3株魏斯氏菌的分离鉴定与生物学特性研究

目的 对泡菜发酵初期魏斯氏菌进行分离鉴定,并探究其安全特性和益生特性。方法 采用平板对细菌进行分离,进行分离菌株生理生化鉴定和16S rDNA测序鉴定,检测其代谢产物毒性,抗生素敏感性,耐药基因,评价细菌的耐酸、耐胆盐、耐人工肠液、黏附能力、对胆固醇及甘油三酯的降解能力、抗氧化能力以及抑菌能力。结果 共筛选出3株魏斯氏菌,命名为融合魏斯氏菌C13、食窦魏斯氏菌G232和W212;3株菌代谢产物无毒性,对14类21种抗生素表现出不同程度耐药,耐药基因检测C13携带四环素类耐药基因(tetM), G232和W212携带磺胺类耐药基因(sulⅡ);3株菌能耐受pH 2~4和3.0 g/L以下的胆盐,在人工肠液中3 h后存活率超过76.80%;3株菌的黏附能力好,疏水性为60.47%~62.69%,自凝聚率为43.76%~52.55%,共凝聚率为43.20%~61.58%;对胆固醇及甘油三酯的降解主要在前15 h;表现出一定的抗氧化能力,对1,1-二苯基-2-三硝基苦肼自由基清除率较高(清除率25.69%~58.12%),对超氧阴离子自由基清除率相对较低(10.08%~35.29%);3株菌对志贺氏菌、大肠杆菌等致病菌抑菌活性好(抑菌圈直径18.22~42.18 mm)。结论 本研究结果表明筛选的3株魏斯氏菌有较好的安全性和一定的益生特性,为将来魏斯氏菌在实际生产的应用提供基础数据。

竞争抑制酶联免疫吸附法快速检测金黄色葡萄球菌肠毒素P

目的建立竞争抑制酶联免疫吸附法(enzyme linked immunosorbent assay,ELISA)快速检测金黄色葡萄球菌肠毒素P(staphylococcal enterotoxin P,SEP)的分析方法。方法根据ELISA的检测程序,利用交叉方阵滴定法确定SEP抗原的最佳包被浓度及单克隆抗体的最佳倍比稀释浓度,再对辣根过氧化物酶标记的羊抗鼠IgG(HRP-IgG)最佳稀释浓度及最佳反应时间进行筛选,然后通过测定450 nm处不同SEP抗原包被条件(包被液类型、包被环境)、封闭液类型及浓度、封闭时间、竞争反应温度、反应方式(预混反应、直接反应)下的OD值对检测条件进行优化,最后用灵敏度、批内变异、批间变异和加标样品回收率对方法进行评价。结果SEP抗原最佳包被浓度为2.500μg/mL,鼠单抗血清稀释度1:6000(V:V),酶标抗稀释度1:3000(V:V);反应1 h,最佳包被条件为磷酸盐缓冲液4℃过夜,10%脱脂乳封闭2h,37℃直接竞争反应。此方法的线性回归方程为:Y=0.4166X-0.7415(r^(2)=0.9908),灵敏度为0.954μg/mL,批内及批间变异系数均低于3%,对人工污染的脱脂牛奶、LB(Luria-Bertani)液体培养基中肠毒素蛋白SEP的回收率高于98%。结论该方法具有较好的回收率和稳定性,可应用于肠毒素蛋白SEP的快速检测。