脂蛋白脂酶基因多态性与冠心病和血脂水平的关系

目的:探讨脂蛋白脂酶LpL基因的限制性内切酶片段长度多态性与冠心病和血脂水平的关系。方法:选择181例冠心病(CHD)患者和100例与其年龄,性别相匹配的健康(对照)组进行研究,分别测定其有关血脂指标。并用PCR法扩增其染色体DNA中含第6内含子和第8内含子的不同片段,分别用限制性内切酶Pvu Ⅱ和Hind Ⅲ消化扩增产物,经琼脂糖电泳后,拍照并确定其基因型。结果:两组间P等位基因和H等位基因频率均无显著性差异。冠心病组的H基因型和P基因型与TG含量有关。其H^+H^+,H^+H^-和H^-H^-各基因型的TG含量分别为(2.31±1.60)、(1.59±0.89)和(1.46±0.43)mmol/L。P^+P^+,P^+P^-和P^-P^-各基因型的TG含量分别为(2.18±1.00)、(1.78±0.79)和(1.50±0.59)mmol/L(P<0.01)。二者均有一定的基因型剂量依赖关系。对照组基因型与TG含量无关。将全部研究对象以2.29 mmol/L为临界值分为低TG组和高TG组后,H^+等位基因在两组中分别为0.89和0.76(P<0.01)。P^+等位基因的分布在两组中差异没有显著性(P>0.25)。结论:天津地区脂蛋白脂酶Hind Ⅲ和Pvu Ⅱ基因多态位点以H^+和P^+为主,其等位基因频率分别为0.78和0.68。CHD的患者H^+基因型和P^+基因型对血浆TG含量有基因型剂量依赖关系。H^+等位基因在其它因素的参与下与血浆高TG水平的出?

纤维蛋白原Bβ链变异基因的体外重组

目的:采用基因重组技术将可能与血栓形成有关的纤维蛋白原Bβ链羧基端的KGD结构置换为EGS结构,提供一种简单方便的构建变异克隆的方法。方法:在含有正常BβcDNA的pMLP质粒(简称p668)的溶液中,加入变异引物、筛选引物和dNTP。在T4聚合酶和T4连接酶的作用下,合成除变异碱基外,其他碱基均与原正常Bβ链互补的变异Bβ链,经过两次在不同菌系的大肠杆菌中的表达与筛选,获取变异克隆。结果:由于变异克隆引入了BstBI这个新的酶切位点,可通过电泳证实变异克隆构建的成功与否,本研究经电泳及DNA序列分析证实重组体确系已含变异EGS结构的克隆。结论:本方法为一构建变异克隆的分子生物学技术,可用于任何克隆的构建。本研究成功地获得了纤维蛋白原Bβ链羧基端KGD转换为EGS的变异体。

载脂蛋白AI基因多态性与低α脂蛋白血症关系的研究

采用分析基因限制性内切酶片段长度多态性技术对96例冠心病患者和95例正常人载脂蛋白AI基因多态性进行检测,并对这一基因变化与高密度脂蛋白的关系进行研究。冠心病组中P_1P_2基因型血浆HDL和apoAI水平明显低于P_1P_1型,P_2等位基因与低α脂蛋白血症有较密切关系。携带P_2等位基因同时伴有血浆HDL和apoAI水平低下者,冠心病的发病率增高,并有早发心肌梗死的危险。

血清高密度脂蛋白胆固醇亚组分与冠心病的关系

采用国家卫生部医政司推荐的方法测定115例冠心病患者和55例健康成人血清高密度脂蛋白胆固醇亚组分(HDL_2-Ch)的含量。并用灵敏性和特异性两个指数将 HDL_2-Ch 与其它血清脂质、脂蛋白、载脂蛋白进行比较。各项脂质、脂蛋白和载脂蛋白的含量在病人组和健康组均有统计学差异(P<0.01)。其中 HDL_2-Ch 含量在病人组的改变最明显,其灵敏性为73%,特异性为93%。由于 HDL_2-Ch 测定方法简单,干扰因素少,不需昂贵的仪器,测定结果稳定,容易被临床检验部门采纳接受,故可作为冠心病发病危险因子的首选参考值。

