应用流式细胞术动态观测小鼠树突状细胞诱导的T细胞增殖的变化

目的:运用流式细胞术(FCM)分析小鼠混合淋巴细胞反应(MLR)中T细胞增殖的动态变化。方法:把分别经脂多糖(LPS)和生理盐水(NS)刺激的小鼠树突状细胞(DC)经H22肿瘤细胞抗原肽冲击后,以1:50的比例与小鼠T细胞(TC)进行同种MLR,分别作为LPS+DC+TC组和NS+DC+TC组,同时设LPS+TC组和空白TC对照组。经体外培养,分别于反应的第0d、1d、2d、3d、4d、5d、6d收集TC,FCM检测TC细胞周期。结果:随培养时间的延长,LPS+DC+TC组、NS+DC+TC组S期细胞及细胞增殖指数均先增后减、LPS+TC组和空白TC对照组则呈下降趋势(P<0.05),各组间比较差异有统计学意义(P<0.05)。结论:FCM可以从单细胞水平客观、准确地反映淋巴细胞增殖的动态变化。

DC-SIGN:C型凝集素中的新成员

DC SIGN是一种树突状细胞特征性的且具有多种功能免疫新分子 ,不但可以参与树突状细胞的迁移、粘附以及对抗原的识别与内化 ,还可以参与许多病原体的免疫逃避 ,本文拟就有关内容作一综述。

人B7-2瘤苗与DC瘤苗体外联合诱导抗食管癌的作用

目的:研究人B7-2瘤苗和负载了肿瘤细胞冻融抗原的DC瘤苗体外联合诱导抗食管癌的免疫作用.方法:应用脂质体转染技术,将融合基因表达载体pEGFP-N3-B7—2转染人食管癌细胞株EC9706.采用密度梯度离心法从脐血中分离单个核细胞(MNC)后,获得单核细胞(Mo).在细胞因子作用下诱导分化,第3d加入EC9706的冻融抗原,共培养4d后获得负载肿瘤抗原的成熟树突状细胞(MDC).将致敏DC与从脐血中分离的T淋巴细胞共培养3d,获得细胞毒T淋巴细胞(CTL);四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测CTL对转染和未转染的EC9706的细胞毒作用.结果:融合基因在食管癌细胞株EC9706的胞膜上定位表达.脐血来源的DC可负载并递呈肿瘤抗原,激活自体T淋巴细胞,诱导肿瘤特异性CTL产生,对转染pEGFP—N3-B7—2的EC9706细胞有显著杀伤作用(F=21.672,P=0.000).结论:人B7—2瘤苗和DC瘤苗体外联合应用,诱导出明显的杀伤食管癌细胞的免疫效应.

中国林州市食管癌高发区人群病因学预防效果观察

[目的]探讨降低食管癌发病率的有效预防对策和措施。[方法]根据食管癌流行病学和病因学研究发现的主要可疑致癌因素、促癌因素和保护因素,组织实施五项综合性病因学预防措施。应用自身前后对照的类实验研究方法,以林州市居民食管癌标化发病率为终点指标,以食管癌的主要致癌、促癌因素和保护因素的暴露水平为中间指标,评价其预防效果。[结果]林州市居民20年来食管癌标化发病率呈显著下降趋势,2003年与1980年相比男性下降了56.33%,女性下降45.07%;林州市居民体内致癌性亚硝胺和霉菌毒素的暴露水平明显下降;体内维生素A、B2水平明显增高,个人行为与社会环境危险因素明显减少、保护因素明显增加。[结论]林州食管癌高发区居民食管癌发病率的显著降低可能与实施针对病因的五项综合性预防措施有关。

人B7-2基因修饰的食管癌细胞瘤苗抗肿瘤的免疫效应

目的:研究人B7-2基因修饰的食管癌细胞作为瘤苗的抗肿瘤作用。方法:将真核荧光表达载体pEGFP-C3-B7-2,通过脂质体转染技术转染人食管癌细胞株EC9706。外周血来源的树突状细胞(DC)负载肿瘤抗原后,与自体T淋巴细胞共培养3d,获得细胞毒性T淋巴细胞(CTL)。用四甲基偶氮唑蓝(MTT)法检测CTL对转染和未转染pEGFP-C3-B7-2的人食管癌细胞EC9706的杀伤活性。结果:CTL对转染pEGFP-C3-B7-2的肿瘤细胞的杀伤活性大于转染pEGFP-C3和未转染细胞的杀伤活性(P<0.05)。结论:人B7-2基因修饰的EC9706肿瘤细胞瘤苗,可诱导出明显的抗EC9706细胞的免疫效应。

