GM_3在几种哺乳动物肝脏和狗红细胞中的含量及其分离纯化

从正常兔、猪和狗的肝脏及狗红细胞中分离纯化了总神经节苷脂,测定了脂结合唾液酸,进行了高效薄层层析,比较了上述四种组织中GM_3的含量。结果表明狗红细胞中的GM_3的含量较另三种的高,狗肝和兔肝次之,猪肝含量甚微。从狗红细胞中提取和纯化了GM_3,其得量为每毫升压积红细胞351.0μg,纯度为92.2％。

神经节苷脂GM_3对人单核样白血病J6-2细胞中磷脂代谢的影响

用50μmol/L GM_3处理J6-2细胞6天,经组化与细胞学检查,证实细胞沿单核巨噬细胞途径分化。以[^(32)P]Pi或[CH_3-^(14)C]胆碱冲激(Pulse)后,将洗净的细胞进行Folch分配。取下相进行薄层层析,再做放射自显影。结果表明:GM_3的处理能促进[^(32)P]Pi或[CH_3-^(14)C]胆碱向磷脂酰胆碱的参入,而抑制向其他磷脂组分的参入。用[CH_3-^(14)C]胆碱冲激的Folch分配上相含水溶性胆碱代谢物,经TLC,结果表明CM_3的处理使[CH_3-^(14)C]胆碱向CDP-胆碱的参入减少。本研究证实,GM_3能调节J6-2细胞的磷脂代谢,其调节机制值得研究。

鞘糖脂与信息传递

鞘糖脂与信息传递崔肇春，马克里（大连医学院生化教研室，大连１１６０２３）关键词鞘糖脂，信息传递鞘糖脂（ＧＳＬ）几乎存在于所有真核细胞质膜上，由疏水的神经酰胺（Ｃｅｒ）与亲水的寡糖链组成，Ｃｅｒ部分插入质膜，寡糖链则伸向质膜外。由于它和信息传递的许多因...

类固醇激素作用的非基因组效应

类固醇激素作用的非基因组效应崔肇春（大连医科大学生化教研室，大连１１６０２７）关键词类固醇激素非基因组效应六十年代发现了类固醇激素的胞内受体，促进了类固醇激素作用机制的研究。众所周知，类固醇激素作用的途径是它直接进入细胞后，与胞内受体结合成激素－受体...

18种中草药中痕量锗的定量测定

用混酸（发烟硝酸＋浓硫酸）回流消化中草药样品，Fe（OH）3共沉淀富集锗，苯基荧光酮－溴化十六烷基三甲胺（CTMAB）胶束增溶分光光度法测定了18种中草药中的锗含量，灵芝和白花蛇舌草含量较高，分别为2．46和0．35μg／g。本法检出界限为193ng／g，变异系数为0．89％，在不同中草药中的回收率为91％～93％。

pemt2-cDNA的转染抑制大鼠CBRH-7919肝癌细胞c-Met及Bcl-2的表达并诱发凋亡

为探讨磷脂酰乙醇胺 N 甲基转移酶 2 (phosphatidylethanolamine N methyltransferase 2 ,PEMT2 )的转染抑制大鼠肝癌CBRH 7919细胞增殖的分子机理 ,构建了带有完整的pemt2 cDNA基因质粒载体 ,经转染和鉴定 ,确知其在大鼠肝癌细胞系CBRH 7919细胞中稳定高表达 .用细胞培养、免疫细胞化学、Western印迹、流式细胞仪和琼脂糖凝胶电泳等技术研究c Met(HGF的受体 )及抗凋亡蛋白Bcl 2在此过程中的表达和是否诱发凋亡 .免疫组织化学及Western印迹分析显示在转染高表达细胞中 ,c Met及Bcl 2的表达下调 .流式细胞仪分析表明 ,在转染pemt2 cDNA的高表达细胞中 ,G1期细胞增加 ,S期细胞减少 ,并在G0 期出现一个凋亡峰 .琼脂糖凝胶电泳谱显示梯状条带 .结果表明 :pemt2的转染可使大鼠肝癌细胞的c Met及Bcl 2的表达下调 ,并发生凋亡 .

蛋白激酶B及其在磷脂酰肌醇3-激酶介导的信号转导中的作用

蛋白激酶B(PKB)是原癌基因c akt的表达产物 ,它参与由生长因子激活的经磷脂酰肌醇 3 激酶 (PI3K)介导的信号转导过程。与许多蛋白激酶相似 ,PKB分子具有一特殊的AH/PH结构域 (AH/PHdomain) ,后者能介导信号分子间的相互作用。PKB是PI3K直接的靶蛋白。PI3K产生的脂类第二信使PI 3,4, P2 和PI 3,4,5 P3等均能与PKB和磷酸肌醇依赖性蛋白激酶 (PDK)的AH/PH结构域结合 ,使二者转位于质膜上并活化。PDK也能使PKB磷酸化而激活 ,激活的PKB又进一步激活抗细胞凋亡机制、葡萄糖代谢 (糖原合成、糖酵解及葡萄糖的摄取 )及蛋白质合成等过程 。

