小麦LMW-GS基因的分离与归类

本研究以湖北省小麦栽培品种鄂麦18为材料,采用Glu-D3位点特异性的引物,以叶片DNA为模板,进行PCR扩增。经过PCR产物与克隆载体的连接、连接产物转化感受态E.coliDH5α、蓝白斑筛选以及菌落PCR鉴定,获得34个阳性克隆;经测序分析获得两个LMW-GS基因完整编码序列,在GenBank中的基因登记注册号为DQ822593和DQ822596,其中,DQ822593编码序列全长1287bp,DQ822596编码序列全长908bp,所推导的蛋白质都含有8个半胱氨酸残基,1～19个氨基酸为前导信号肽序列,前者属于LMW-GS中的TypeⅠ类,后者属于TypeⅡ类,目前正在鉴定这两类基因的功能。

人干扰素α-2b基因在烟草中的表达研究

应用PCR的技术从质粒pAIFN中扩增人干扰素α-2b(Human interferon α-2b,HuIFN α-2b)编码基因,将其连接到pBI121双元载体构建植物真核表达载体pBIFN;用冻融法将该载体转染根癌农杆菌LBA4404;并用叶盘浸染法转化烟草叶片,经转化的烟草叶片的组织培养,诱导愈伤获得再生植株。通过应用PCR,RT-PCR,Wes-tern blot和WISH/VSV方法检测获得的烟草再生植株,结果表明HuIFN α-2b基因已成功整合进烟草核基因组并表达出具有活性的HuIFN α-2b蛋白。本文对HuIFN α-2b基因在烟草核系统中的表达进行了研究,为进一步在烟草叶绿体系统中该基因的表达研究奠定了基础。

空心莲子草具有较强抗盐能力的原因初探

为了探讨空心莲子草(Alternantheraphiloxeroides(Mart.)Griseb)的抗盐机理,测定了盐胁迫条件下的空心莲子草和水稻中保护酶活性和渗透调节物质的变化。结果表明,在盐胁迫下,空心莲子草中的脯氨酸、甜菜碱以及SOD、POD等含量增加速度比水稻快,膜脂过氧化产物丙二醛的含量在两种植物中虽亦增加,但在空心莲子草叶中的增加幅度小于水稻。证明盐胁迫下保护酶活性和渗透调节物质含量的迅速增加是空心莲子草具有较强抗盐能力的重要生理学基础。

水花生Actin基因片段的克隆及序列分析

肌动蛋白基因编码生物体内一种很重要的组成型表达蛋白质,常被看作看家基因。为分离水花生肌动蛋白基因,根据GenBank上一藜科植物的———Actin基因的EST序列,分别设计引物,提取水花生根的总RNA,对上述的基因片断进行RT—PCR,扩增后测序得到230bp长的核苷酸序列。经同源性比较,这条序列与上述藜科植物Actin的EST序列基本一致,表明获得了水花生肌动蛋白序列。

大叶藻无菌苗快速培育试验

大叶藻(Zostera marina L.)地方名为海马蔺、海带草、海苫房草,分布于我国河北、山东等省沿海地区,在朝鲜、日本、俄罗斯、欧洲、北美洲等也有分布,通常在沿海潮间带和潮下带较浅的水域形成大片单种群落。大叶藻属于单子叶植物纲(Monocotyledoneae),眼子菜科(Potamo-getonaceae),大叶藻属(Zostera),是一种营沉水生活的海洋高等植物,广泛分布在近海生态系统中,在海洋生态环境保护中起着重要的作用[1]。近几十年来,由于许多人为因素的干扰,海水中悬浮颗粒物质和可溶性营养物质增多,导致大叶藻自然资源衰退,大叶藻植被大量减少,其种群分布范围日益缩小。目前,大叶藻的生物特性、种子萌发等逐渐成为研究热点之一[2]。

