改革教学方法,提高医学微生物学实验教学质量

医学微生物学实验是医学微生物学教学的重要组成部分,是理论与实践研究的技术基础。为了提高医学微生物学实验教学质量,使学生更好地掌握实验操作技能和理论知识,培养具有创新能力的专业人才,对实验课教学内容、教学手段以及实验准备等方面进行了改革和初步探讨。

细胞融合过程的透射电镜观察

用布氏菌 S_2免疫的小鼠脾淋巴细胞与NS-1骨髓瘤细胞以 PEG1000 融合,通过透射电镜观察融合过程中淋巴细胞与瘤细胞、瘤细胞与瘤细胞、淋巴细胞与淋巴细胞等3种不同情况的细胞融合现象,以及其融合而形成的形态各异的合体细胞。

红景天苷对糖尿病肾病大鼠的治疗作用及其机制探讨

目的观察红景天苷对糖尿病肾病(DN)大鼠的治疗作用,并探讨其作用机制。方法将24只大鼠随机分为对照组、DN组和治疗组,每组8只。治疗组和DN组腹腔注射链脲佐菌素制备DN模型,造模成功后分别给予红景天苷及等量生理盐水灌胃;对照组腹腔注射等量柠檬酸缓冲液,并给予等量生理盐水灌胃。连续灌胃10周后,腹主动脉采血检测血糖、血尿素氮(BUN)、肌酐(Scr)、白细胞介素1β(IL-1β)、肿瘤坏死因子α(TNF-α);处死后取肾组织,采用分光光度法检测肾组织中的SOD和MDA,免疫印迹法检测肾组织中磷酸化的蛋白激酶B(Akt)和糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)蛋白。结果与对照组相比,DN组血糖、BUN、Scr、IL-1β、TNF-α水平和肾组织中MDA活性升高,而肾组织中SOD活性及Akt、GSK-3β蛋白磷酸化水平降低(P均<0.05);与DN组相比,治疗组血糖、BUN、Scr、IL-1β、TNF-α水平和肾组织MDA活性降低,而肾组织中SOD活性及Akt、GSK-3β蛋白磷酸化水平增加(P均<0.05)。结论红景天苷可能通过活化Akt/GSK-3β信号通路,控制血糖、炎症和氧化应激反应,从而对DN发挥治疗作用。

细胞因子在骨性关节炎中的表达与应用

背景:骨性关节炎是生物学、生物化学、分子生物学、酶的反馈作用等复杂的多种机制相互作用的结果,其病理过程与细胞因子密切相关。目的:总结细胞因子在骨性关节炎发生、发展过程中作用的研究现状。方法:由第一作者用计算机检索万方数据库(2000至2012年)和PubMed数据库(2000至2012年)收录的细胞因子与骨性关节炎相关论文报告。结果与结论:共纳入细胞因子与骨性关节炎相关文献69篇。细胞因子在骨性关节炎发生、发展过程中起重要作用,能促进骨性关节炎软骨降解、滑膜炎症及软骨下骨的吸收,部分细胞因子也有抑制骨性关节炎病变发展的作用。与分解代谢有关的细胞因子主要有基质金属蛋白酶;与合成代谢有关的细胞因子主要有转化生长因子,骨形态发生蛋白,胰岛素样生长因子,成纤维细胞生长因子和血管内皮细胞生长因子;在关节组织中发现的影响细胞功能的炎性因子包括白细胞介素、趋化因子和肿瘤坏死因子等。但细胞因子在骨性关节炎发生、发展过程中作用机制及临床应用需要进一步研究。

珍珠梅黄酮固体脂质纳米粒的制备工艺

目的探讨珍珠梅黄酮固体脂质纳米粒的制备工艺。方法以硬脂酸为载体,以珍珠梅黄酮为模型药物,采用乳化蒸发-低温固化法制备固体脂质纳米粒。采用透射电镜研究载药纳米粒形态,激光粒度分析仪测定其粒径,X射线衍射仪进行物相鉴别,并对纳米粒的包封率及体外释药特性等进行了研究。结果实验制备珍珠梅黄酮固体纳米粒为类球实体,粒径分布比较均匀,药物以分子或细小粒子分散于脂质骨架中。体外释药研究表明,纳米粒体外释药先快后慢,包封于降解材料骨架内的药物通过骨架溶蚀缓慢释放。结论采用乳化-低温固化法制备TTF1可生物降解纳米粒,制备工艺简单,平均粒径和包封率较为理想,所制备纳米粒具有明显的缓释作用。

