马铃薯再生体系的建立

马铃薯再生体系的建立是进行马铃薯遗传转化的前提条件。本研究以马铃薯克新1号为植物材料,对马铃薯愈伤组织的诱导、不定芽的分化进行了最佳培养基优化。结果表明,马铃薯诱导愈伤组织的最佳培养基激素浓度是2.5mg/L 6-BA、0.2mg/L NAA,且茎段的诱导率要高于叶片的诱导率。不定芽分化的最佳培养基激素浓度为2.0mg/L 6-BA、0.1mg/L NAA、5.0 mg/L GA3,诱导率为30%,诱导的不定芽在0.2 mg/L NAA生根培养基中可以正常生根。本研究初步建立了马铃薯再生体系,为后续的金黄色葡萄球菌奶牛乳腺炎转基因马铃薯疫苗的制备奠定了基础。

致病疫霉菌株交配型的检测及其检测方法的比较

致病疫霉(Phytophthora infestans)是马铃薯晚疫病的病原体,可导致马铃薯大面积减产。致病疫霉的有性生殖可以产生卵孢子,由于其抗逆性较强,利于致病疫霉渡过不利的生存环境,给马铃薯晚疫病的有效防治带来巨大的困难。致病疫霉的有性生殖属于异宗配合,即A1、A2交配型同时培养时才会产生卵孢子。因此,快速而有效地检测致病疫霉菌株的交配型将为致病疫霉有性生殖分子机理的研究及致病疫霉的防治奠定基础。通过直接配对法、纸盘法和分子标记法三种方法,对5株来源不同的致病疫霉菌株进行了交配型检测。三种方法的检测结果均表明,菌株HQK8-3、2PO-D、USA1的交配型与ATCC标准菌株64093的交配型一致,为A1交配型,而菌株2PO82001、P7723的交配型与ATCC标准菌株32835的交配型一致,为A2交配型。说明三种方法均可有效鉴定致病疫霉交配型,但三种方法各有优缺点,应根据实验条件,采取合适的方法进行菌株交配型测定。

马铃薯晚疫病菌拮抗粘细菌YR–35的分离鉴定及其代谢产物稳定性

从乌拉山镇的农田土壤中分离获得致病疫霉的高效拮抗菌株YR-35,通过形态特征、生理生化特征以及16S rDNA序列分析将其鉴定为变绿色粘球菌Myxococcus virescens。菌株YR-35对马铃薯晚疫病致病菌菌丝生长抑制率高达96.67%。抗菌活性物质在30～80℃处理1 h后菌丝生长抑制率可达21.70%,高于80℃时活性逐渐下降,90℃处理后菌丝生长抑制率仍然可达15.38%。活性物质在pH 5.0～9.0条件下菌丝生长抑制率保持在25.27%以上,当pH〈5.0或pH〉9.0时,抗菌活性显著降低。活性物质不能被蛋白酶降解,不受紫外线、自然光照射的影响。对马铃薯离体叶片的生防效果检测表明,菌株YR-35的发酵无菌液处理组叶片相对病斑面积仅为0.57%,对照组的相对病斑面积高达87.72%。菌株YR-35的发酵无菌液可以有效抑制致病疫霉侵染马铃薯叶片。本研究首次发现变绿色粘球菌对致病疫霉有显著拮抗活性,为研发有效防治马铃薯晚疫病的生物农药奠定了基础。

致病疫霉产孢子囊培养基及诱导方法的筛选

致病疫霉(Phytophthora infestans)A2交配型菌株P7723不易产生孢子囊。为了获得大量的孢子囊,试验研究比较了5种不同培养基及7种不同诱导方法对致病疫霉孢子囊产量的影响。研究结果表明:5种培养基中只有燕麦培养基(OMA)和大豆培养基(BA)能产生孢子囊,分别为(106±6.29)、(273±6.86)个/cm^2,其余培养基均未产生孢子囊。在7种诱导孢子囊产生的方法中,40℃处理、菌丝丛水培处理(10%V8)、皮氏溶液处理和土壤浸出液处理4种方法能诱导原本不产生孢子囊的3种培养基产生孢子囊;其中,40℃处理的诱导效果最好。此外,40℃处理也使原本产生孢子囊的OMA、BA培养基上的孢子囊量显著增加。在所有培养基的不同处理中,40℃处理的CA培养基上菌株产生的孢子囊量最多,可达到(767±7.98)个/cm^2。试验为研究致病疫霉菌生长发育过程中的基因表达分析及遗传转化奠定了基础。