野生型DNA聚合酶β重组绿色荧光蛋白表达载体的构建

目的:构建携带野生型DNA聚合酶β基因(wtDNApolβ)的重组真核绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C3-polβ。方法:运用PCR方法,从质粒pcDNA3.1-polβ中扩增出wtDNApolβ的开放阅读框序列,T-A克隆至pGEM-T载体,再定向克隆至pEGFP-C3,重组质粒pEGFP-C3-polβ用限制性内切酶酶切鉴定,通用鉴定引物PCR扩增鉴定,并进行DNA序列分析。结果与结论:多种鉴定方法证实了重组载体pEGFP-C3-polβ中的wtDNApolβ序列与GenBank中已知的序列相符。携带wtDNApolβ的重组增强型绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C3-polβ构建成功。

DNA聚合酶β过表达对食管癌EC9706细胞的影响

目的:观察过表达的DNA聚合酶β对食管癌EC9706细胞系的影响.方法:运用PCR方法,从质粒pcDNA3.1-polβ中扩增出野生型和突变型的DNA聚合酶β基因,作为目的片段,定向克隆至pEGFP-C3真核绿色荧光蛋白表达载体,获得野生型和突变型的重组真核表达载体pEGFP—C3-polβ.分别将野生型和突变型的pEGFP—C3-polβ转染EC9706细胞,荧光显微镜观察其定位,绘制生长曲线,测定细胞周期.结果:DNA序列分析证实了重组载体中的DNA聚合酶β序列正确,荧光显微镜结果显示野生型的DNA聚合酶β表达以细胞核为主,突变型的DNA聚合酶β则表达在整个细胞中,明显与野生型的DNA聚合酶β的核定位不同.而且,野生型的细胞生长较对照组缓慢(P<0.05),野生型的还能抑制EC9706细胞的生长和使S期细胞减少(22.11±0.12vs44.86±0.03,P<0.05),而突变型的则不能促进EC9706细胞的生长,S期细胞增殖不明显(P>0.05).结论:过表达的野生型食管癌DNA聚合酶β可以降低EC9706细胞的增殖.

真核绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C3-B7-2的构建

目的:构建含人B7-2基因的绿色荧光蛋白表达载体pEGFP-C3-B7-2。方法:应用RT-PCR、巢式PCR方法从重症肌无力患者胸腺组织中扩增出人B7-2cDNA基因片段,经回收、纯化、酶切后,依次连接到质粒pGEM-T和pEGFP-C3上。结果与结论:酶切及测序证实成功构建了克隆载体pGEM-B7-2和真核绿色荧光表达载体pEGFP-C3-B7-2。

人野生型DNA聚合酶β在NIH3T3细胞中的定位

目的:研究人野生型DNA聚合酶β(wtDNApolβ)在NIH3T3细胞内的定位。方法:将携带人wtDNApolβ的真核绿色荧光表达载体pEGFP-C3-polβ,用脂质体介导的方法转染NIH3T3细胞株,用荧光倒置显微镜观察转染细胞,观察wtpEGFP-C3-polβ融合基因表达。以转染空质粒pEGFP-C3的NIH3T3细胞为对照。结果:转染细胞均有GFP表达,说明转染成功。转染pEGFP-C3-polβ的细胞胞核荧光强度较胞浆强,而空质粒转染细胞胞浆胞核荧光强度无差别。结论:wtDNApolβ在NIH3T3细胞中定位于胞核内。

白藜芦醇对UVB损伤HaCaT细胞保护作用的双向电泳图谱差异分析

目的利用双向电泳技术(2-DE)从蛋白质组学角度分析白藜芦醇对中波紫外线(UVB)照射的人角质形成细胞(HaCaT细胞)的保护作用,以探讨白藜芦醇防御UVB损伤的作用靶点及有关机制。方法 MTT法检测不同浓度的白藜芦醇对经或不经UVB照射的HaCaT细胞增殖的影响。2-DE实验分对照组、UVB组、白藜芦醇组、UVB+白藜芦醇干预组(共同干预组),提取各组蛋白进行2-DE实验,结合质谱(MALDI-TOF-MS)分析与数据库检索对差异蛋白质点进行鉴定。结果筛选10个存在明显差异的蛋白点,质谱鉴定出8种蛋白质,除4种功能未知蛋白外,其余4种蛋白分别为转录起始因子IIE-β(TFIIE-β)、组蛋白H1.2、锌指蛋白、MAGOH蛋白。UVB组细胞内组蛋白H1.2水平较其它各组明显增高(P<0.05);UVB组、UVB+白藜芦醇干预组的TFIIE-β及锌指蛋白表达水平均降低,UVB组下降最为明显(P<0.05);UVB组的MAGOH蛋白较各组明显减少(P<0.05)。结论应用2-DE联合质谱技术发现了白藜芦醇对UVB诱导的HaCaT细胞损伤防护作用相关的差异蛋白点。