β-榄香烯对人BIU-87细胞诱导凋亡的实验研究

目的:研究β榄香烯对BIU87 细胞的抗癌作用机制。方法:采用细胞培养、电子显微镜、细胞DNA凝胶电泳和荧光探测等技术,探讨β榄香烯抗癌作用机制。结果:①β榄香烯作用瘤细胞后,光镜观察发现瘤细胞外形逐渐变小变圆,同时明显抑制瘤细胞的生长;电镜观察发现瘤细胞的细胞核染色质密度增高,呈半月形,并凝聚在核膜周围。②β榄香烯作用瘤细胞后,提取瘤细胞DNA,经β榄香烯作用后的样品呈现DNA梯带现象,而对照组则为阴性。③β榄香烯作用瘤细胞后,以Fura 2AM 负载,随着药物浓度的升高,瘤细胞内游离Ca2+ 浓度明显升高,呈明显的量效关系( P<0.01)。结论:β榄香烯诱发BIU87 细胞所出现凋亡的早期变化。

GM3对J6-2细胞的促分化作用及对鞘糖脂与磷脂组分的影响

本文在用形态学与组化手段证实神经节苷脂GM3促进国人白血病细胞系J6-2分化的基础上,研究了分化前后细胞鞘糖脂及磷脂组分的变化。作者用自行提纯的GM3表明,J6-2细胞在分化前后没有显著的神经节苷脂组分的改变,中性鞘糖脂组分CMH在分化后明显增多。GM3使LPC、SPM及PI+PS等磷脂组分减少,但使PC组分增多。此项结果提示了神经节苷脂的一个新的功能——调节磷脂代谢,但其具体机制尚待阐明。

磷脂酰乙醇胺N-甲基转移酶2的表达抑制大鼠CBRH-7919肝癌细胞的增殖

利用磷酸钙沉淀法将重组的质粒 p CMV5 -pemt2与 p SV-neo共转染 ,经 G418筛选 ,免疫细胞化学和免疫印迹法检测蛋白表达 ,[3 H] -SAM掺入测定酶的活性 ,获得稳定表达 PEMT2的阳性克隆 .经台盼蓝排阻法测生长曲线 ,流式细胞仪测定细胞周期 ,MTT 法检测细胞生长抑制率 .观察了磷脂酰乙醇胺 N-甲基转移酶 2( phosphatidylethanolam ine N -m ethyltransferase 2 ,PEMT2 )的表达对大鼠甲胎蛋白阳性 ( AFP+ )肝癌细胞系 CBRH-7919增殖的影响 .结果表明 :PEMT2在 CBRH-7919肝癌细胞中已成功表达 ,细胞的增殖能力下降 ,S期明显减少 ,AFP含量减少 .说明 PEMT2的表达可明显抑制大鼠 CBRH -7919肝癌细胞的生长 .

着床期兔子宫内膜凝集素结合特性的研究

应用七神凝集素ConA、DBA、PNA、RCA-1、SWGA、UEA-1、和WGA 为探针,通过组化方法,观察了兔子宫内膜在着床期间糖复合物表达的变化。发现在植入期(D_4～D_7)内膜表面DBA、SWGA 和WGA 受体含量变化不明显。植入时(D_7)PNA 受体增加,而RCA、ConA 和UEA-1受体均见减少。结果表明在着床期间子宫内膜表面糖有规律性改变。提示子宫内膜糖的变化与胚泡着床有关。

pLNCX-pemt2重组载体的构建及pemt2基因在大鼠肝癌CBRH-7919细胞中的表达

为进一步研究 pemt2对肝癌细胞生长抑制的作用机制提供方便的实验模型 ,构建了p LNCX- pemt2重组体 .将目的基因 pemt2连接入含有 neo抗性基因的真核细胞表达载体 p LNCX中 ,构建 p LNCX- pemt2重组子 ,并用磷酸钙沉淀法将其转入大鼠肝癌 CBRH- 791 9细胞中 ,应用PCR、Western印迹及 [3 H]SAM参入等技术对其转染、表达及活性进行鉴定 .转染 p LNCX- pemt2的大鼠肝癌细胞 ,PEMT2成功表达 (分子量为 2 2 .5k D) ;高表达克隆 PEMT2的表达量比对照组高约 5倍 ,其活性比对照组高 2 .1倍 ;细胞生长的倍增时间从 2 1 .54± 7.0 8h延长到 43.2 2± 7.1 1h.结果表明 ,p LNCX- pemt2重组体转入肝癌细胞后 ,PEMT2蛋白得到高效表达 ,明显抑制肝癌细胞生长 .

