狗骨髓基质干细胞体外分化为肌源性细胞的初步观察

用贴壁法体外分离骨髓基质干细胞 ,实验组 5 氮胞苷诱导 ,对照组加入等量培养基 ,用相差显微镜和免疫组织化学方法观察、鉴定培养细胞。探讨成年狗骨髓基质干细胞体外诱导分化为肌细胞的可行性 ,为心肌梗死和心力衰竭的细胞移植治疗提供新的细胞系。结果表明 ,实验组诱导后 4周 ,多数培养细胞由梭形变为杆状 ,免疫组织化学检查结蛋白、平滑肌肌动蛋白和肌钙蛋白I染色阳性 ;对照组多数培养细胞为梭形 ,免疫组织化学检查结蛋白染色弱阳性 ,平滑肌肌动蛋白染色弱阳性 ,肌钙蛋白I染色阴性。结果提示 ,成年狗骨髓基质干细胞体外可诱导分化为肌源性细胞。

骨髓基质干细胞移植与心肌重建研究进展

骨髓基质干细胞是来源于骨髓的多能干细胞,在体、内外能分化成多种起源于中胚层的组织。其分化与其周围环境变化有关,可能需要一系列调控因子的参与。哺乳动物心肌从中胚层发育而来。在出生后早期,心肌细胞的增殖能力丧失,又没有相应的干细胞,损伤后心肌细胞不能再生。因而,心肌损伤后(如心肌梗死),常导致心肌细胞的不可逆性丢失和永久的功能丧失。植入外源性细胞是一个修复损伤心肌的、具有潜在临床应用价值的方法。骨髓基质干细胞在体、内外可诱导分化为肌源性细胞或心肌细胞。骨髓基质干细胞移植可以重建心肌,逆转左室重构,改善心功能,为心肌梗死提供一种新的治疗选择,有广阔的临床应用前景。

成年犬自体骨髓基质干细胞经冠状动脉移植在心梗后心肌组织内分化

目的 探讨经冠状动脉移植成年犬自体骨髓基质干细胞在心梗后心肌组织内的存活、分化情况。方法 结扎犬冠状动脉前降支制备心肌梗死模型 ;细胞移植组将体外培养、诱导的自体骨髓基质干细胞标记后在心肌梗死后 4周经冠状动脉植入心脏 ;对照组植入等量培养基 ;细胞移植 4周后取犬心脏 ,行组织学检查、免疫组织化学检查及电镜检查。结果 细胞移植组植入骨髓基质干细胞在心肌组织内存活 ;免疫组织化学检查结蛋白、肌钙蛋白I染色阳性 ;电镜示心肌疤痕组织中可见胞浆丰富的异源性细胞 ,圆形或椭圆形 ,细胞体积较大 ,核糖体丰富 ,线粒体较丰富 ,有肌丝样结构 ,单核。对照组心脏标本中可见疤痕组织 ;心肌细胞结蛋白染色阴性 ,肌钙蛋白I染色阳性 ;电镜未发现异源性细胞。结论 成年犬骨髓基质干细胞经冠状动脉移植后在心肌组织内存活并分化为肌源性细胞。

经冠状动脉移植自体骨髓基质干细胞改善成年心肌梗死犬的心功能

目的:观察经冠状动脉注射成年犬自体骨髓基质干细胞对梗死后心功能的影响。方法:本实验于2001-05/2002-04在解放军第二军医大学附属长征医院心内科实验室完成。选用成年犬8只,随机分为细胞移植组5只,对照组3只。结扎犬冠状动脉前降支制备心肌梗死模型;细胞移植组将体外培养、诱导的自体骨髓基质干细胞标记后在心肌梗死后4周经冠状动脉植入心脏;对照组植入等量培养基。胸内心脏超声检查测定左冠状动脉血流阻断前,再灌注后30min及移植后4周左心室射血分数;胸外心脏超声检查测定左冠状动脉血流阻断前、移植前、移植后4周左心室射血分数。用成组t检验和随机区组方差分析完成统计学分析。结果:进入结果分析犬8只。①植入的骨髓基质干细胞在移植犬心肌组织内存活情况:细胞移植组免疫组织化学检查结蛋白及肌钙蛋白I染色阳性,表示已生成心肌样细胞。对照组心脏标本中可见瘢痕组织;心肌细胞结蛋白染色阴性,肌钙蛋白I染色阳性。②移植犬左室功能的左室射血分数:经胸外心脏彩色多普勒超声检查提示,细胞移植组细胞移植前明显低于血流阻断前和移植后4周犤(54.86±7.12)%,(61.78±5.37)%,(61.74±2.93)%,P<0.01犦;细胞移植组细胞移植后4周接近血流阻断前(P>0.05);对照组移植后4周和移植前明显低于血流阻断前(P<0.01)。③移植犬左室功能的左室射血分数:经胸内心脏彩色多普勒超声检查反映,细胞移植组再灌注后30min明显低于血流阻断前和移植后4周犤(49.98±6.79)%;(61.56±3.71)%,(64.56±5.27)%,P<0.01犦。移植后4周明显高于血流阻断前(P<0.05)。对照组移植后4周和再灌注后30min明显低于血流阻断前(P<0.05,0.01)。结论:成年心肌梗死犬自体骨髓基质干细胞经冠状动脉移植后,在心肌组织内存活并分化为肌源性细胞使左心室功能改善。