基质金属蛋白酶基因多态性与冠心病的关系

目的:探讨基质金属蛋白酶基因MMP-3、MMP-9和MMP-12启动子基因多态性与冠心病及其血浆水平的关系。方法:对经冠状动脉(冠脉)造影证实的急性心肌梗死患者59例(AMI组)、稳定性心绞痛患者58例(SAP组)和99例经冠脉造影证实无冠状病变的对照组进行了研究。ELISA法检测血浆MMPs的水平,多聚酶链反应-限制性内切酶片段长度多态性法(PCR-RFLP法)分析MMP-3、MMP-9、MMP-12启动子的3个部位基因型变异状况和等位基因分布频率。结果:AMI组和SAP组血浆MMP-9水平明显高于对照组(P<0.05)。各组基因型和等位基因频率分布差异无统计学意义(P>0.05)。未检出MMP-12启动子的-82A/G变异的基因型。不同基因型之间血浆MMPs的水平差异无统计学意义(P>0.05)。结论:MMP-3和MMP-9启动子区域两个位点的基因变异不影响其血浆水平的表达。未发现天津地区MMP-12的-82位A/G变异的基因多态现象,血浆MMP-9水平升高与冠心病发病有关。

碳纳米管镀铜薄膜的抗菌性研究

本文用离子束辅助沉积(IBAD)方法在碳纳米管薄膜表面制备铜薄膜。用琼脂平板法测试了抗菌率,测试菌种为革兰氏阴性大肠杆菌(E.coil)和革兰氏阳性金黄色葡萄球菌(S.aureus);用扫描电子显微镜(SEM)观测了镀铜碳纳米管薄膜的微观形貌;用能量散射X射线谱(EDX)分析了镀铜碳纳米管薄膜表面元素的原子百分比;用X射线光电子能谱(XPS)分析了镀铜碳纳米管薄膜的表面元素的价态。研究结果表明,镀铜膜碳纳米管薄膜具有优良的抗菌性能,且比在热解碳上镀铜膜样品的抗菌性强。

西拉普利和缬沙坦对大鼠心肌梗死后心肌间质成分水平的干预研究

细胞外基质（ECM）是血管壁的主要成分，这些成分的合成和降解与动脉粥样硬化的发生发展密切相关，合成过多可造成血管狭窄，降解过多可诱发斑块破裂。心脏间质细胞（又称ECM成分）主要由Ⅰ型和Ⅲ型胶原构成的纤维网络组成，基质成分合成和降解的平衡受成纤维细胞分泌的基质金属蛋白酶（MMPs）和组织金属蛋白酶抑制剂（TIMPs）的调节。

甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与血浆同型半胱氨酸水平及冠心病的关系

目的:探讨甲基四氢叶酸还原酶基因多态性与血浆同型半胱氨酸水平及冠心病的关系。方法:对298例经冠脉造影证实为冠心病的患者及136例无冠心病者的对照组进行研究,检测血浆同型半胱氨酸水平,多项血脂含量及甲基四氢叶酸还原酶基因多态性。结果:基因型与冠心病严重程度不相关,对照组及有3支血管病变的冠心病病人A型及V型等位基因频率无显著性差异。VV型纯合子的血浆同型半胱氨酸含量明显高于AA型纯合子（P<0.005）。高同型半胱氨酸血症者V等位基因频率明显高于低同型半胱氨酸血症者（P<0.01）。血脂含量与同型半胱氨酸基因型无关。结论:血浆同型半胱氨酸含量与甲基四氢叶酸还原酶基因变异相关,其VV纯合子血浆同型半胱氨酸水平最高。此基因变异与冠心病严重程度无关。

同型半胱氨酸对人脐静脉内皮细胞MCP-1 mRNA表达的影响

目的:探讨同型半胱氨酸(Hcy)对人脐静脉内皮细胞单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)mRNA表达的影响。方法:人脐静脉内皮细胞CRL-1730融合至90%分别加入不同浓度Hcy:空白组0mmol/L、生理剂量组0.01mmol/L、病理剂量组0.1mmol/L、非毒性药理剂量组1.0mmol/L。毒性药理剂量组5.0mmol/L,分别刺激细胞6h,用1.0mmol/LHcy刺激内皮细胞1、6、24h;收集细胞提取总RNA,逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定Hcy对MCP-1mRNA的表达情况。结果:不同浓度Hcy刺激CRL-17306h,细胞内MCP-1mRNA表达差异有统计学意义(P<0.05)。与生理剂量组相比,非毒性药理剂量组MCP-1mRNA表达升高,毒性药理剂量组表达降低;1.0mmol/LHcy刺激CRL-1730不同时间后,MCP-1mRNA表达随刺激时间延长呈逐渐降低的趋势,24h表达量最低(P<0.01)。结论:Hcy可以影响人脐静脉内皮细胞MCP-1mRNA的表达,在动脉粥样硬化的发生过程中发挥重要的作用。

