STAT1在宫颈病变组织中的表达及与HPV16病毒载量关系的研究

目的:探讨信号转导与转录激活因子1(signal transducer and activator of transcription 1,STAT1)表达在宫颈病变组织中的表达及其与HPV16病毒载量(VL-每个细胞病毒基因组拷贝数)的关系。方法:利用免疫组织化学方法检测宫颈病变组织中STAT1的表达;同时定量聚合酶链反应(qPCR)检测宫颈病变的HPV16病毒载量,并分析STAT1表达与HPV16病毒载量的相关性。结果:STAT1表达水平随着宫颈病变的发展而升高,呈正相关。STAT1在正常组织、低度鳞状上皮内瘤变(low grade squamous intraepithelial lesion,LSIL)、高度鳞状上皮内瘤变(highly squamous intraepithelial lesion,HSIL)、宫颈鳞状细胞癌病例中高表达比例分别为12.50%、39.29%、53.57%、88.46%。qPCR用于检测宫颈病变中HPV16含量,表明HPV16拷贝数随宫颈病变的进展逐渐增加,且宫颈癌病毒载量最高。在多变量分析中,STAT1蛋白的表达与HPV16病毒载量呈正相关。结论:STAT1的表达与宫颈病变的进展呈正相关,并且HPV16病毒载量可能影响STAT1蛋白的表达。STAT1的表达可能成为宫颈病变进展的特异性指标。

宫颈组织中Stat5b表达与宫颈病变的关系

目的研究宫颈病变组织中信号转导和转录激活因子Stat5b及其磷酸化形式p-Stat5b的表达情况及其与不同程度宫颈病变之间的关系,探讨Stat5b在宫颈病变发生、发展中的作用。方法以正常宫颈组织、低度鳞状上皮内病变(LSIL)、高度鳞状上皮内病变(HSIL)、宫颈癌组织共80例标本为研究对象,采用免疫组织化学染色评估Stat5b以及p-Stat5b的表达水平,分析其与宫颈病变程度的相关性。结果 Stat5b表达水平随宫颈病变的进展而升高,呈正相关。Stat5b在正常宫颈组织、LSIL、HSIL、宫颈癌中高表达比例分别为15.0%、0.0%、50.0%、80.0%,差异有统计学意义(P <0.05)。相反,p-Stat5b表达与宫颈病变的进展呈负相关,在正常宫颈组织、LSIL、HSIL、宫颈癌中高表达比例分别为80.0%、45.0%、5.0%、0.0%,差异有统计学意义(P <0.05)。结论 Stat5b在不同程度宫颈病变中的表达有差异,表明Stat5b信号分子可能与宫颈病变的发展有关。

3-磷酸甘油酸脱氢酶促进丝氨酸合成在肿瘤进展中的机制

丝氨酸生物合成途径活性的上调是许多癌症明显的共同特征。该途径的第一种限速酶3-磷酸甘油酸脱氢酶(PHGDH)在黑色素瘤、乳腺癌和肾癌等癌组织中高表达,对肿瘤细胞增殖、转移、侵袭有着重要作用。糖酵解中间产物3-磷酸甘油酸在PHGDH作用下,氧化为磷酸羟基丙酮酸并最终合成丝氨酸。丝氨酸转化为甘氨酸,然后在核苷酸、s-腺苷甲硫氨酸(SAM)和还原型谷胱甘肽(GSH)的合成中起着重要的作用。PHGDH有望成为肿瘤治疗的新靶点。

中国东北地区人乳头瘤病毒31基因多态性分析

目的研究中国东北地区人乳头瘤病毒31(HPV31)E6和HPV31 E7基因多态性。方法首先将从已确诊HPV31阳性患者宫颈细胞中提取的DNA,应用巢式PCR对E6和E7基因片段进行扩增并测序,再与参考序列比对找到突变位点。应用MegaX软件进行序列比对以及系统发育树的构建,应用PAML软件分析点突变中的正向选择位点,应用PSIPred server预测HPV31 E6和E7蛋白质二级结构,应用ABCPred server寻找理想的B细胞免疫表位,应用ProPred-Ⅰserver和ProPred server分别预测人类白细胞抗原(HLA)Ⅰ类和HLAⅡ类结合表位。结果成功扩增和测序HPV31 E6和E7序列各151个。与参考序列(J04353.1)比对后发现,E6基因中检测到单核苷酸突变25个,E7基因中检测到单核苷酸突变8个。系统发育分析显示,中国东北地区HPV31 E6和E7基因均以A谱系最为流行。研究观测到的大部分非同义突变存在于预测表位中。结论HPV31 E6和E7基因组在东北地区呈基因多态性分布,并以A谱系为主。