运用分子标记辅助构建海带核心种质资源

海带(Saccharina japonica)是一种具有重要经济和生态价值的大型海藻,配子体是其种质资源保存的形式,也是海带杂交育种、育苗的材料。为有效管理和评价海带种质资源,初步构建了海带核心种质资源,利用RAPD标记技术对海带"早厚成一号"的28份配子体进行了遗传学评价。采用UPGMA聚类法,根据遗传相似性系数进行分组,采用简单比例法进行取样(25%、35%、50%、65%)分析,计算不同取样比例时的遗传多样性参数,结合样本的生长状态和雌、雄比例,综合评价遗传多样性的各种参数,取样比例为50%时构建的核心种质库相对合理。本研究为海带品种(系)的核心种质的筛选和遗传学评价打下基础。

基于ITS序列海带目种质资源的物种鉴定研究

为了更准确地鉴定海带目种质资源,为种质保存和保护提供依据,研究采用海带目的核糖体DNA内转录间隔区(Internal Transcribed Spacer,rDNA ITS区)的通用引物,以待鉴定海带目样品的基因组DNA为模板通过PCR方法扩增出ITS序列,在测序的基础上对25棵分别采自日本和烟台海区的海带目样品进行分子鉴定。结果表明,25个待鉴定褐藻目样品和16个已知物种,通过ITS序列聚类分析,分别聚在不同的单系类群中且在物种鉴定树中种内的支持率均较高,分属于2科3属,聚类为7个不同的种,形态学观察的结果与分子鉴定结论相吻合。海带目ITS序列引物通用性强,有效扩增率高,可用于海带目物种的快速鉴定。

大学生心理健康教育课程校院(系)合作模式研究

当前,大学生心理健康教育课程在高校、教师、学生三个方面都存在一些问题,研究大学生心理健康教育课程的现状,从学校和学院(系)两个角度提出建立一个共同的教学模式,以充分调动学校心理学专业教师和学院(系)专职辅导员工作的积极性。通过心理健康教育的理论学习,并结合学院(系)实际情况,开展针对性的实践,能使大学生真正领悟课程内容与课程精髓,从而促进大学生心理健康的发展。

大叶藻原生质体的分离和培养

研究了水解酶的组合、酶液pH值和酶解时间等因素对大叶藻原生质体分离制备的影响,确定了适合无菌大叶藻原生质体分离的最佳试验条件。试验结果显示,1.0g生长状态良好的大叶藻无菌幼苗叶片,在5mL含2.0%纤维素酶、0.5%果胶酶和0.5mol/L山梨醇混合酶液的灭菌海水中,pH4.0,17℃黑暗条件下轻摇酶解16h,可获得较多的大叶藻原生质体,产量达3.90×106个/g。用中性红染色鉴定表明,原生质体存活率为85.0%。

浅论新时代大学生入党启蒙教育

大学生党员的质量关乎社会主义现代化建设,大学生入党启蒙教育是提高大学生党员质量的重要措施。现阶段,大学生入党启蒙教育水平参差不齐,存在很多不足。通过首因效应、环境效应、角色效应、辐射效应和需求效应等心理学原理的探索,研究提升高校大学生入党启蒙教育成效的措施。

大叶藻组织培养中外植体消毒方法的研究

为探寻大叶藻组织培养中外植体的最佳消毒方法,采用75%乙醇、1.5%碘化钾、4%次氯酸钠和10%双氧水这4种消毒剂以及不同的处理时间组合,对大叶藻种子和幼苗进行消毒试验。结果表明,最有效的外植体消毒方法为:对大叶藻幼苗,先用无菌水冲洗3～4次,再以75%乙醇处理20s,然后再用无菌水冲洗3～4次,可以达到较好的消毒效果。对大叶藻种子,先以75%乙醇处理10min,再以1.5%碘化钾处理10min,然后用无菌海水冲洗3～4次,这样消毒效果最佳,且不影响种子的发芽率。