GM_3抑制人白血病J6－2细胞肌醇磷脂代谢循环

采用无载体￣（３２）Ｐ和［￣３Ｈ］肌醇标记磷脂，观察了促分化剂神经节苷脂ＧＭ＿３对人单核样白血病Ｊ６－２细胞肌醇磷脂代谢的影响，ＧＭ＿３抑制［￣（３２）Ｐ］Ｐｉ和［￣３Ｈ］肌醇掺入Ｊ６－２细胞磷脂酰肌醇（ＰＩ），促进［￣（３２）Ｐ］Ｐｉ和［￣３Ｈ］肌醇掺入磷脂酰肌醇－４，５－二磷酸（ＰＩＰ＿２），抑制［￣（３２）Ｐ］Ｐｉ掺入磷脂酸（ＰＡ），抑制［￣３Ｈ］肌醇掺入三磷酸肌醇（ＩＰ＿３）．ＧＭ＿３的上述作用均为浓度依赖性的，随ＧＭ＿３浓度的提高而增强．上述结果表明，ＧＭ＿３抑制Ｊ６－２细胞的肌醇磷脂代谢循环．

抗精子抗体与免疫不育

近年来由免疫学因素造成的不育已引起了人们的极大关注。最近的研究表明在原因不明性不育夫妇中有10～30%可能由于抗精子抗体(AsAb)所引致。早期的工作表明同种睾丸提取物免疫雄性豚鼠可导致睾丸炎及精子形成障碍。随后又从不育夫妇血清中查出抗精子抗体(AsAb)。此后,人们对精子的抗原性,AsAb的产生与检测、AsAb对受精过程及受精后的影响、及对由AsAb引起的免疫不育的诊断与治疗进行了大量的研究报道,本文综述了近年来上述各方面的研究进展。

Ras-GTP-Raf复合物及其信号传导的分子机制

Ras GTP Raf复合物是RTKs介导的Ras通路的一个关键环节 ,在Ras GTP Raf复合物中信号传递的分子机制是Ras GTP Raf复合物作为一个整体开关信号传导、启动信号放大级联反应及可能导致肿瘤发生 .此外 ,PKC介导的Raf的激活也必需有Ras GTP Raf复合物的存在 .

家兔子宫内膜的凝集素结合特性及雌、孕激素的影响

本文观察了早、中、晚期妊娠家兔子宫内膜对六种凝集素(SBL、RCL、WGL、PNL、ConA、PSL)的结合特性,并用去卵巢家兔模型观察了雌、孕激素对子宫内膜凝集素结合特性的影响。从动情期到早孕(着床前后),子宫上皮与RCL,ConA的结合由阴性转为强阳性,与SBL、RNL的结合由弱转强。在妊娠过程中,ConA仅与早孕上皮结合,而PSL则到中、晚期才见阳性反应。经雌、孕激素处理后,子宫上皮与ConA结合始终为阴性,与PSL的结果各组均为阳性,激素处理后无明显改变。而另外4种凝集素则明显受激素影响。雌激素使子宫上皮与RCL、WGL的结合转阳性,使与PNL、SBL的结合增强。在雌激素作用后,再给孕漱素(E_5+P_1组,E_5+P_3组),子宫内膜与这4种凝集素的结合均比单独应用雌或孕激素更强。

用鞘磷脂作为标志分子鉴定脂筏

脂筏是质膜双层中富含鞘脂、胆固醇及特殊蛋白质的质膜微区.对其功能的研究,首先要对其进行分离和鉴定.常利用密度梯度超速离心将其分离,然后以脂筏中富含的神经节苷脂GM1作为标志分子,利用荧光或生物素标记的霍乱毒素B亚基进行亲和标记来鉴定脂筏.但这一鉴定方法操作复杂、费时、易对环境造成污染,所用关键试剂霍乱毒素不易获得,再加上一些组织GM1含量甚微或不含GM1,使其应用受到局限.为建立一个特异性高又对各种组织广泛适应的脂筏鉴定方法.对两种细胞系脂筏的脂类组分进行了分析.结果发现,可用鞘磷脂作为脂筏的特异性标志分子,采用高效薄层层析技术对脂筏进行鉴定.

脂多糖增加小鼠巨噬细胞多磷酸肌醇脂代谢转换

多磷酸肌醇脂（这里指ＰＩＰ和ＰＩＰ２）的代谢在细胞信息传递和膜运转中起着重要的作用．脂多糖（ｌｉｐｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ，ＬＰＳ）于激活小鼠腹腔巨噬细胞（Ｍφ）初期（０．５～１ｈ）和后期（１６ｈ）明显增加来自［γ－３２Ｐ］ＡＴＰ的３２Ｐ参入Ｍφ的ＰＩＰ和ＰＩＰ２，３２Ｐ参入ＰＩＰ２的显著性大于ＰＩＰ．ＬＰＳ的这种作用在其激活Ｍφ的初期不受酪氨酸蛋白激酶抑制剂ｇｅｎｉｓｔｅｉｎ、蛋白激酶Ａ激动剂（ｆｏｒｓｋｏｌｉｎ）及百日咳毒素的影响；但佛波酯（ＰＭＡ）长时间预处理的Ｍφ（其ＰＫＣ活性被耗竭）再受ＬＰＳ刺激，［３２Ｐ］ＰＩＰ２水平较ＬＰＳ刺激未受ＰＭＡ预处理的Ｍφ明显降低．结果表明，ＬＰＳ于激活Ｍφ的初期和后期更显著增加ＰＩ４Ｐ－５激酶的活性，导致ＰＩＰ２合成增加，ＰＩＰ２合成的增加可能与Ｍφ激活时不同时期所表达的功能相关．