骆驼奶对DSS诱导的小鼠急性肠炎的保护作用

目的探究骆驼奶对葡聚糖硫酸钠(DSS)诱导的小鼠急性肠炎的保护作用。方法6~8周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为2组,对照组使用双蒸水灌胃,实验组使用骆驼奶灌胃,14 d后经3%DSS水溶液自由饮用诱导建立急性肠炎模型。流式细胞术分析实验组和对照组免疫细胞比例,酶联免疫吸附法测定细胞因子含量。结果相对于双蒸水对照组,骆驼奶实验组小鼠体质量下降缓慢(P<0.05),生存率提高,组织学评分下降(P<0.05),γ干扰素(IFN-γ)阳性表达的辅助性T淋巴(CD4^+IFN-γ^+)细胞比例增加(P<0.05),白细胞介素-17(IL-17)阳性表达的辅助性T淋巴(CD4^+IL-17^+)细胞比例下降(P<0.05),细胞培养上清液中IFN-γ增高(P<0.05),肿瘤坏死因子-α(TNF-α)和IL-17降低(P<0.05)。结论骆驼奶可能通过调节T细胞分化和细胞因子分泌,缓解DSS诱导的小鼠急性肠炎。

骆驼奶对噁唑酮诱导的小鼠肠炎的作用

目的探讨骆驼奶对噁唑酮诱导的小鼠肠炎模型中肠道黏膜免疫功能的调节作用。方法将40只BALB/c雄性小鼠以3%噁唑酮乙醇溶液涂搽皮肤致敏后用1%噁唑酮乙醇溶液灌肠,建立小鼠肠炎模型,分为实验组和对照组,每组20只,每天分别用骆驼奶和双蒸水灌胃。记录小鼠体质量、疾病活动指数;采用流式细胞术、ELISA、实时荧光定量PCR测定肠免疫细胞功能的改变。结果实验组与对照组相比,小鼠体质量下降减慢,疾病活动指数降低,肠道淋巴细胞中CD4^(+)CD25^(+)T细胞和CD4^(+)IFN-γ^(+)T细胞比例升高,CD4^(+)IL-17^(+)T细胞比例下降,细胞培养上清中IL-17、IL-4、IL-13浓度降低,IFN-γ浓度升高。结论骆驼奶可能通过调节T细胞增殖分化和细胞因子分泌缓解噁唑酮诱导的小鼠肠炎。

3-磷酸甘油酸脱氢酶与肿瘤关系的研究进展

肿瘤细胞代谢与正常细胞不同,为了获得其快速增殖能力所需的物质和能量,肿瘤细胞能量代谢从有氧氧化转化为有氧酵解。3-磷酸甘油酸脱氢酶(PHGDH)作为一种参与丝氨酸从头合成的关键酶,在肿瘤细胞增殖、转移过程中发挥重要作用,沉默PHGDH基因可导致肿瘤细胞增殖减少,凋亡增加,耐药性减弱。PHGDH参与乳腺癌、肺癌、黑色素瘤等肿瘤的发生发展过程,其高表达与患者生存率下降、远端转移以及肿瘤耐药等相关。未来,PHGDH有望成为肿瘤治疗的新靶点。