延边地区膝骨性关节炎患者滑膜组织基因谱的表达

背景:原发性骨性关节炎的发展是多种相关基因表达失常的缘故。采用mRNA基因表达谱芯片技术,检测膝关节骨性关节炎滑膜差异表达基因,有助于阐明骨性关节炎病理过程的相关机制。目的:比较延边地区膝关节骨性关节炎和正常关节滑膜的基因表达谱变化,筛选出与膝关节骨性关节炎相关的差异表达基因,并探讨其在骨性关节炎发病机制中的意义。方法:选择延边地区原发性膝关节骨性关节炎患者9例及正常对照者3例,应用mRNA基因表达谱芯片技术检测所获得的滑膜组织中表达差异的基因,筛选出表达差异基因并对其进行GO分析。结果与结论:膝关节骨性关节炎及正常对照者滑膜的差异表达基因分析结果显示,延边地区膝关节骨关节炎滑膜中的差异表达基因共有1261个,其中上调的基因有451个,下调的基因有810个。差异表达基因GO统计分析显示,信号转导、翻译调节、趋化作用、炎症应答、细胞增殖等多种基因的表达有差异。基因芯片技术能有效地筛选出骨性关节炎差异表达的基因,并进一步证实了骨性关节炎的病理过程是多种功能基因参与的复杂的病理过程。

改良AMU多器官保存液家兔多器官保存效果的形态学评价

目的:研制适合国内自行配制,降低成本,增加保存效果同时方便储存、运输和使用的长效而广谱的多器官保存液。方法:改进的三磷酸腺苷-氯化镁-尿激酶(AMU)保存液组成主要包括:乳糖醛酸(100mmol.L-1)、三磷酸腺苷二钠(5mmol.L-1)、氯化镁(5mmol.L-1)、磷酸二氢钾(25mmol.L-1)、蔗糖(60mmol.L-1)、低分子右旋糖酐-60(50g.L-1)、还原型谷胱苷肽(3mmol.L-1)、尿激酶(2万U.L-1)、地塞米松(20mg·mL-1)、异搏定(20mg·mL-1)、氢氧化钾(100mmol.L-1);威斯康星大学(UW)保存液成分主要包括:乳糖醛酸(100mmol.L-1)、羟乙基淀粉(50g.L-1)、木棉糖(30mmol.L-1)、磷酸二氢钾(25mmol.L-1)、还原型谷胱苷肽(3mmol.L-1)、别嘌呤醇(1mmol.L-1)、腺苷(5mmol.L-1)等。分别以AMU和UW灌注以后,从同一动物(兔)同时获取的心、肝、肾、肺各分别保存48、48、96和12h,观察2种保存液对家兔心脏、肝脏、肾脏和肺脏的低温保存过程中组织形态学的影响,以确定AMU保存液的效果。结果:心脏保存48h,肝脏保存36h,肾脏保存72h,AMU液与UW液比较,光镜下组织结构和电镜下超微结构的变化基本相同;肝脏保存48h,肾脏保存96h,AMU液在光镜及电镜下结构变化重于UW液。结论:AMU液对心脏保存48h、肝脏保存36h、肾脏保存72h、肺脏保存12h与UW的保存效果相同;肝脏保存48h、肾脏保存96hAMU液不如UW液。AMU液对各脏器有效保存时间内与UW液比较无明显差异,AMU液保存效果与UW液基本一致。