冠心病患者血管性血友病因子基因多态性及其血浆蛋白水平的研究

目的 :探讨血管性血友病因子 (vWF)基因Thr789Ala多态性及其血浆水平与冠心病的关系。方法 :应用限制性片段长度多态性分析法 ,分析201例汉族患者vWF基因Thr789Ala多态性特征和用免疫浊度法测血浆vWF水平。结果 :(1)冠心病组vWF水平高于非冠心病组 ,用配对资料比较排除冠心病的相关危险因素对vWF的影响后 ,vWF水平在两组差别无统计学意义。 (2)vWF基因多态性分析201例 ,其中Thr789纯合子型177例 ,Thr789Ala杂合子型24例 ,未见Ala789纯合子型。基因型分布、等位基因频率在冠心病组与非冠心病组差别无统计学意义。结论 :冠心病患者血浆vWF水平升高不是vWF -Thr789Ala单位点变异的结果 ,可能与高血压、糖尿病、高脂血症、高纤维蛋白原血症、性别、吸烟及其他基因因素等综合作用有关。

高浓度Hcy致血管内皮损伤的机制

目的:探讨高浓度同型半胱氨酸(homocysteine,Hcy)对人脐静脉内皮细胞(HUVEC)CRL-1730一氧化氮合酶(eNOS)mRNA表达的影响。方法:用不同浓度Hcy(0～5.0mmol/L)刺激HUVEC CRL-1730,分别作用1～24h,收集细胞,提取总RNA,逆转录得到cDNA,PCR扩增eNOS基因片段,2%琼脂糖凝胶电泳分离PCR产物,计算相对含量。结果:随着Hcy浓度增高HUVEC CRL-1730eNOS mRNA表达逐渐降低;随着Hcy作用时间的延长,HUVEC CRL-1730eNOS mRNA表达降低。病理浓度(0.1mmol/L)及毒性药理浓度(5.0mmol/L)Hcy与生理浓度Hcy(0.01mmol/L)相比可显著降低HUVEC CRL-1730eNOS mRNA的表达。结论:高浓度Hcy可能通过降低eNOS水平,减少NO合成,导致血管内皮功能损伤。

载脂蛋白AI基因多态性与冠心病和血脂关系的研究

目的 :探讨冠心病患者载脂蛋白(apo)AI基因多态性及其对血脂的影响。方法:应用聚合酶链反应对196例正常人和240例冠心病患者apoAI基因启动子多态性进行分析,扩增含apoAI基因启动子 -75bp 和第一内含子 +83bp的DNA片段,限制性内切酶MspI酶切此片段,琼脂糖凝胶电泳分离基因多态性。结果:2组apoAI基因 -75bp 位点均为G/G基因型占优势,但冠心病组中A/A基因型显著低于对照组(P<0.05) ,2组间 -75bp 位点A、G等位基因频率差别无统计学意义。在男性冠心病患者中 ,A/A基因型携带者血清高密度脂蛋白(HDL)水平显著低于G/G基因型携带者(P<0.05)。2组 +83bp 位点中基因型与等位基因频率差别均无统计学意义。结论:apoAI基因启动子( -75bp)MspI酶切位点的突变与冠心病有一定关联,在冠心病男性患者中,A/A基因型携带者与血清HDL的降低有一定相关性。

冠心病患者小密低密度脂蛋白与胆固醇酯转运蛋白基因多态性的关系

目的 :探讨小密低密度脂蛋白(sLDL)和胆固醇酯转运蛋白(CETP)在冠心病发病中的作用。方法:测定经冠状动脉造影确诊的冠心病患者 (冠心病组 )及无冠脉病变者 (对照组 )血浆中sLDL在LDL中所占的比例 ,并分析CETP基因中TaqIB的基因多态性。结果:(1)冠心病组sLDL水平明显高于对照组 (P<0.01)。sLDL水平与冠状动脉病变程度 (冠脉狭窄分数 )呈正相关(r=0.452,P<0.01)。(2)CETPTaqIB基因突变可使高密度脂蛋白 (HDL)水平升高 (P<0.05)。B1B1 基因型的HDL水平明显低于B2B2 型 (P<0.05)。冠心病组甘油三酯水平较高 ,B2B2 型sLDL水平显著低于B1B1 型和B1B2 型 (P<0.05)。(3)2组CETP的基因型和等位基因频率分布无明显差异 (P>0.05)。结论 :(1)sLDL是冠心病发病的一个独立危险因素。 (2)CETPTaqIB基因突变可使HDL水平升高。高甘油三酯血症时TaqIB基因突变导致CETP活性下降进而影响sLDL水平。(3)CETPTaqIB基因多态性与冠心病的发病无显著相关 。