子宫颈病变组织中Stat5表达及其与疾病进展的关系

目的探讨信号转导和转录活化因子5(signal transducer and activator of transcription 5,Stat5)在子宫颈病变组织中的表达及与子宫颈病变程度的相关性。方法以正常子宫颈组织、低度鳞状上皮内病变(low-grade squamous intraepithelial lesions,LSIL)、高度鳞状上皮内病变(high-grade squamous intraepithelial lesions,HSIL)、子宫颈癌组织为研究对象。采用免疫组化法检测不同程度的子宫颈病变组织中Stat5a、Stat5b以及磷酸化Stat5(p Stat5)的表达。结果 Stat5a和Stat5b在LSIL组织中的表达与正常组织相比差异无显著性,但其表达水平随子宫颈病变的进展程度而升高(P <0. 01)。在子宫颈正常组织、LSIL、HSIL、子宫颈癌各组中Stat5a、Stat5b高表达所占比例分别为15. 0%(3/20)、12. 0%(3/25)、72. 0%(18/25)、100%(20/20)和15. 8%(3/19)、0(0/25)、56. 0%(14/25)、88. 9%(16/18);p Stat5表达随子宫颈病变的进展程度而降低(P <0. 01)。在子宫颈正常组织、LSIL、HSIL、子宫颈癌各组中p Stat5高表达所占比例分别为94. 7%(18/19)、84. 7%(22/26)、23. 1%(6/26)、0(0/19)。结论子宫颈病变程度不同的组织中,Stat5蛋白表达和磷酸化水平差异有显著性,提示Stat5可能与子宫颈病变的进展有关。

中国东北地区人乳头瘤病毒16型全基因组克隆及HPV16.HaCaT重组细胞模型的构建及初步鉴定

为构建含东北地区人乳头瘤病毒16型(HPV16)全基因组的HPV16.HaCaT细胞模型,收集中国东北地区HPV16单一感染患者宫颈脱落细胞,提取DNA,将HPV16全基因组分成4个区段,通过4对特异性引物对HPV16全基因组进行分段扩增,测序后进行序列拼接及核酸序列分析,克隆HPV16全基因组序列;通过细胞转染,构建含HPV16全基因组的HPV16.HaCaT重组细胞模型;利用聚合酶链式反应(PCR)和细胞免疫荧光法检测重组细胞内HPV16早期基因的表达。成功克隆出中国东北地区HPV16全基因组序列(GenBank登录号:MW320358);构建了东北地区HPV16全基因组的重组质粒及HPV16.HaCaT重组细胞模型;证明了HPV16早期基因E1^E4、E5、E6和E7在重组细胞模型内均有表达,从而获得中国东北地区HPV16全基因组序列及含有HPV16全基因组的HPV16.HaCaT重组细胞模型。

溃疡性结肠炎发病机制研究进展

溃疡性结肠炎(ulcerative colitis, UC)是一种复杂的多因素疾病,其特征为可能涉及整个胃肠道的慢性、复发性或进行性炎症。由于目前对UC发病机制的了解有限,治疗效果并不理想。尽管确切的病因仍然不清楚,但包括个人遗传易感性、外部环境、内部肠道微生物群和宿主免疫应答在内的4个因素是造成UC发病的原因,而有证据表明UC可能由遗传易感个体对肠道微生物群的异常和持续免疫反应造成。近十年来,有关UC患者的遗传学、肠道菌群和免疫力研究兴起。因此,课题组将全面综述一系列新发现,并更新这3个领域的重大进展。这些新发现将为UC的病因研究开辟新思路。

骆驼奶对小鼠肠道黏膜免疫功能的影响

目的 研究骆驼奶对小鼠肠道黏膜固有层细胞的影响.方法 单次实验中将6只6～8周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为2组,骆驼奶实验组、双蒸水（DDW）对照组.构建小鼠模型,收集肠黏膜固有层细胞（LP细胞）,使用流式细胞术对小鼠肠黏膜固有层组织中免疫细胞数量比例进行分析.酶联免疫吸附法（ELISA）测定LP细胞培养上清中IL-4、IL-10、IL-17、IFN-γ的含量.结果与双蒸水对照组相比,骆驼奶实验组小鼠肠道黏膜固有层淋巴细胞中CD4＋T细胞比例和细胞绝对数均增高,产生IFN-γ的CD4＋T细胞比例和细胞绝对数均增高,差异有统计学意义（P〈0.05）,与双蒸水对照组相比,骆驼奶组IFN-γ分泌量增加,IL-4分泌量降低,差异有统计学意义（P〈0.05）.结论骆驼奶可以促进CD4＋T细胞增殖和IFN-γ产生.提示骆驼奶对正常小鼠肠道黏膜具有调节细胞增殖分化,以及调节细胞因子分泌的免疫功能调节作用.