C型钠尿肽对肾缺血再灌注大鼠肾功能和肾组织细胞凋亡的影响及机制

目的观察C型钠尿肽(CNP)对肾缺血再灌注损伤大鼠肾功能、肾组织细胞凋亡的影响,并探讨其机制。方法将24只雄性Wistrar大鼠随机分为Sham组、IR组和CNP组,每组8只。各组大鼠均摘除左侧肾脏,IR组和CNP组用无创性小血管夹夹闭右肾动静脉,45 min后取下血管夹恢复肾脏血供,并分别于夹闭右肾动静脉的同时即刻持续缓慢输注生理盐水约2 mL、CNP 0.2μmol/(kg·min)至再灌注2 h;Sham组不夹闭右肾动静脉。再灌注24 h后取血测定血清肌酐(Cr)、尿素氮(BUN),取右肾以ELISA法测定肾组织环磷酸鸟苷(cGMP),TUNEL染色检测肾脏织的凋亡细胞,Western blot法检测肾脏组织蛋白激酶B(Akt)和β糖原合成酶激酶3β(GSK-3β)蛋白及其磷酸化蛋白。结果与Sham组比较,IR组大鼠血清Cr和BUN水平均升高(P均<0.01),肾组织cGMP浓度降低、细胞凋亡率升高(P均<0.05),肾组织中Akt、GSK-3蛋白磷酸化水平均降低(P均<0.01);与IR组比较,CNP组大鼠血清Cr和BUN水平均降低(P均<0.05),肾组织cGMP浓度升高、细胞凋亡率降低(P均<0.05),肾组织中Akt、GSK-3蛋白磷酸化水平均升高(P均<0.01)。结论 CNP减轻肾脏缺血再灌注大鼠肾功能损伤及肾脏组织细胞凋亡,其机制可能与提高肾组织cGMP水平,进而提高Akt和GSK-3β蛋白磷酸化有关。

续断对兔骨缺损修复中BMP-2基因表达的影响

[目的]观察续断在兔桡骨骨缺损修复过程中对BMP-2基因表达的影响.[方法]取30只家兔随机分成5个组,在双侧桡骨中段制作20mm长骨缺损模型.取自体松质骨颗粒,植骨于骨缺损处.实验组用续断按照20g/kg剂量混合于饲料中喂养,对照组单纯喂养饲料.于术后1,2,4,6,8周行X线检查后取骨痂用免疫组织化学及Real Time RT-PCR方法检测BMP-2基因的表达变化.[结果]实验组1周时BMP-2呈弱阳性表达,2周时呈阳性表达,4周时呈强阳性表达,6周及8周时呈阳性表达.对照组4周时呈阳性表达外1,2,6,8周时均呈弱阳性表达.实验组1周时较对照组BMP-2基因表达量无明显差异,2,4,6,8周时实验组BMP-2基因表达量均较对照组明显增加(P<0.05),4周时表达量增加最明显.[结论]续断在骨缺损修复过程中有明显的增加BMP-2基因表达的作用,可促进骨缺损的修复.

以精品课程建设为平台,提高创新型人才培养质量

精品课程建设是教育部＂高等学校教学质量与教学改革工程＂的重要内容之一,是推进教育创新、深化改革、共享优质教学资源及全面提高教育教学质量的具体措施[1].要做好精品课程建设工作就应抓好人才培养质量,以提高学生竞争能力为重点,整合各类教学改革成果。

IL-24对小鼠黑色素瘤B16细胞的抑制作用

[目的]研究携带IL-24基因的真核表达质粒对小鼠黑色素瘤B16细胞的凋亡和体外增殖的影响.[方法]采用重组DNA技术构建含有IL-24基因的真核表达质粒pEGFP-N1-IL-24,用脂质体法将pEGFP-N1-IL-24转染B16细胞,用荧光显微镜观察其表达,在生物显微镜下观察细胞的形态学变化,用吖啶橙/溴化乙锭(AO/EB)法检测细胞凋亡,用MTT比色法检测B16细胞的体外增殖能力.[结果]荧光显微镜下观察到pEGFP-N1-IL-24可在B16细胞中表达;生物显微镜下显示转染IL-24基因的B16细胞皱缩、成团;AO/EB法检测显示转染IL-24的B16细胞核染色质着橘黄色或橙红色,并呈固缩状;MTT比色法显示IL-24明显抑制B16细胞的生长,与对照组相比较差异有统计学意义(P<0.05).[结论]外源性IL-24基因在体外对小鼠黑色素瘤B16细胞有显著的诱导凋亡和抑制增殖的作用.