高温胁迫对高温筛选后海带配子体存活率和生理的影响

试验以经过高温筛选存活的海带配子体奔牛(Bn-23-b-2d,Bn-23-b-8d)和对照组配子体奔牛(Bn)为试验材料,在23℃分别处理4、8d和12d,进行了耐高温能力的验证。试验结果表明,3种材料的存活率随处理时间的延长均呈下降趋势,且3种材料的耐高温能力与之前的试验结果一致,依次为Bn-23-b-8d>Bn-23-b-2d>对照组Bn。同时,在高温处理的不同时间点(4、8、12、16d),对3种配子体的叶绿素a、脯氨酸、丙二醛及可溶性糖含量进行了检测,其中,对照组配子体叶绿素a含量随处理时间延长一直下降,而Bn-23-b-2d与Bn-23-b-8d有一定上升后下降;脯氨酸含量在高温胁迫下迅速积累,其中Bn-23-b-8d前期抵抗高温能力最强,抗高温时间最长;对照组Bn丙二醛和可溶性糖含量变化最明显,受到的高温胁迫强度最大。这4种生理指标的变化可以反映配子体的耐高温能力,与存活率验证得到的结果相符。该研究结果显示,高温筛选后其存活率和生理指标的变化能够反映其耐高温能力,为后期耐高温品种的选育奠定了基础。

海带种质资源遗传多样性的RAPD分析

利用RAPD分子标记技术对种质库中保存的19个海带品种(系)的36个海带配子体进行了遗传多样性分析。从100条引物中筛选出16条可扩增出清晰条带的引物,在36个海带配子体中共扩增出362条DNA条带,其中多态性条带比例达99.45%。遗传相似性分析表明,这36个配子体之间的遗传相似性范围为0.682-0.978,以0.756为最低遗传相似系数,可将36个种质材料分为6个大类,UPGMA聚类分析结果表明同一品系的雌雄配子体大部分能聚在一起,品系间遗传多样性较高。

基于SSR标记的海带、裙带菜的遗传构成分析

旨在通过对配子体克隆和孢子体幼苗的初代筛选,以培育出纯度更高、性状更优良的海带与裙带菜品种。以11个海带与裙带菜克隆组合为材料,在筛选出区分亲本♀与♂的数对引物的基础上,对其子代与亲本的遗传构成进行了分析。试验中共选出13对能够区分11个组合亲本♀与亲本♂的SSR标记,分析结果显示,2013年育苗的48号组合中所有子代都是其亲本的后代,49号组合中只有1个子代是其亲本的后代;2014年育苗的22号组合中所有子代都是其亲本的后代;2015年育苗的海带与裙带菜杂交组合中,36号、38号、39号与41号杂交成功,其他组合未杂交成功;2016年育苗的59号组合中有7个子代与亲本无亲缘关系。分析这11个组合中所有个体与亲本的遗传构成发现:部分个体是其亲本的后代,部分个体遗传构成与亲本不一致。

大叶藻(Zostera marina L.)胚的结构和种子萌发过程的研究

以采自山东荣成褚岛桑沟湾南岸成熟的大叶藻种子为材料,研究了种子的外部形态特征、胚乳成分及胚的解剖结构,并初步了解了大叶藻种子的萌发过程。结果表明,大叶藻种子是单子叶有胚乳的种子,呈暗褐色,椭圆形或长圆形,种皮革质且有17～20条纵肋,胚乳丰厚坚硬,胚乳细胞被淀粉粒充满;胚弯曲,由胚根、胚轴、胚芽和子叶组成,子叶U形棒状,其弯曲部有一裂缝,胚芽位于裂缝处,胚轴较短,其下是两个对生的胚根,有中央维管束贯穿胚根、胚轴、胚芽和子叶。在子叶出土萌发的植物类型中,大叶藻种子萌发过程是罕见的。萌发初期,子叶优先生长突破种皮而长出地面,此后胚根才开始生长并产生不定根。对大叶藻种子结构和萌发过程的研究,为探讨大叶藻种子萌发和幼苗更新的限制因素提供了一定的理论依据。

大叶藻胚的石蜡切片制作方法

研究固定方法、脱水及浸蜡时间、染色方式对大叶藻胚石蜡切片制作效果的影响。结果表明,采用标准固定液(FAA)固定48 h以上,脱水每级梯度时间2 h,分3次浸蜡(每次30 m in),苏木精-伊红染色,可制作出染色清晰、组织结构完整的大叶藻胚切片。