胆固醇酯转运蛋白TaqIB基因多态性在冠心病发病中的作用

目的 :探讨胆固醇酯转运蛋白(CETP)TaqIB基因多态性在冠心病发病中的作用。方法:经冠状动脉造影确诊为冠心病的患者(冠心病组)234例及无冠脉病变的对照者(对照组)164例,以酶法检测血浆中胆固醇(TC)、甘油三酯(TG)、高密度脂蛋白(HDL)和低密度脂蛋白(LDL)的水平,以多聚酶链反应 限制性内切酶片段长度多态性(PCR RFLP)分析CETP基因中TaqIB的基因多态性。结果:(1)冠心病组TC、TG、LDL水平明显高于对照组(P<0.05),HDL水平明显低于对照组(P<0.05)。(2)CETPTaqIB基因突变可使HDL水平升高(P<0.01),在3种基因型中(B1B1、B1B2、B2B2),只有B2B2 基因型的HDL水平明显高于B1B1 基因型(P<0.05)。(3)冠心病组与对照组CETP的基因型和等位基因频率分布无明显差异(P>0.05)。结论:CETPTaqIB基因突变可使HDL水平升高,但对TC、TG、LDL无显著影响;

雌二醇对HepG_2细胞载脂蛋白AⅠmRNA表达的影响

目的:探讨雌激素对人肝癌细胞株HepG2细胞载脂蛋白(Apo)AⅠmRNA表达的影响。方法:分别将0.01、0.1、1.0、10.0、20.0μmol/L的雌二醇(E2)与体外培养的HepG2细胞共同孵育24h;选用10μmol/L的E2与HepG2细胞共同孵育0、1、6、24、48h;收集细胞提取总RNA,采用逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)测定ApoAⅠmRNA表达水平。结果:随E2浓度的增加,HepG2细胞内ApoAⅠmRNA表达呈现先升高后降低的趋势,以10μmol/L时表达最高,与空白组及0.01、0.1、1.0μmol/L组相比差异有统计学意义(P<0.05),20μmol/L时ApoAⅠmRNA表达降低;时间刺激试验显示随刺激时间的延长,HepG2细胞中ApoAⅠmRNA表达呈现先升高后降低的趋势,刺激24h后表达水平最高,48h后下降。结论:E2可在转录水平调节ApoAⅠ基因表达,并呈现部分的剂量和时间依赖性。

Ad-VEGF_(121)和Ad-VEGF_(165)重组腺病毒的构建和制备

目的:以pAdEasy-1缺陷性腺病毒系统为载体构建用于实验动物模型基因治疗的Ad-VEGF121和Ad-VEGF165重组腺病毒。方法:采用RT-PCR方法从人心肌组织中扩增获得VEGF121、VEGF165cDNA片段,分别插入pUCm-T载体构成pUC-VEGFs;限制性内切酶SalⅠ、KpnⅠ切下目的基因片段,插入pAdTrack-CMV载体相应的多克隆位点构成pAdTrack-CMV-VEGFs。电转法将被PmeⅠ切成线性的pAdTrack-CMV-VEGFs转入E coli BJ5183,与其中的pAdEasy-1同源重组成pAdEasy-VEGFs。阳离子脂质体法将被PacⅠ线性化的重组子转染293T细胞进行腺病毒包装。转染后7～11d可在荧光显微镜下观察到绿色荧光蛋白(GFP)呈彗星状,收集细胞反复冻融获得含重组腺病毒的上清液。感染293T细胞3～4次,待细胞出现细胞病变效应(CPE)时收获腺病毒(Ad-VEGFs),并用CsCl密度梯度超速离心进行纯化。结果:重组腺病毒在电镜下呈多面体,形态完整;Ad-VEGF121和Ad-VEGF165病毒滴度分别达到1.155×1012和1.281 5×1012 V.P/mL。结论:利用pAdEasy-1缺陷性腺病毒系统构建携带目的基因的重组腺病毒方法较简便,易掌握。获得的重组腺病毒纯度高、滴度高,适用于实验动物模型和体外培养细胞的基因治疗。