白细胞介素-12基因治疗肿瘤及抑制肝转移

[目的]探讨经静脉转染表达mIL-12的DNA质粒在肿瘤的治疗及抑制肝转移中的作用.[方法]经皮下和腹腔接种M5076细胞建立荷瘤模型,用水流动力学方法将mIL-12基因转染荷瘤C57BL/6小鼠,观察实验组与对照组的生存率及肿瘤转移灶数目,用ELISA法检测血清中细胞因子水平,用小鼠脾细胞的细胞毒性实验评价CTL和NK细胞活性.[结果]转染pGEG.mIL-12小鼠血清中白细胞介素-12(IL-12)及IFN-γ水平明显升高.经皮下接种肿瘤细胞建立荷瘤模型的转染pGEG.mIL-12小鼠组抑制肿瘤细胞作用、抑制肿瘤细胞肝转移和生存时间与对照组相比较差异均有统计学意义.经腹腔接种肿瘤细胞建立荷瘤模型转染pGEG.mIL-12小鼠组与对照组相比较明显抑制腹腔内肿瘤播散,延长生存时间,差异有统计学意义.M5076细胞对转染pGEG.mIL-12小鼠脾细胞的CTL和NK细胞破瘤细胞活性均不敏感.[结论]用水流动力学方法转染小鼠细胞因子基因产生的高水平IL-12对CTL不敏感的M5076肿瘤有治疗和抑制肝转移的作用.

桦褐孔菌多糖对脂多糖刺激小鼠巨噬细胞促炎性细胞因子表达的影响

[目的]观察桦褐孔菌多糖对脂多糖(LPS)刺激小鼠巨噬细胞株Raw264.7细胞与小鼠腹腔巨噬细胞促炎性细胞因子表达的影响.[方法]利用桦褐孔菌多糖(40mg/L)处理被LPS(100μg/L)刺激的Raw264.7细胞株和小鼠腹腔巨噬细胞,采用半定量RT-PCR方法测定促炎性细胞因子肿瘤坏死因子(TNF)-α和白细胞介素(IL)-1βmRNA的表达;采用ELISA法测定TNF-α和IL-1β水平.[结果]与给予LPS刺激相比较,给予桦褐孔菌多糖和LPS同时刺激的Raw264.7细胞株和小鼠腹腔巨噬细胞促炎性细胞因子TNF-α和IL-1βmRNA表达水平均明显降低(P<0.05);给予桦褐孔菌多糖和LPS同时刺激的Raw264.7细胞株在48 h后与只给予LPS刺激相比较,细胞所分泌的促炎性细胞因子TNF-α和IL-1β水平均明显下降(P<0.05).[结论]桦褐孔菌多糖对LPS刺激Raw264.7细胞株和小鼠腹腔巨噬细胞促炎性细胞因子TNF-α和IL-1βmRNA表达水平及Raw264.7细胞株促炎性细胞因子TNF-α和IL-1β的分泌均有抑制作用.

编码糖蛋白B的裸基因疫苗诱导单纯疱疹病毒Ⅰ型感染小鼠的体液和细胞免疫

[目的]用编码单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)糖蛋白B的pDNA转染小鼠,研究基因疫苗治疗感染性疾病的有效性,并分析免疫反应.[方法]采用血管内注射方法,将含有不同剂量、不同pDNAs的生理盐水注入Balb/c小鼠体内,1周后行再次免疫,观察以不同组合pDNA进行免疫的实验组和对照组小鼠被致死剂量HSV-1感染后生存率间的差异.通过潜伏感染的检测、血清中细胞因子水平的测定、细胞毒性反应的测定及中和实验评价免疫效果.[结果]接种pG.gB或接种pGEG.gB的小鼠,与相应对照组比较,生存率和诱导产生中和抗体的效价与剂量呈正相关,pGEG.gB免疫组对P815.gB细胞有显著的细胞毒性作用,pGEG.gB免疫小鼠的脾细胞增殖反应显著强于pG.gB免疫的小鼠;pG.gB和pGEG.gB免疫后的小鼠血清中IL-12和IFN-γ水平均显著升高.[结论]裸pDNA的经小鼠尾静脉免疫可诱导HSV-1感染小鼠的体液和细胞免疫应答,对小鼠HSV-1急性感染有明显的预防和治疗作用,且含有EBNA1和oriP的EBV质粒载体明显增强CTL活性和增殖反应.