温度对谷皮菱形藻生长及其理化成分的影响

考察了不同温度对谷皮菱形藻生长及其理化成分的影响。结果表明:温度在10℃或30℃条件下不利于细胞生长,同时也不利于胞内理化成分的积累。在20℃条件下细胞密度、叶绿素含量、胞内蛋白、胞外多糖及胞内多糖达到最大值。谷皮菱形藻的最适生长温度为20℃,10℃可以作为种质保存的温度。

海带属配子体DNA提取及ISSR-PCR体系优化

为了建立一个重现性好、稳定性高,适用于海带属ISSR遗传分析的PCR反应体系,从海带属配子体材料中提取基因组DNA作为模板,应用正交设计试验对反应体系中各因子的不同浓度进行组合优化。结果显示:适用于海带ISSR扩增反应的最佳体系(20μL)为:1×PCR buffer,1.2 mmol/L Mg2+,0.2 mmol/L d NTPs,1.0μmol/L ISSR引物,40 ng模板DNA,0.25 U Taq DNA聚合酶;扩增PCR程序为:95℃预变性3 min;95℃变性45 s,52℃退火45 s,72℃延伸2 min,共38个循环;最后72℃延伸10 min。在优化的海带ISSR反应条件下,扩增条带稳定,重现性好,为应用ISSR分子标记技术进行海带属遗传多样性研究和分子鉴定奠定了技术基础。

棘皮动物育种数据管理与分析平台的开发及应用

以刺参为代表的高价值棘皮动物在我国的养殖规模不断扩大,市场价值越来越高,但有关棘皮动物育种数据管理与分析的系统并未开发。本平台是以ASReml软件为遗传评估核心,使用Mysql数据库和java、R语言,利用maven、myeclipse2017工具开发的一套基于B/S框架,在Linux环境下运行的育种数据管理与分析系统。平台包含6大功能模块:系统管理、种质信息、表型数据库、表型数据分析、基因组数据库和基因组数据分析等。能实现棘皮动物表型数据、系谱数据和基因组数据的管理、育种值分析、遗传力估算、近交和亲缘系数计算、遗传进展计算和选种配种方案制定。运用该平台对刺参育种模拟数据进行管理、分析与应用,利用模拟表型数据和基因组数据对刺参的棘刺、体重进行了遗传力分析和育种值计算,并提出选种配种方案。该平台的推广和应用将提升棘皮动物育种效率,对我国棘皮动物育种工作的发展具有重要的促进作用。

中国黄海封闭与开放水域大叶藻种群动态研究

为探明黄海海域不同生境下大叶藻(Zostera marina L.)种群特征,自2011年2月至2012年6月,对黄海山东半岛两处不同大叶藻生境[烟台四十里湾海区(开放水域生境SSL:37°02.531′N,122°32.693′E)和荣成爱莲湾海区围堰池(半封闭水域生境AL:37°14.925′N,122°35.716′E)]种群季节动态规律和繁殖状况进行了跟踪观测。结果显示:处于半封闭水域生境的爱莲湾大叶藻种群平均峰值植株高度、地上/地下干重生物量、种群植株密度、繁殖枝密度(107.42cm,754.84g/113.21g·m-2,364株·m-2,109.21株·m-2)显著大于开放水域生境四十里湾大叶藻种群(66.98cm,487.63g/127.63g·m-2,273.21株·m-2,69.21株·m-2)(P<0.05)。两生境下大叶藻种子大小存在显著差异,开放水域生境四十里湾大叶藻种群种子大小(平均长4.17mm,宽2.02mm,重11.13mg)显著大于半封闭水域生境爱莲湾种子(平均长3.43mm,宽1.75mm,重6.97mg)(P<0.05)。处于半封闭水域生境的种群具有更高生物量和种群密度,产生更多繁殖枝,但是种子远小于开放水域生境大叶藻种群产生的种子,表明浪冲击生境下大叶藻种群具有更强的有性繁殖拓殖能力。