瑞舒伐他汀与阿托伐他汀治疗冠心病的疗效对比

目的研究瑞舒伐他汀与阿托伐他汀治疗冠心病的疗效。方法选择收治的92例冠心病患者,随机划分为两组,其中实验组与常规组各46例,遵医嘱为实验组患者提供瑞舒伐他汀治疗,为常规组提供阿托伐他汀治疗,评价两组患者疗效及不良反应。结果实验组患者用药后不良反应发生率为2例(4.35%),低于常规组7例(15.22%),(χ2=6.693,P<0.05)。实验组与常规组患者治疗前TC、TG、LDL-C、HDL-C、CRP指标值的比较无意义,P>0.05;治疗6个月时上述指标均优于常规组,P<0.05。结论采用瑞舒伐他汀药物治疗冠心病患者,可有效改善血脂水平,降低不良反应。

右冠状动脉开口闭塞致下壁、右室心肌梗死一例报告

1临床资料患者,男性,63岁,因头晕、恶心、呕吐、无力18h入我院急诊,给予多巴胺静滴后收入院.既往有糖尿病病史3年.

单硝酸异山梨酯缓释片治疗心绞痛的疗效观察

目的研究单硝酸异山梨酯缓释片治疗心绞痛的疗效。方法收治心绞痛患者98例,按照入院顺序分为对照组与研究组各49例。对照组常规药物治疗,研究组在对照组基础上采用单硝酸异山梨酯缓释片。对比临床疗效与心功能情况。结果两组患者治疗前心功能分级无明显差异,P>0.05。研究组89.80%临床总有效率显著优于对照组73.47%,且治疗后研究组Ⅰ级、Ⅳ级患者人数显著优于对照组,差异有统计学意义,P<0.05。结论在治疗心绞痛上单硝酸异山梨酯缓释片疗效较高,对改善患者临床症状上较为显著,用药安全。

外周血干细胞移植治疗冠心病研究进展

干细胞移植治疗冠心病是目前医学研究的热点。本文简要介绍了外周血干细胞治疗冠心病的研究进展,包括外周血干细胞与冠心病发病的关系、外周血干细胞治疗冠心病的方法和效果以及存在的问题和展望。

置入铜丝缠绕型支架制作猪急性心肌梗死模型

目的探讨在猪冠状动脉内置入铜丝缠绕型支架制作急性心肌梗死模型的可行性,建立一种新的急性心肌梗死模型方法。方法16头中国实验用小型猪经股动脉穿刺,在前降支置入自制的铜丝缠绕型支架。1周内观察心肌肌钙蛋白I、心电图、心脏超声和冠状动脉造影。然后处死取出心脏,取目标冠状动脉和心肌,做病理学检查。结果16头小型猪均发生了心肌梗死。梗死发生后死亡2头,其中1头在术后8 h猝死,1头在术后1周冠状动脉造影复查时死于麻醉中;其余14头均存活在1周以上,完成复查,总的成功率为87.5%。结论该模型制作具有操作简单、创伤小、成本低、死亡率低、成功率高等诸多优点,可作为较好的实验研究动物模型。