风湿性心脏瓣膜病心房颤动患者心房结构重构及胶原的表达

目的检测风湿性心脏瓣膜病心房颤动患者心房结构重构及胶原的表达,探讨胶原在心房结构重构中的意义。方法选择行开胸心脏手术的风湿性心脏瓣膜病患者39例,将持续性心房颤动患者24例为房颤组,窦性心律患者15例为窦律组。取患者心房组织标本,应用HE染色及Masson染色进行组织学检查;免疫组织化学法检测心房组织中Ⅰ型、Ⅲ型胶原蛋白的表达。结果房颤组患者较窦律组左心房内径明显增大。房颤组患者心房有肌溶解、心肌肥厚及广泛间质纤维化的改变。与窦律组比较,房颤组患者的左、右心房组织胶原容积分数均明显增大,左、右心房Ⅰ型胶原蛋白的表达明显增加(P<0.05),而Ⅲ型胶原蛋白表达无明显差异(P>0.05)。结论心房颤动患者心房结构发生明显的病理改变,其中心房间质纤维化为主要特征,左心房改变最为明显。

内皮型一氧化氮合酶基因G894T多态性与颈动脉粥样硬化的相关性

目的探讨天津市汉族老年人群内皮型一氧化氮合酶(eNOS)基因G894T多态性与颈动脉粥样硬化(CAS)的关联性。方法选择接受颈动脉超声检查患者427例,根据超声检查结果分为CAS组1 30例和对照组297例。采用PCR-RFLP方法分析G894T多态性基因型,同时对所有对象检验血脂等危险因素。结果 CAS组基因型GT、GT+TT和T等位基因频率明显高于对照组(P<0.05,P<0.01)。调整了年龄和性别后,基因型GT+TT与CAS的关联差异有统计学意义(OR=1.89,95%CI:1.20～2.98,P=0.007)。对其他危险因素调整后,logistic回归分析,基因型GT+TT不是CAS的独立危险因素(OR=1.43,95%CI:0.85～2.40,P=0.1 78)。在CAS组中,不同斑块类型的分布、斑块总面积和Crouse积分在T等位基因携带者与非携带者差异无统计学意义(P>0.05)。结论 eNOS基因G894T多态性的基因型GT+TT与CAS的发生相关,但不是CAS的独立危险因素,与CAS的严重程度亦无关联。

急性心肌梗死模型大鼠经血管内皮生长因子121基因治疗后的血管新生(英文)

背景:血管内皮生长因子121可能是基因治疗急性心肌梗死的合适目的基因之一。目的:观察直接心肌注射重组腺病毒人血管内皮生长因子121基因(Ad-hVEGF121)对心肌梗死大鼠心脏结构、功能及新生血管影响。方法:将78只SD大鼠随机分为假手术组(n=18)、心肌梗死组(n=24)、Ad-hVEGF121组(n=19)和生理盐水组(n=17),后3组大鼠经结扎左冠状动脉前降支,建立急性心肌梗死模型。Ad-hVEGF121组和生理盐水组结扎后10～15min分别在心肌三点注射Ad-hVEGF12和生理盐水。假手术组只开胸,不结扎左冠状动脉前降支。结果与结论:注射后2周治疗组行心脏超声检查,发现相比于假手术组,心肌梗死组、Ad-hVEGF121组和生理盐水组大鼠心肌新生毛细血管数量、体质量和左心室质量/体质量明显增加(P<0.05或P<0.01),且转染rAd-VEGF基因后心肌组织毛细血管密度显著高于生理盐水组和心肌梗死组。但4组大鼠的梗死面积、心脏结构和功能接近。提示直接心肌注射Ad-VEGF121能明显促进心肌内新血管形成。

重组变异纤维蛋白原体外表达及对凝血功能的影响

目的:采用基因重组技术和细胞培养方法制备纤维蛋白原（Fbg）β链K 318E/D 320 S变异蛋白,观察此变异蛋白对凝血反应的影响。方法:用Site-directed mutagenesis方法构建变异重组质粒;磷酸钙法将此质粒转染CHO细胞;经细胞培养表达变异蛋白;硫酸铵沉淀法和免疫亲和层析法获取蛋白。进行纤维蛋白多肽A、B释放实验和在3种Ca2+浓度下的纤维蛋白聚合实验,并评价此变异蛋白的功能。结果:变异与正常Fbg纤维蛋白多肽A、B释放实验无差异。纤维蛋白聚合实验显示,在不同Ca2+条件下两者间Lag period,Vmax和最终光密度均有显著性差异（P<0.05）。结论:B β链变异蛋白可能引起Fbg D区结构的变化,使纤维蛋白聚合位点和Ca2+结合位点不能发挥正常功能,致使纤维蛋白聚合反应速度减慢及纤维蛋白纤维粗细出现异常。