浅议优秀教学团队的培养与精品课程建设的关系

探讨精品课程的建设与优秀教学团队的培养之间的相互关系和意义,明确了精品课程的建设是优秀团队建立的基础和平台,优秀团队的培养是精品课程建设的条件和保障。两者之间是互为条件、相互促进的关系,为精品课程的建设和发展提供参考。

白细胞介素-12基因治疗急性感染单纯疱疹病毒小鼠实验研究

[目的]探讨经静脉转染表达mIL-12的DNA质粒对小鼠1型单纯疱疹病毒(HSV-1)急性感染的预防和治疗作用.[方法]经腹腔接种HSV-1建立小鼠模型,用水流动力学方法将mIL-12基因转染Balb/c小鼠,比较观察实验组与对照组生存率,用ELISA法检测血清中细胞因子水平,用小鼠脾细胞评价细胞毒T细胞(CTL)和淋巴细胞增殖反应.[结果]与对照组比较,转染pGEG.mIL-12组小鼠生存率明显提高,血清中白细胞介素12(IL-12)及γ干扰素(IFN-γ)质量浓度明显升高,脾淋巴细胞增殖反应明显增强,而对特异性P815.gB细胞的CTL水平未见提高.[结论]用水流动力学方法转染小鼠IL-12基因对小鼠HSV-1急性感染有预防和治疗作用.

医学微生物学与免疫学精品课程建设探讨

精品课程是指具有特色和一流教学水平的示范性课程,精品课程建设是教育部实施"质量工程"的重要内容之一。分析和总结了对医学微生物学与免疫学精品课程多年(2003-2009年)建设的情况及已取得的成就,进一步提出精品课程建设是高等学校提高教学质量的重要组成部分。

自制AMU液对低温保存兔肾氧自由基表达的影响

目的观察自制AMU液对低温保存兔肾氧自由基表达的影响。方法分别采用HCA液、AMU液保存兔肾(HCA组和AMU组)。于保存24、48、72 h时切取肾皮质,分别用硫代巴比妥酸法(TBA法)和黄嘌呤氧化酶法检测肾皮质丙二醛(MDA)含量和超氧化物歧化酶(SOD)活力。结果随保存时间延长,两组SOD活力均下降、MDA含量均上升,但保存48、72 h时AMU组SOD活力明显高于HCA组(P均<0.05),保存各时点AMU组MDA含量低于HCA组(P均<0.05)。结论在阻止低温保存兔肾SOD活力下降及MDA含量上升方面,AMU液优于HCA液。

血管内转染IL-18基因对急性感染单纯疱疹病毒小鼠的治疗作用

[目的]探讨经静脉转染表达mIL-18的DNA质粒对Ⅰ型单纯疱疹病毒(HSV-1)急性感染小鼠的预防和治疗作用.[方法]经腹腔接种HSV-1建立小鼠感染模型,采用水流动力学方法将mIL-18基因转染Balb/c小鼠,比较观察实验组与对照组的生存率、血清中细胞因子水平、CTL和淋巴细胞增殖反应.[结果]转染pGEG.mIL-18的小鼠血清中IL-18及IFN-γ水平明显升高;转染pGEG.mIL-18小鼠组生存时间与对照组相比较差异具有统计学意义(P<0.005);转染pGEG.mIL-18小鼠脾淋巴细胞增殖反应明显增强,而对特异性P815.gB细胞的CTL水平无提高作用.[结论]用水流动力学方法转染小鼠IL-18基因对小鼠HSV-1急性感染有预防和治疗作用.