冠状动脉慢性闭塞病变介入治疗成功的因素及其对预后的影响

目的 探讨影响冠状动脉 (冠脉 )慢性闭塞病变介入治疗成功的因素及其对预后的影响。方法 在 2 0 0 0年 6月至 2 0 0 3年 4月间对 5 2例冠脉慢性闭塞病变患者行经皮冠脉介入治疗 (PCI) ,其中 30例闭塞冠脉成功开通 (开通组 ) ,2 2例闭塞冠脉无法开通 (未开通组 )。比较两组的临床特点和预后。结果 与未开通组比 ,开通组高血压的发生率 (5 3%对 2 3% )较高 (P <0 .0 5 )。推测的血管堵塞时间较短 (P <0 .0 1) ,总胆固醇含量较低 ,分别为 (4 .8± 0 .85 )和 (5 .6± 1.5 )mmol/L(P <0 .0 5 ) ,闭塞病变呈平齐截断或有桥侧支或在分支开口附近或病变长度较长者比例较低 (17%对 4 5 % ,P <0 .0 5 ) ;随访期无胸痛胸闷者比例较高 (73%对 5 0 % ,P <0 .0 5 ) ;再次PCI ,外科冠脉旁路手术和再次住院的联合终点少 (13%对 36 % ,P <0 .0 5 )。结论 冠脉慢性闭塞病变的PCI成功率与推测的堵塞时间和闭塞病变的形态有关。

中国小型猪冠状动脉慢性完全闭塞病变模型的建立

目的探讨采用铜丝缠绕型支架置入中国小型猪冠状动脉内的方法制作慢性完全闭塞病变(CTO)模型的可行性,建立一种新的CTO模型方法。方法 56头中国小型猪经股动脉穿刺,在前降支置入自制的铜丝缠绕型支架。分别在术前和术后1周、2周、4周、3个月、6个月时观察心电图、心脏超声和冠状动脉造影(CAG),然后处死取出心脏,取目标冠状动脉和梗死区域心肌,做病理学检查。结果 56头猪中共8头死亡,总的死亡率14.3%(8/56)。1周、2周时目标冠状动脉均为100%闭塞;4周、3月、6月时部分动物冠状动脉未完全闭塞(血栓机化再通),前向血流TIMI2～3级;完全闭塞的冠状动脉包括了绝对性闭塞(TIMI0级)和功能性闭塞(TIMI1级),并出现同侧的桥侧枝循环。以4周为CTO时间点,CTO模型的成功率为66.7%(28/42)。心肌病理学和心脏超声结果显示所有存活动物均发生了心肌梗死。冠状动脉病理学发现1、2周时闭塞病变处主要为血栓和炎症细胞浸润,4周、3个月、6个月时组血栓逐渐机化,发生纤维化,病变两端形成纤维帽,中间有微血管和孔道形成,与人体CTO病变极为相似。结论该CTO模型与人体CTO病变较为相似,而且有操作简单、创伤小、成本低、死亡率低、成功率高等诸多优点,可作为实验研究较好的动物模型。

分泌型hCREG蛋白抑制人血管平滑肌细胞增殖的量效关系研究

目的:探讨hCREG表达与人血管平滑肌细胞增殖的量效关系。方法:构建强力霉素(Dox)调控表达的pRevTRE-hCREG重组载体;分别经G418及潮霉素筛选表达pRevTet-On、pRevTRE-hCREG的人血管平滑肌细胞株-HITASY细胞克隆;RT-PCR鉴定转染细胞克隆中抗性基因和插入基因的表达;Western blotting和免疫共沉淀检测不同浓度的强力霉素诱导后,HITASY细胞内及培养上清中hCREG的表达;流式细胞仪检测不同浓度的强力霉素诱导后,hCREG表达与细胞增殖的关系。结果:成功构建了强力霉素可调控表达的pRevTRE-hCREG重组载体;筛选出稳定表达双抗性基因的HITASY-hCREG细胞克隆;RT-PCR检测证实细胞克隆中G418及插入基因表达均为阳性;Western blotting及免疫共沉淀检测发现随强力霉素诱导剂量的增加(0、0.01、0.1、1mg/L),HITASY-hCREG细胞及培养上清中hCREG表达均呈剂量依赖性增加;流式细胞周期分析提示,hCREG表达增加后,HITASY-hCREG细胞的G1期细胞明显增加。结论:hCREG蛋白通过剂量依赖方式抑制人血管平滑肌细胞的增殖。