骆驼奶对葡聚糖硫酸钠诱导的小鼠慢性肠炎的缓解作用

为探究骆驼奶对葡聚糖硫酸钠(dextran sodium sulfate,DSS)诱导的小鼠慢性肠炎的作用,将6~8周龄雄性C57BL/6小鼠随机分为2组,对照组使用双蒸水(double distilled water,DDW)灌胃,实验组使用骆驼奶灌胃,1.5%DSS水溶液自由饮用构建慢性肠炎模型。用流式细胞术分析免疫细胞数量和比例,ELISA测定细胞因子水平。在DSS诱导的小鼠慢性肠炎模型中,骆驼奶实验组小鼠比DDW对照组小鼠体质量减轻程度得到明显改善,疾病活动指数下降,CD4^+T细胞绝对数下降,CD4^+IL-17A^+T细胞比例降低,细胞培养上清液中TNF-α、IL-6和IL-17水平降低。提示骆驼奶可调节小鼠肠道内细胞分化和细胞因子分泌,缓解DSS诱导的小鼠慢性肠炎。

骆驼奶对TNBS诱导的小鼠急性肠炎的保护作用

为探讨骆驼奶对2,4,6-三硝基苯磺酸(trinitro-benze-sulfonic acid,TNBS)诱导的小鼠急性肠炎的保护作用及相关机制,将24只6~8周龄的雄性BALB/c小鼠随机分为两组,实验组使用骆驼奶灌胃,对照组使用双蒸水灌胃,TNBS灌肠构建急性结肠炎模型。FACS检测免疫细胞百分比,ELISA测定细胞因子含量。结果显示,实验组小鼠比对照组体质量下降缓慢,组织学评分低,CD11b^(+)Gr1^(+)细胞百分比升高,CD8^(+)T细胞百分比下降,IL-17^(+)CD4^(+)T细胞百分比降低,细胞培养上清液中IL-17水平降低,IL-10水平升高。由此,骆驼奶对TNBS诱导的小鼠急性肠炎具有保护作用,可能与免疫调节有关。

辽宁省地区人乳头瘤病毒33型基因多态性分析

研究人乳头瘤病毒(Human papillomavirus,HPV)33型E6和E7基因在辽宁省地区的基因多态性分布情况,增加对HPV33基因多态性地理分布情况的了解,为HPV33的诊断,靶向药和疫苗的研发提供理论依据。使用巢式PCR扩增方法对从已确诊HPV33阳性患者宫颈细胞提取的DNA样本进行E6和E7基因的扩增并测序,随后应用MegaX软件将所得测序结果与参考序列比对确定突变位点并进行系统发育树的构建。应用PAML4.9软件中的Codeml程序找出突变中的正向选择位点。分别应用ABC Pred server,ProPred-I server和ProPred server寻找理想的B细胞免疫表位,人类白细胞抗原(Human leukocyte antigen,HLA)I类结合表位和人类白细胞抗原(HLA)II类结合表位。共得到HPV33E6和E7序列各136个。与HPV33参考序列(M12732.1)进行比对后,E6基因中观测到17个单核苷酸突变,同义突变7个,非同义突变10个。E7基因中观测到9个单核苷酸突变,其中同义突变3个,非同义突变6个。系统发育分析显示HPV33E6和E7 A谱系在中国东北地区最为流行,其次是B谱系,本研究中并未检测到C谱系。在全部E6和E7序列中仅找到K93N一个阳性选择位点位于E6基因。在HPV33E6中预测得到8个MHCI类表位,6个MHCII类表位和1个B细胞表位。HPV33E7中预测到5个MHCI类表位,6个MHCII类表位和3个B细胞表位。研究中检测到的绝大部分非同义突变存在于预测表位中。在辽宁省地区,HPV33E6和E7基因呈基因多态性分布,且A谱系为最常见谱系。研究所得结果可为HPV33检测探针、靶向药物和疫苗的研究和临床应用提供理论基础。