金黄色葡萄球菌fnbB基因D2-D3编码区克隆及其植物表达载体构建

金黄色葡萄球菌是引起奶牛乳腺炎的主要致病菌,其表面的纤连素结合蛋白(FnBP)在介导金黄色葡萄球菌侵入寄主细胞的过程中发挥着重要作用。因此,FnBP成为奶牛乳腺炎亚单位疫苗研究中的重要靶标。本研究根据Genbank中纤连素结合蛋白B基因(fnbB)D区编码序列设计引物,以金黄色葡萄球菌基因组DNA为模板,PCR扩增D2-D3区,将该片段回收后与pCAMBIA3301植物表达载体同时进行NcoⅠ和Eco 065Ⅰ(BstEⅡ)双酶切,酶切片段回收后进行连接,将连接产物转化大肠杆菌感受态细胞,通过菌落PCR、酶切鉴定等方法筛选阳性克隆,将阳性克隆送公司测序确定DNA序列。结果表明,阅读框架正确,氨基酸序列无突变,成功构建金黄色葡萄球菌fnbB基因D2-D3区植物表达载体。该研究为研制奶牛乳腺炎转基因植物口服疫苗奠定了基础。

共情理论视域下《老年健康服务与管理》课程实践探索

随着全球人口老龄化的加剧,老年健康服务与管理的重要性日益凸显。为了满足老年人群对健康服务和管理的需求,教育改革在培养专业人员和提供相关课程方面发挥着关键作用。本研究旨在探讨共情理论在老年健康服务与管理课程实践中的应用,并评估其对学生的教育效果和实践能力的影响。对推动老年健康服务可持续发展,促进老年健康具有重要的意义。

致病疫霉拮抗菌株YR-7的分离鉴定及其活性物质

【目的】从黄河边的农田土壤中分离筛选拮抗致病疫霉的粘细菌,鉴定目标菌株,分析其发酵上清液的稳定性及对马铃薯晚疫病菌的抑制效果,为活性物质分离鉴定及抗马铃薯晚疫病菌生物农药的研发奠定基础。【方法】采用兔粪诱导法分离菌株,通过平板对峙法筛选对马铃薯晚疫病菌有拮抗作用的粘细菌,通过形态特征、生理生化特征以及16S r RNA基因序列分析对菌株进行鉴定。采用称重法测定菌株生长曲线,通过平皿法测定菌株不同生长时期发酵上清液对致病疫霉的菌丝生长抑制率和浓缩发酵上清液的稳定性。通过马铃薯离体叶片涂布浓缩发酵上清液和接种病原菌孢子悬浮液法,测定该菌株对马铃薯晚疫病的防病作用。【结果】从土壤样品中共分离获得7株粘细菌,其中4株拮抗致病疫霉,拮抗效果最强的为YR-7菌株,菌丝的生长抑制率为96%,该菌株被鉴定为Myxococcus xanthus。培养7 d后,菌株发酵上清液对致病疫霉的抑制活性趋于稳定。浓缩发酵上清液经30-50°C处理后,对致病疫霉菌丝的生长抑制率可达50.90%,高于50°C时抑菌活性逐渐下降,90°C处理后菌丝的生长抑制率仍可达25.45%。浓缩发酵上清液在p H 4.0-9.0条件下比较稳定,保持40.21%以上菌丝的生长抑制率,当p H<4.0或p H>9.0时,抗菌活性显著降低。活性物质不能被蛋白酶降解,其抗菌活性不受紫外线、自然光照射的影响。对马铃薯离体叶片的生防效果检测表明,YR-7的浓缩发酵上清液处理组叶片相对病斑面积仅为0.35%,对照组的相对病斑面积高达68.19%。【结论】粘细菌菌株YR-7可以产生抗马铃薯晚疫病菌的次生代谢产物,抗菌活性物质具有较好的稳定性,可以有效抑制致病疫霉侵染马铃薯叶片,具有开发成抗马铃薯晚疫病生物农药的潜在价值。