强力霉素调控小鼠E1A激活基因阻遏子表达NIH3T3细胞系的建立

背景:前期研究发现,E1A激活基因阻遏子蛋白调控人血管平滑肌细胞的增殖及表型转化,但其表达调控细胞增殖、分化、凋亡的量效关系有待深入探讨。目的:建立强力霉素调控小鼠E1A激活基因阻遏子表达的NIH3T3细胞系,拟为定量观察E1A激活基因阻遏子的生物学功能提供研究基础。设计、时间及地点:对比观察实验,于2006-05/2008-03在沈阳军区总医院全军心血管病研究所实验室完成。材料:强力霉素调控基因表达系统,3T3细胞系。方法:通过反转录-聚合酶链反应方法获得小鼠E1A激活基因阻遏子(mCREG)cDNA序列;将mCREGcDNA序列亚克隆入pRev-TRE载体中,构建强力霉素调控E1A激活基因阻遏子表达pRev-TRE-mCREG载体;分别经G418(新霉素)及潮霉素筛选表达pRev-Tet-On、pRev-TRE-mCREG的NIH3T3细胞克隆;反转录-聚合酶链反应鉴定转染细胞克隆中抗性基因和插入基因的表达。主要观察指标:Westernblotting检测不同浓度的强力霉素诱导后NIH3T3细胞中mCREG的表达。结果:成功构建了强力霉素可调控表达的pRev-TRE-mCREG重组载体;筛选出稳定表达双抗性基因的NIH3T3-mCREG细胞克隆;反转录-聚合酶链反应检测证实细胞克隆中G418及插入基因表达均为阳性;Western blotting检测发现随强力霉素诱导剂量的增加(0,0.01,0.1,1mg/L),NIH3T3-mCREG细胞中mCREG表达呈剂量依赖性增加。结论:成功建立强力霉素调控E1A激活基因阻遏子表达的小鼠NIH3T3细胞系。

注重班级管理,做好班主任工作

班主任工作是个耐人寻味的工作,班级管理的核心是班主任对学生的管理,按照素质教育的要求和班级管理的总目标来管理和引导学生的态度和行为,充分发挥学生在班级管理中的积极作用,只有这样才能把学生培养成为人格健全、心理健康、富有智慧、思维敏捷的优秀学生。

灯盏花素治疗脑梗塞180例临床疗效观察

目的：观察灯盏花素治疗脑梗塞的疗效。方法：１８０例脑梗塞病人，其中男９５例，女８５例。年龄（６２±７３）ａ。采用灯盏花素注射液１０～２０ｍｌ加入生理盐水５００ｍｌ，静脉滴注，每天１次，１４ｄ为１疗程。隔２～３ｄ进行第２疗程。对照组１１０例，男６８例，女４２例。年龄（６１８±６８）ａ。采用低分子右旋糖酐５００ｍｌ静滴，方法、疗程同治疗组。结果：灯盏花素组总有效率８５％，显效率７３％。右旋糖酐组总有效率７０％，显效率３５％，经Ｒｉｄｉｔ分析：Ｐ＜００５。同时还显示灯盏花素对血脂、血液流变学均有显著改善（Ｐ＜００５）。该药不良反应少。结论：灯盏花素是治疗脑梗塞的良好药物。

犬骨髓基质干细胞体外诱导分化为肌源性细胞的研究

目的 :探讨成年犬骨髓基质干细胞 (MSSCs)体外诱导分化为肌源性细胞的可行性。方法 :用贴壁法体外分离MSSCs ,实验组 5 氮胞苷诱导 ,对照组加入等量的培养基 ,用相差显微镜、免疫组织化学和电镜方法观察、鉴定培养细胞。结果 :实验组培养细胞诱导后 4周 ,多数培养细胞由梭形变为杆状 ,免疫组织化学检查结蛋白、平滑肌肌动蛋白和肌钙蛋白Ⅰ染色阳性 ;对照组多数培养细胞为梭形 ,免疫组织化学检查结蛋白染色弱阳性 ,平滑肌肌动蛋白染色弱阳性 ,肌钙蛋白Ⅰ染色阴性 ;电镜下实验组培养细胞内可见肌丝样结构 ,对照组培养细胞无明显肌丝样结构。结论 :成年犬MSSCs体外可诱导分化为肌源性细胞。

造影剂碘海醇300对肾功能影响222例分析

目的探讨造影剂对肾功能影响,引起造影剂肾病(CIN)的易患因素及其防治。方法选择接受冠状动脉造影术患者222例,检测术前、术后24h、72h的血尿素氮、血肌酐(cr)。对造影后24～72h血肌酐较原来增高25%或者44μmol/L以上定义为CIN。结果肾功能不全组CIN发生率20%,明显高于术前肾功能正常组的4.7%,差异具有显著性(P<0.05)。非CIN患者,术中造影剂用量少,而术前补液量明显多于CIN患者,差异具有显著性(P<0.05)。结论造影剂可引起一过性肾功能改变,CIN与造影剂剂量、补液量密切有关。