、能力点和教育思想。 展开更多
关键词 高职教育 高职院校 经济管理类专业 人才培养 教学基本要求 实用性 思维能力的培养 经济数学课程
原文传递
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